高效液相色谱法测定消溶排石合剂中绿原酸的含量

黄 健

江苏省南通市启东市中医院，江苏 启东 226200

消溶排石合剂由金钱草，六一散，海金沙，鸡内金，威灵仙，炮山甲，生地逾，冬葵子等中药组成，具有清湿热、利尿、排石等功效，在本院应用多年，证明对尿路结石、胆结石等疾病有效。为了控制消溶排石合剂的质量，保证临床用药效果，本实验建立了HPLC测定消溶排石合剂中绿原酸含量的方法。经方法学考察证实该方法特异性高，回收率和精密度好，结果满意。

1 仪器与试药

1.1 仪器

高效液相色谱仪系统包括高效液相色谱仪 (Waters 515);P200高压泵;Waters 2487紫外检测器及GJ605型高压六通进样阀;色谱柱 (Hanbang C－18);数据采集及处理采用HS色谱数据工作站V4.0+(杭州英谱科技)

1.2 试药

绿原酸对照品，中国药品生物制品检定所 (批号：110753－200413);消溶排石合剂 (批号：20100512，20090522，20090725，20090730)由本院自制;其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验［1]

色谱柱：HangBang C18(200*4.6mm 5μm);流动相：乙腈－0.4%磷酸溶液 (11：89v/v);使用前以0.45μM微孔滤膜减压过滤，检测波长为UV327nm;流速为1.0ml/min。此条件下绿原酸峰与相邻峰分离度＞1.5，理论塔板数按绿原酸峰计算应不低于2500。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取绿原酸对照品10.61mg，置100 mL量瓶中，加流动相超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得0.1061mg/ml对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

精密吸取本品50ml(5支)置100 mL容量瓶中，加甲醇40mL，密塞，摇匀，超声处理 (功率 300W，频率50Hz)30分钟，放冷，用流动相稀释至刻度，摇匀，用0.45μM微孔滤膜减压过滤，取续滤液作为供试品溶液。

2.4 线性关系

取对照品溶液，分别进样5、10、15、20、25μL，即相当于绿原酸0.531，1.062，1.593，2.124，2.655μg的对照品溶液，测定峰面积，以绿原酸质量为横坐标、峰面积为纵坐标，进行线性回归，得回归方程以及线性范围，分别为：Y=165748.2646X+827.6242，r=0.9998，绿原酸进样量在0.531～2.655μg范围内峰面积与进样量呈良好线性。

2.5 加样回收率

精密吸取已知含量的样品溶液5份，分别置50 mL量瓶中，每份精密加入一定量对照品溶液，然后用流动相稀释到刻度，照含量测定方法操作，计算回收率。结果见表1。

表1 消溶排石合剂加样回收率试验结果

2.6 进样精密度试验

在上述色谱条件下，取绿原酸对照品溶液重复进样8次20μL，记录峰面积，RSD为0.82%。

2.7 重复性试验

精密称取同一批号的样品 (批号：20100312)按照样品测定的方法重复操作8次，测得绿原酸平均含量和RSD，结果表明，重复性试验RSD为1.52%，表明本法重现性很好。

2.8 稳定性试验

取样品 (批号：20100512)新配的供试品溶液分别在0、2、4、8、16、24 h进样20μL，测定其中绿原酸的峰面积，结果RSD为1.71% ，表明供试品溶液在24 h稳定。

2.9 样品测定

取4批样品，按上述供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，依上述色谱条件测定含量，分别进样10μL，记录色谱图，按外标法计算样品中绿原酸的含量。结果见表2。

表2 HPLC测定消溶排石合剂的含量结果

3 讨论

3.1 根据所测四批样品的含量结果，消溶排石合剂中绿原酸的平均含量为1.557mg/支，因此可规定消溶排石合剂中绿原酸 (C16H18O9)不得少于1.40mg/支。

3.2 提取方法的选择 本实验曾用几种方法处理样品，结果以本文拟订的方法结果最好，且操作简便，故选用此法。

3.3 检测波长的选择 绿原酸的分子光谱仅在327nm处有一中等强度的吸收峰，故选择327nm为检测波长。

3.4 流动相的选择 先后试验了乙腈－水 (56：44 v/v)，甲醇－水 (45：55 v/v)，结果用乙腈 －0.4%磷酸溶液(11：89v/v)绿原酸的分离效果最好，本实验用乙腈－0.4%磷酸溶液 (11：89v/v)为流动相，流速为1.0ml/min。经过方法学考察，证明该方法稳定，具有良好的专属性，可以作为消溶排石合剂质量控制方法之一。

［1]任贻军，周菁丽，李纪元，高逢喜，等．HPLC法测定排石康颗粒中绿原酸的含量［J]．中国药师，2009，12(9)：1277－1278．