多聚核苷酸对小鼠急性毒性和蓄积毒性研究

郭远奎 （山东省荣成市崖头畜牧兽医站 264300） 贾海洋 （荣成市宁津畜牧兽医站）

张大林 （荣成市畜牧兽医站）

多聚核苷酸是聚肌苷酸和聚胞嘧啶酸的共聚物，是一种高效干扰素诱生剂，具有广谱抗病毒、抗肿瘤、抗某些细菌和原虫感染、刺激吞噬、调整机体免疫功能等多种保护作用[1-4]。在兽医临床中，常用于猪瘟、鸭瘟和新城疫等疾病的治疗[5-7]。尽管国内外众多学者曾在多聚核苷酸药物治疗方面进行了诸多探讨，但这些研究工作多集中在多聚核苷酸体内、外诱导产生IFN及其抗病毒的效果、临床药效学等方面，而关于其毒理学的研究资料则极为匮乏。为此笔者进行了多聚核苷酸注射液的一般毒性和蓄积毒性试验。

1 材料与方法

1.1 试剂 试验用多聚核苷酸注射液由瑞普(天津)动物药业有限公司生产，注射用环磷酰胺由江苏恒瑞医药股份有限公司生产。

1.2 方法 （1）急性毒性试验。选用体重18～20g的昆明系小鼠60只，随机分成6组，每组10只，雌雄各半。通过预试验测得多聚核苷酸注射液对小鼠的最高致死剂量为210mg·kg-1，最低致死剂量为35mg·kg-1，选取剂量比r＝1.4。采用倍比稀释法将多聚核苷酸原液稀释，分别腹腔注射实验小鼠。给药后观察动物的反应，连续观察7d，记录动物的中毒症状和死亡动物的分布情况。用改良寇氏法计算小鼠腹腔注射多聚核苷酸注射液的LD50及95%可信限[14,15]。（2）蓄积毒性试验。选用体重118～22g的昆明系小鼠20只，雌雄各半。定时腹腔注射1次/d。试验分为5期，每期4d，第1期剂量为0.100倍的LD50，以后几期分别按LD50的0.150、0.225、0.338、0.506倍的剂量递增。观察和记录动物中毒表现及死亡情况，计算蓄积系数K= LD50(n)/LD50，式中LD50(n)为nd蓄积试验时出现半数动物死亡时受试物的蓄积总剂量，用LD50的倍数表示；LD50为急性毒性试验的半数致死剂量)。当K≥5时，为弱蓄积性；当3≤K<5时，为中等蓄积性；当1≤K＜3时，为强蓄积性[12]。

2 结果

2.1 急性毒性试验 各剂量组部分小鼠腹腔注射多聚核苷酸注射液后即可出现惊跳，随后可见精神不振，体颤，四肢瘫软，少动，部分小鼠排稀粪，肛门周围有浅黄色稀粪污染。死亡多发生于给药后约1～12h(表1)。对死亡小鼠进行剖检，肉眼观察心、肝、脾、肾、肺等脏器未见明显变化，肠道臌胀，剖开可见水样内容物。

用改良寇氏法计算动物死亡的LD50及95%可信限，多聚核苷酸注射液的急性毒性试验结果显示，多聚核苷酸对小鼠的LD50为0.0835g·kg-1，lgLD50及其95%可信限为-1.07808±1.00548，95%可信限为0.06628～0.10532(g·kg-1)。

表1 不同剂量多聚核苷酸注射液腹腔注射后致小鼠死亡情况

2.2 蓄积毒性试验 药物注射20d后，实验小鼠的死亡总数为零，仍未过半数，而多聚核苷酸的累积总剂量已达到LD50的5.276倍。

3 讨论

本试验的急性毒性结果，按国际急性毒性分级标准可判断为中等毒性[12]。国内外关于多聚核苷酸急性毒性的报道并不多，根据报道，国外生产的多聚核苷酸腹腔注射的LD50为34.7mg·kg-1[8]，国内生产的多聚核苷酸腹腔注射的LD50为59.73mg·kg-1[9]，可见国内生产的多聚核苷酸注射液急性毒性较小，本试验的结果与报道一致。

多聚核苷酸注射液对小鼠的蓄积系数K>5，根据蓄积毒性强度分级，为弱蓄积性，这可能与多聚核苷酸在体内代谢较快有关。耐受性试验结果表明，小鼠对多聚核苷酸注射液小剂量长期染毒出现耐受现象。因此，多聚核苷酸使用过程中应注意使用频率和剂量。

[1]张秀国, 吴德政. 聚肌胞(多聚核苷酸)抗肿瘤作用和免疫调节作用[J]. 癌症, 1991,. 10(3): 173-176.

[2]舒昌杰. 聚肌胞生物学功能与应用[J]. 陕西医学杂志, 1989, 18(10):40-43.

[3]Loseke S，Grage-Griebenow E，Heine H，et al.In vitro-generated viral double-stranded RNA in contrast to polyinosinic: polycytidylic acid induces interferon-alpha in human plasmacytoid dendritic cells[J]. Scand J Immunol, 2006, 63(4): 264-274.

[4]王春林. 聚肌胞的药理和临床应用[J]. 江苏医药, 1992, 18(5): 282-283.

[5]范琳, 吕清林. 聚肌胞(多聚核苷酸)治疗鸭瘟试验报告[J]. 中国禽业导刊, 1998, 15(4): 81.

[6]赵振华, 罗家铸, 皇甫玉珩等. 单纯型猪瘟的病理学研究及干扰素诱导剂聚肌胞(polyI∶C)对猪瘟的保护性作用的探讨[J]. 内蒙古农业大学学报自然科学版, 1983, 4(1): 47-57.

[7]李凤艳, 葛铭, 董新荣等. 聚肌胞注射液对鸡新城疫感染的保护率试验[J]. 甘肃畜牧兽医, 2007, 37(1): 17-19.

[8]Homan E R，Zendzian R P，Schott L D,et al. Studies on PolyI:C toxicity in experimental animals[J]. Toxicology Applied Pharmacology,1972, 23(4): 579-588.

[9]王磊, 覃少华, 愈吉杰等. 聚肌胞对小鼠的急性毒性和蓄积毒性[J]. 中国组织工程研究与临床康复, 2007, 2(15): 2826-2828, 2835.