高效液相色谱法测定三维制霉素栓中维生素E含量

钟月平

（广西壮族自治区钦州市妇幼保健院药剂科，广西 钦州 535000）

三维制霉素栓由制霉素、维生素E、维生素A、维生素D2加基质制备而成，具有广谱抗菌作用，临床上用于妇科阴道炎等的治疗。笔者参考有关文献[1-2]方法，以高效液相色谱（HPLC）法测定三维制霉素栓中维生素E的含量，效果满意，现报道如下。

1 仪器与试药

日本岛津LC-10ATVP型高效液相色谱仪；SPD-10AVP型紫外检测器；KQ-100DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。维生素E对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号为10062-0007）；三维制霉素栓（市售品，批号分别为 070901，070902，070903）；甲醇为色谱纯，其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Hypersil C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇 -水（90 ∶10）；检测波长：280 nm；流速：0.8 mL/min；柱温：（30.0 ±1）℃；进样量：20 μL。理论塔板数按维生素 E 计应不低于3 000。在上述色谱条件下，维生素E保留时间为12 min，与其他组分达到基线分离，阴性无干扰。色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

2.2 溶液制备

取维生素E对照品约3 mg，精密称定，置50 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。取装量差异项下样品，研细，混匀，精密称取0.9 g，置100 mL量瓶中，加甲醇约85 mL超声处理20 min，取出，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，静置，用0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得供试品溶液。取处方项下除维生素E以外的其余原料药，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

空白干扰试验：取阴性对照品溶液，按上述色谱条件分析。在与对照品相应位置上无明显的其他色谱峰出现。结果表明阴性对照品溶液对测定无干扰。

线性关系考察：配制0.242 g/L的维生素E对照品溶液，分别精密吸取 1.0，2.0，4.0，6.0，8.0 mL，置 10 mL 棕色量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取上述溶液各20 μL进样。以维生素E对照品量为横坐标、峰面积积分值为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程 Y=142 073.329 5 X+1 788.409 3，r=0.999 8（ n=5）。结果表明，维生素E进样量在0.484～3.872 μg范围内与峰面积有良好的线性关系。

精密度试验：取同一对照品溶液，重复进样测定6次。结果维生素E平均峰面积为155 198，RSD=0.90%（n=6），结果表明仪器精密度良好。

重现性试验：按拟订的方法，取同一批（批号为070901）样品进行6次平行的供试品溶液制备与测定。结果维生素E平均含量为10.83 mg/粒，RSD=1.15% （n=6）。

稳定性试验：取同一批（批号为070901）样品适量，依法制成供试品溶液，放置 0，2，4，8，12 h，分别进行测定。结果平均峰面积为156 696，RSD=0.17%（n=5），表明供试品溶液在12 h内稳定。

加样回收试验：精密称取已知含量的同一批（批号为070901）样品粉末6份，各约1.0 g，分别加入质量浓度为1.114 g/L的维生素E对照品溶液1.0，3.0，6.0 mL，按供试品溶液制备方法制备待测溶液。照上述色谱条件进行测定，计算回收率，结果见表1。

表1 维生素E加样回收试验结果（n=6）

2.4 样品含量测定

取3批样品，按供试品溶液制备方法制备溶液，依上述色谱条件测定，按外标法计算含量。结果批号为070901，070902，070903的3批样品，每粒中维生素E的含量分别为10.72，10.50，10.40 mg，其 RSD分别为0.19%，0.83%，0.51%（n=3）。

3 讨论

笔者曾考察了多种流动相的洗脱效果，其中乙腈-水（90∶10）的杂质峰过多、进样时间过长，乙腈-1%冰醋酸（88∶12）进样时间过长，甲醇 -0.5%冰醋酸（89∶11）峰形较差，而甲醇 -水（90∶10）可使维生素E基线分离且出峰时间适中，峰形较好。也曾对超声提取时间进行了比较，加入50%甲醇分别超声提取10，20，30，40 min，结果显示超声提取20 min较为合适。本试验结果表明，所建立的HPLC法简便快捷，重现性和稳定性均较好，操作简便，可用于三维制霉素栓的质量控制。

[1]王燕萍，马 潇，张 虹.HPLC法测定维生素E霜中维生素E的含量[J]. 中国药事，2003，17（4）:230-231.

[2]马经野，许 蕴，付 林.反相高效液相色谱法测定血清中维生素E的含量[J]. 中国卫生检验杂志，2006，16（2）：159-160.