蛋鸡感染 H9 亚型禽流感的诊断与防治

郑连军 凌红丽 郑宁宁 魏笑笑 娄 群 宋新宇 靳纪恒

（青岛康地恩药业宝依特生物制药有限公司 266114）

近年来山东许多地区的鸡场相继发生一种以呼吸道症状为主的传染性疾病，鸡群主要表现为咳嗽、呼噜、采食与饮水量减少以及蛋鸡的产蛋率下降等等。该病常混合或继发感染大肠杆菌，造成肉鸡死亡率高，蛋鸡虽然死亡率低，但沥沥拉拉零星死亡，很难控制。本公司从潍坊地区某蛋鸡养殖场发现类似病例，通过临床剖检、RT-PCR诊断、病毒分离等方法确诊为H9亚型禽流感，通过综合防治措施有效地控制了该病。

1 发病情况

潍坊某蛋鸡场共养殖海兰褐蛋鸡10000只，170日龄，2009年5月11日鸡群出现打喷嚏、咳嗽、呼噜等呼吸道症状，采食下降，饮水减少，产蛋率从75%降到50%，蛋颜色变浅，白皮蛋、沙皮蛋、软壳蛋、畸形蛋增多，排黄白绿稀粪，养殖户用泰乐菌素和强力霉素饮水，但无效果。3d后部分鸡出现肿头现象，有的从鼻子里流出清亮的鼻液，个别鸡出现神经症状，并出现死鸡，每天死亡7、8只，当地兽医诊断为新城疫，IV系苗4倍量紧急接种后病死鸡增多，增加到每天20多只。5月15日该鸡场送检3只濒死鸡到本公司疫病中心进行检测。

2 剖检病变

鸡只肺脏水肿淤血，心包膜增厚，气囊上有少量黄色酪状物，气管内有粘液或呈红布样出血，支气管内被痰液或干酪样物堵塞，肾脏肿大或呈斑点状出血，腺胃乳头有脓稠性分泌物，肌胃角质层糜烂，胰腺边缘局部有斑点状出血，十二指肠、直肠弥漫性出血，盲肠扁桃体肿大出血，卵黄性腹膜炎，输卵管内有粘性脓稠性分泌物。

3 实验室诊断

3.1 RT-PCR诊断 参照GeneBank中发表的AIV-H9 HA基因序列设计一对引物，引物由上海捷瑞公司合成；按照TRIzol试剂说明提取病毒RNA，然后进行反转录，以反转录产物为模板进行PCR扩增；取PCR反应产物10µl在1%琼脂糖中电泳观察，可见一条明显亮带，大小约550bp，与预期大小一致(见附图)。

3.2 病毒分离 采集发病鸡的气管、肺脏和腺胃，加入适量生理盐水和1000U/ml的双抗后充分研磨，然后反复冻融3次，12000r/min离心10 min，取上清液，经0.2µl滤膜过滤后，接种5枚9日龄SPF鸡胚，0.2ml/枚，收集24h后死亡鸡胚的尿囊液，培养96h时收集所有鸡胚的尿囊液，用微量血凝抑制方法测定收集的鸡胚尿囊液血凝试验效价为27。

3.3 病毒鉴定 （1）血清学鉴定。将该病毒盲传3代后，分别用AIV-H5、AIV-H9、ND、EDS76标准阳性血清做血凝抑制试验进行鉴定，分离的病毒能被AIV-H9阳性血清抑制，而不被AIV-H5、ND、EDS76标准阳性血清所抑制。（2）RT-PCR鉴定。取3.2中收集的尿囊液200µl，按3.1中的方法，可见550bp左右的亮带，与预期大小一致(见附图)，以上结果说明分离的病毒为H9亚型禽流感病毒。

附图 PCR产物电泳图1.病料PCR产物 2.阳性对照 3.Mark2000 4.阴性对照5.分离病毒的PCR产物

4 综合防治

4.1 预防措施 做好基础免疫和消毒。定期进行禽流感、新城疫等疫病的抗体监测，制订合理的疫苗免疫程序。添加黄芪多糖、鸡γ干扰素等增强机体免疫力的药物。天气干燥的季节，提高舍内湿度，减少灰尘，保护好鸡群的黏膜系统。多增加些维生素和微量元素，尤其是Vc的添加可有效减少此病的发病率；同时做好球虫、大肠杆菌、沙门氏菌、支原体等疾病的药物预防。

4.2 治疗措施 本病无特效药，只能通过对症治疗，给鸡使用具有抗病毒作用的鸡α干扰素、或双黄连口服液等复方中草药制剂。辅以丁胺卡那、氟苯尼考等抗生素，防止继发大肠杆菌感染。提高机体免疫力，增加营养，饲料或饮水中添加电解多维、Vc等增强机体抵抗力。

4.3 防治结果 通过上述防治措施，3d后鸡群的饮水吃料逐渐恢复，黄绿粪便减少，7d后鸡群呼吸道症状基本消失，吃料饮水恢复正常，鸡群的死亡率降到了正常水平，鸡群产蛋率开始回升，蛋的颜色、品质逐步恢复正常。

5 讨论

过去，人们往往把目光放在高致病性禽流感上，而对H9等低致病性禽流感未引起足够的重视，目前对市场送检病料检测发现AIV H9的阳性检出率较高，种种迹象表明，H9亚型禽流感的发病率和危害性日趋严重。鸡群感染H9后易混合或继发感染IB、ND、大肠杆菌病等疾病，导致肉鸡的大量死亡和蛋鸡的产蛋率降低以及缩短产蛋高峰时间造成蛋鸡的提前淘汰，给我国养禽业造成严重损失。

禽流感病毒分子生物学特点决定了病毒易变异，尤其是在目前养殖环境中禽流感病毒大量存在以及鸡群低水平免疫保护的情况下，禽流感病毒发生更为频繁的变异，导致禽流感疫苗免疫保护效果差，造成鸡群大量发病。春秋季节，昼夜温差较大，鸡群的防御功能下降，易得此病；春秋气候干燥，可造成上呼吸道黏膜损伤及纤毛的断裂，环境中的AIV通过受损的粘膜进入体内，进而引起一系列的病变。

我国禽流感的发生基本上都是一些小型的个体养殖场，相对来说管理较差，饲养方式比较混乱，饲养环境污染严重，免疫程序不科学，极易造成疫病的流行。在我国现阶段的条件下，养禽密集区实行家禽养殖小区，推广标准化生产技术，统一规划建设、统一饲养管理、统一防疫检疫、统一技术指导，全面开展禽流感抗体水平的监测，制定合理的免疫程序，有助于防控禽流感等疾病。