丙型肝炎病毒检测的方法学评价及临床应用价值

吴佳玲，王 雷

（长沙市中心医院检验科，湖南长沙 410007）

丙型肝炎是由HCV感染所致，主要由血液/体液传播，WHO估计全球有1.7亿人感染丙型肝炎[1]，丙型肝炎是一种严重危害人体健康的传染病，目前尚无有效的治疗措施，因此，早期发现丙型肝炎患者、及时治疗已成为阻断丙型肝炎传播的重要手段。目前国内大多数实验室检测HCV的主要方法为ELISA法进行HCV-Ab抗体的筛查，部分医疗机构也开展了HCV-CAg和HCV-RNA的检测。本文对三种方法检测HCV的结果进行分析比较，并对其临床应用价值进行探讨。

1 材料与方法

1.1 标本

123份样本均来自本院住院和门诊疑似丙型肝炎的患者，包括93例HCV-RNA阳性样本、30例HCV-RNA阴性样本。其中男性71例，女性52例，年龄6～82岁。

1.2 试剂和仪器

1.2.1 试剂 PCR试剂由广州达安基因有限公司生产。CAg试剂：湖南景达制药有限公司提供。HCVAb试剂：北京金豪制药有限公司生产。三种检测试剂均经国家药检所批检合格，且在有效期内。

1.2.2 仪器 ABI-7300荧光定量仪用于HCV-RNA的检测，ELX-800酶标仪用于HCV-Ab、HCV-CAg的检测。

1.3 方法

HCV-RNA测定：用一对HCV特异性引物和一条HCV特异性荧光探针，利用体外扩增技术检测HCV。HCV-CAg测定:用两株抗丙肝病毒核心抗原的单克隆抗体包被酶标板，另两株单克隆抗体标记HRP酶，实验前将标本预处理，使核心抗原游离，采用双抗体夹心法原理检测游离的HCV核心抗原。HCV-Ab测定:基因工程HCV特异性抗原包被酶标板，待测血清中的HCV抗体与包被抗原结合后，再与抗人IgG-HRP反应，检测HCV-Ab的存在。所有操作均严格按试剂盒说明书进行。

2 结果

123例已知HCV-RNA结果的样本同时检测其HCV-Ab、HCV-CAg，结果见表 1。93 例 HCV-RNA阳性的样本中，HCV-Ab阳性有87例，敏感度为93.5%，有部分患者尚未产生抗体30例HCV-RNA阴性的标本中，有10例HCV-Ab阳性，特异性为83.3%。

表1 HCV-Ab、HCV-CAg检测结果

3 讨论

HCV的感染呈世界性分布，全世界至少有2亿HCV感染者。我国丙型肝炎约占输血后肝炎的60～80%[2]。HCV感染的一个重要特点是慢性化机率高，感染过程存在不同程度的组织病变，并与原发性肝癌的发生有高相关性[3]。目前用于HCV抗体筛查的ELISA试剂盒多采用第三代试剂，其包被抗原为含有 HCV 的核心蛋白：NS3、NS4、NS5抗原，在免疫功能正常者中有较高的检出特异性[4]。但HCV-Ab的检测也存在应用的不足。本资料中，93例HCV-RNA阳性的样本中，HCV-Ab阳性有87例，敏感度为93.5%，可见由于HCV-Ab的检出“窗口期”较长(平均为70天)，有部分患者尚未产生抗体，另有免疫力低下和免疫功能紊乱的患者也未产生抗体，容易造成HCV-Ab检测的假阴性。另外本资料中30例HCV-RNA阴性的标本中，有10例HCV-Ab阳性，特异性为83.3%因RNA阳性常提示病毒活动性感染，说明HCV-Ab在临床上不能区分既往感染和现症感染，即使抗病毒治疗有效也不能造成HCV-Ab的阴转，因此不能用于抗病毒疗效的监测[4]。另外也应排除因类风湿因子等干扰造成的假阳性。鉴于ELISA检测HCV-Ab仍存在的假阴性和假阳性，必要时可采用RIBA法对HCV-Ab阳性患者进行抗体确认[5]。

HCV-RNA是诊断HCV感染的 “金标准”，一般在HCV感染后2~5周的血清中可检出[6]，但因操作复杂、仪器昂贵，对实验条件和技术人员素质要求较高，中小型实验室难以推广应用，而且在血清抗体阳转后，血清中的病毒载量可降至极低水平，使HCV-RNA的结果呈阴性，本资料中的HCVRNA阴性的30例标本，有10例标本HCV-Ab呈阳性，不排除有上述原因，可导致HCV漏检。

采用单克隆技术的HCV-CAg检测试剂，操作简单、快速、实验条件要求不高，且能将HCV检测的“窗口期”缩短至14～68天。本资料中，93例HCVRNA阳性的样本中，有92例HCV-CAg呈阳性，30例HCV-RNA阴性的样本，有29例HCV-CAg阴性，检测敏感度达98.9%，特异性为96.7%。可见，HCV-CAg与HCV-RNA对丙型肝炎的检出有很好的相关性，能使急性丙型肝炎得到早期诊断。尤其在采供血机构，CAg检测可缩短HCV “窗口期”检测，降低了经血传播HCV的风险。但由于HCV基因易发生突变，不同感染者体内的HCV在其蛋白方面存在一定差异，如果仅对某个病毒CAg进行检测，就有可能造成假阴性结果[7]。

综上所述，三种检测HCV的方法各有利弊，HCV-RNA、HCV-Ab、HCV-CAg 联合检测有利于提高HCV的阳性检出率。对临床疑似HCV感染的患者可先初筛HCV-Ab、HCV-CAg，初筛阳性则用HCV-RNA进行确认，并对HCV确认阳性的患者进行抗病毒疗效监测，协助临床对HCV感染者早发现，早治疗。

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