泰兴市鸡大肠杆菌菌株的分离鉴定与药敏试验

肖云萍 （江苏省泰兴市河失兽医站 225461） 顾元兵 （江苏省泰兴市农业局）

鸡大肠杆菌是由鸡致病性大肠杆菌引起的一种严重危害养鸡业的传染病，除引起鸡死亡造成的直接损失外，还能导致饲料利用率、生产能力及幼雏成活率明显下降。鸡大肠杆菌病以幼雏和中雏发生较多，发病较早的为4日龄，通常以1月龄前后的幼鸡发病为多。随着养鸡业集约化的不断发展，疾病也越来越普遍。致病菌对抗菌素耐药性越来越强。大肠杆菌极易产生耐药性，临床用量后不规范加剧了其耐药性的发展，为取得较好的治疗效果，需要选择细菌比较敏感的药物来进行预防和治疗，达到有效控制该病的目的。本试验从病鸡中分离出致病菌，并对其主要大肠杆菌进行生化鉴定，通过药敏试验，指导临床用药，从而降低经济损失，迅速控制疾病。

1 材料

1.1 病料 采自泰兴市周边市(区)乡镇的20多个养鸡场和养殖户送检至泰兴市兽医站门诊部的具有典型气囊炎、败血症的病死蛋鸡(150～200日龄)的肝脏、脾脏、心血等。病料送检时间2005年2月～8月。

1.2 试剂 MR、V-P、靛基质、明胶液化、氧化酶、过氧化氢酶、尿素酶试验培养基及本市兽医站门诊部提供的反应试剂。

1.3 普通琼脂平板 按常规由兽医站门诊部自制。麦康凯琼脂、伊红美兰琼脂、三糖铁琼脂均购自泰兴市卫生防疫站。

1.4 药敏试纸 部分购于北京天坛生物技术有限公司，部分由本市兽医站门诊部自制。

1.5 标准菌株(O2) 由泰兴市兽医卫生监督所微生物实验室提供。

2 方法

2.1 培养 取病料无菌操作划线接种于普通营养琼脂平板上，置37℃培养18～24h，观察结果。

2.2 分离培养 共分离出16株细菌，在普通营养琼脂平板上，选取具有圆形、光滑、隆起、湿润、半透明的近无色的菌落，分别划线接种于麦康凯琼脂和伊红美兰琼脂上，置37℃培养18～24h，观察结果。

2.3 生化试验 选取麦康凯琼脂上长的红色菌落或伊红美兰琼脂上生长出的黑色带有金属光泽的菌落，作MR、V-P、靛基质、三糖铁、明胶液化、氧化酶、过氧化氢酶、尿素酶试验。

2.4 药敏试验 选取麦康凯琼脂上长出的红色菌落或伊红美兰琼脂上生长出的黑色带有金属光泽的菌落，取各菌株做药敏试验。取O2标准株做对照，均置37℃培养18～24h，观察结果。

3 结果

3.1 鉴别分离培养 在麦康凯琼脂上长出圆形、光滑、湿润的粉红色菌落，并向培养基内凹陷生长者为疑似大肠杆菌或在伊红美兰琼脂平板上生长的黑色带有金属光泽的单个菌落。

3.2 生化试验 对16株进行生化实验，结果表明：大多数菌株能发酵葡萄糖、乳糖、甘露醇、麦芽糖、蕈糖、木糖、卫矛醇，产酸产气或产酸不产气。所有菌株都不利用肌醇，多数菌株不利用蔗糖，少数为迟缓发酵，所有菌株均不产生H2S。V-P试验和枸橼酸盐利用试验均为阴性，M.R试验均为阳性，吲哚试验绝大多数菌株为阳性，极少数为阴性，尿素酶试验绝大多数为阴性，极少数为阳性。综观说明：试验各菌均对大多数糖类(葡萄糖、乳糖、麦芽糖、果糖、甘露糖)产酸产气，MR试验阳性，V-P试验阴性，产生靛基质，三糖铁底层产酸，明胶液化试验阴性，氧化酶试验阴性，过氧化氢酶试验阳性，尿素酶试验阴性。以上试验证明此菌是大肠杆菌

3.3 药敏试验结果 见表1。敏感度根据《抗菌药物敏感试验判断标准》进行判定。结果见表2。

表1 药敏试验结果 （mm）

表2 药敏试验效果比较

4 小结与讨论

由结果可以看出，和标准菌株(O2)对照，临床上的大肠杆菌的药敏谱发生了一定的变化，特别是对喹诺酮类药物的敏感性。标准毒株对环丙沙星、恩诺沙星都很敏感，而临床上的大肠杆菌敏感率：环丙沙星为43.75%，高敏率仅为6.25%；恩诺沙星为25%，高敏率仅为6.25%。这表明大肠杆菌分离菌株对喹诺酮类药物产生了较高的耐药性。大肠杆菌对这类药物产生耐药性的原因，可能与近年来兽医临床上大剂量应用这类药物有密切的关系。因此，临床或在饲料中添加药物时要注意，不要长期大量用一种药物，应选用几种敏感药物交替使用。

药敏试验结果可看出，临床上对大肠杆菌敏感率超过60%的常规药物主要有氯霉素、庆大霉素、卡那霉素等，特别对卡那霉素、新霉素的敏感率可达81.25%，对有效防治大肠杆菌病有一定的参考价值。在临床上选择上述一种或几种药物进行防治，会有较为理想的结果。

通过本次试验和临床应用效果表明：若要有效地控制大肠杆菌病，发病后先应用上述试验提供的敏感药物，另外还应采取综合防治措施，加强饲料管理，投药与应用大肠杆菌多价蜂胶疫苗相结合，能起到事半功倍的效果。

[1]吴信法. 兽医细菌学[M]. 北京: 中国农业出版社. 1996. 18-66.

[2]曹树泽, 陈德威, 张中直等. 兽医细菌检验手册[M]. 北京: 农业出版社. 1984.29-56.

[3]中国人民解放军兽医大学[M].兽医检验. 北京: 农业出版社. 1977.345-501.

[4]中国农业科学院哈尔滨兽医研究所[M].家畜传染病学. 北京: 农业出版社.1986.

[5]冯淇辉. 兽用抗菌药物代谢动力学研究[M]. 北京:科学出版社.1989.