HPLC法测定洁尔阴洗液中蛇床子素的含量

顾瑶华 俞迪佳

苏州卫生职业技术学院，江苏 苏州 215009

洁尔阴洗液由蛇床子、艾叶、独活、石菖蒲等药材组成，具有清热燥湿、杀虫止痒的功效。蛇床子作为该制剂的主药之一，其有效成分主要为蛇床子素。为了更好地控制该洗液的质量，本实验采用HPLC法测定该制剂中蛇床子素的含量。

1 仪器与试药

Aglient1100高效液相色谱仪 (包括G1311A四元泵，G1315B DAD检测器，G1322在线脱气机，7725i手动进样器)，Aglient HPLC系统化学工作站，KQ－500B超声波清洗器，Sartorius电子天平 (型号：CP225D)，甲醇 (色谱纯)，水为超纯水，其余试剂为分析纯，对照品蛇床子素为自制，经HPLC面积归一化法标定质量分数为99.08%。洁尔阴洗液 (成都恩威制药有限公司，批号0805098，0810027，0811036)。

2 方法与结果

2.1 色谱方法

色谱柱：Zorbax SB－C18(250μm ×4.6 mm，5.0μm);流动相：甲醇∶水 (80∶20);检测波长：323nm;柱温：30℃;流速：0.8mL/min。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备

精密称取干燥至恒重的蛇床子素对照品约10mg，置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。

2.2.2 供试品溶液的制备

精密量取本品20ml，用乙醚提取3次，每次30ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过微孔滤膜 (0.45μm)，取续滤液作为供试品溶液。

2.2.3 阴性样品溶液的制备

按处方比例称取除蛇床子外的各药，并按标准工艺制备缺蛇床子的阴性样品溶液，按上述供试品溶液制备方法制成阴性样品溶液。

2.3 系统适用性试验

在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液各20μL，注入液相色谱仪。蛇床子素的保留时间为7.8min，样品色谱图中，在与对照品色谱图相应保留时间处，有相同的色谱峰，而阴性样品溶液在此处无干扰，色谱峰见图1。

2.4 线性关系考察

分别精密吸取对照品溶液1，2，4，6，8mL，置50mL容量瓶里，用甲醇定容至刻度，摇匀，分别吸取20μL进样测定，记录色谱图，测定其峰面积，以峰面积 (A)为纵坐标，样品量 (C)为横坐标进行线性回归，得标准曲线方程为：y=45183x－83.517(r=0.9999)。以峰面积值(A)对进样量 (C)作图，得一直线，结果表明进样量在4.024μg/mL～32.194 μg/mL范围内，蛇床子素线性关系良好。

2.5 精密度试验

精密吸取样品溶液20μL注入液相色谱仪，重复进样5次，测得蛇床子素峰面积的相对标准偏差RSD为1.87%。表明本方法精密度良好。

2.6 稳定性考察

取样品供试液分别于0，4，8，16和24h分别进样，结果测得蛇床子素峰面积，相对标准偏差RSD%为1.26%。结果表明样品供试液在24小时内稳定。

2.7 重复性试验

按上述供试品溶液制备方法，对同一批样品，同时制备5份样品供试液溶液，精密吸取20μL，注入液相色谱仪，测得峰面积值并计算含量，其相对标准偏差RSD%为1.31%。表明本方法重复性良好。

2.8 加样回收率试验

取已知含量的样品5份，分别精密添加一定量的蛇床子素对照品溶液，按上述供试品溶液制备方法制备加样回收供试品溶液，精密吸取适量加样回收供试品溶液，注入液相色谱仪，加样回收率测得的结果均在95%～105%之间，得到平均回收率为97.85%，RSD%为1.98%。表明蛇床子素的提取和检测方法可行。

2.9 样品测定

取3批样品，依法制备供试品溶液，精密吸取样品溶液20μL注入液相色谱仪测定，色谱图见图1。所得结果代入回归方程法计算含量，即得，结果见表1。

表1 洁尔阴洗液中蛇床子素的含量测定 (n=3)

3 讨论

3.1 本实验在供试品溶液的制备过程中，用乙醚提取3次后的供试品溶液与提取4次后的供试液同法测定，结果基本一致，表明3次已基本提取完全，无需再提。

3.2 文献报道［1]［2]对蛇床子素含量测定的流动相较多，笔者曾以甲醇－水 (70：30)、甲醇－水 (80：20)、乙腈－水 (65：35)为流动相进行分析比较。结果采用甲醇－水(80：20)为流动相，此时供试品溶液中蛇床子素与其它杂峰完全分离，保留时间合适。

本实验通过测定蛇床子素含量来对洗液中主药进行控制评价，方法简便、重现性好，可用于该洗液的质量控制。

［1]国家药典委员会．中华人民共和国药典 (2010年版一部)［S]．北京：化学工业出版社，2010：296．

［2]唐蕾，卢荣枝，陈钧茂，等．HPLC法测定妇洁洗液中蛇床子素的含量［J]．中国现代药物应用，2009，5(3)：19－20．