健脑颗粒质量标准研究

2010-06-01 07:53
中国药业 2010年1期
关键词:藿苷本品乙酸乙酯

万 李

(重庆医科大学附属第二医院,重庆 400010)

健脑颗粒由淫羊藿、枸杞子、川芎等多味药材组成,具有益气养血、滋阴生津的功效,适用于气血两亏、阴津不足所致失眠多梦、神疲健忘、头晕头痛等症。为有效控制其质量,笔者对该产品的质量标准进行了研究,用薄层色谱(TLC)法对制剂中的川芎、枸杞子进行定性鉴别,对淫羊藿的有效成分淫羊藿苷的含量采用高效液相色谱(HPLC)法进行测定,现将结果报道如下。

1 仪器与试药

2690/2996型高效液相色谱仪(美国Waters公司);BPQⅠ型薄层板自动铺板器(重庆南岸新力实验电器厂);三用紫外分析仪(上海顾村电光仪器厂)。淫羊藿苷对照品(批号为110737-200312)、枸杞子对照药材、川芎对照药材均由中国药品生物制品检定所提供,健脑颗粒为市售品,乙腈为色谱纯,水为去离子水,其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别[1]

枸杞子:取本品及按本品工艺制备的缺枸杞子的阴性对照品各5 g,分别加水15 mL,超声处理10 min,过滤,滤液用乙酸乙酯提取2次,每次10 mL,合并乙酸乙酯液,蒸干,残渣加甲醇1 mL使溶解,分别得到供试品溶液及阴性对照品溶液。取枸杞子对照药材0.5 g,加水 35 mL,加热回流 15 min,滤过,滤液用乙酸乙酯15 mL提取,蒸干,残渣加甲醇1 mL使溶解,即得枸杞子对照药材溶液。照TLC法[2005年版《中国药典(一部)》附录ⅥB]试验,吸取上述3种溶液各5 μL,分别点于同一硅胶H薄层板上,以苯-乙酸乙酯-甲酸(8 ∶7 ∶0.8)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365 nm)下检视。结果供试品溶液色谱中,在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点,阴性对照品溶液色谱无相同斑点出现(见图1 A)。

图1 薄层色谱图

川芎:取本品及按本品工艺制备的缺川芎的阴性对照品各5 g,分别加水15 mL,超声处理10 min,过滤,滤液用乙酸乙酯提取2次,每次10 mL,合并乙酸乙酯液,蒸干,残渣加甲醇1 mL使溶解,分别得到供试品溶液和阴性对照品溶液。取川芎对照药材1 g,分别加三氯甲烷20 mL,超声处理30 min,滤过,滤液蒸干,残渣加三氯甲烷1 mL使溶解,即得川芎对照药材溶液。照TLC法[2005年版《中国药典(一部)》附录ⅥB]试验,吸取上述3种溶液各6 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以环己烷-乙酸乙酯(4∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365 nm)下检视。结果供试品溶液色谱中,在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点,阴性对照品溶液色谱无相同斑点出现(见图1 B)。

2.2 淫羊藿苷含量测定

2.2.1 色谱条件

色谱柱:Symmetry C18柱(200 mm ×4.6 mm,5 μm);流动相:乙腈 -水(30 ∶70);流速:0.8 mL/min;检测波长:270 nm;柱温:30 ℃;进样量:10 μL。在此色谱条件下的色谱图见图2。

图2 高效液相色谱图

2.2.2 溶液制备

精密称取本品2 g,加水20 mL,超声处理20 min,滤过,滤液通过聚酰胺(3 g)柱,用70 mL水洗涤,弃去洗涤液,再用乙酸乙酯60 mL洗脱,收集洗脱液,回收溶剂,蒸干,残渣用甲醇溶解并置10 mL量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,用0.45 μm微孔滤膜过滤,即得供试品溶液。精密称取淫羊藿苷对照品适量,加甲醇制成每1 mL含0.1 mg淫羊藿苷的溶液,即得对照品溶液。取按处方比例及制备工艺制备的不含淫羊藿的阴性样品适量,按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2.2.3 方法学考察

线性关系考察:精密吸取对照品溶液 2,6,8,10,16 μL,按上述色谱条件进样测定,以测得峰面积为纵坐标、淫羊藿苷进样量(μg)为横坐标进行线性回归,得回归方程 A=1 812 181.5 C-19 436,r=0.999 9。结果表明,淫羊藿苷进样量在0.20~1.60 μg范围内与峰面积呈良好线性关系。

精密度试验:精密吸取对照品溶液10 μL,重复进样5次,测得峰面积值的 RSD=1.04%,表明仪器精密度良好。

稳定性试验:精密量取样品1份,照拟订的供试品溶液制备方法和测定条件,分别于 0,4,8,10,16 h进样,淫羊藿苷峰峰面积的RSD为1.12%,结果表明供试品溶液在16 h内稳定性良好。

重现性试验:精密称取同一批样品5份,按供试品溶液制备方法制备溶液,按上述色谱条件进样10 μL测定,计算含量,结果的RSD=1.22%。

加样回收试验:精密称取已知含量的同一批样品6份,分别精密加入淫羊藿苷对照品,按供试品溶液制备方法制备溶液,按上述色谱条件进样测定,计算回收率。结果见表1。

2.2.4 样品含量测定

按供试品溶液制备方法操作,分别将3批样品制成供试品溶液,并按上述色谱条件进样测定,以外标法计算淫羊藿苷含量。结果批号为070401,070402,070403的3批样品中,每5 g样品分别含淫羊藿苷 2.45,2.76,2.88 mg。

表1 淫羊藿苷加样回收试验结果(n=6)

3 讨论

本制剂由多味药材提取制成,样品成分复杂,对供试品溶液的不同提取方法(正丁醇提取法、大孔树脂纯化法、聚酰胺纯化法)进行比较,结果有的干扰较大,有的含量偏低,而聚酰胺法操作简便,含量测定结果比较满意。本品的薄层色谱鉴别均作了阴性对照试验,结果表明各薄层斑点不受样品中其他各药的干扰,专属性较强,简单易行,TLC法可作为本品的定性检测方法。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社,2005:229,附录 31.

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