膀胱移行细胞癌组织中 CX26、CK19的表达变化及意义

吴金生,刘伟光,栾志敏,祝增军

(潍坊医学院临床学院,山东潍坊 261031)

膀胱移行细胞癌(BTCC)是尿路上皮最常见的肿瘤,术后复发率高,而且复发者伴有恶性程度增加和向浸润型发展的倾向。近年研究表明,细胞周期细胞角蛋白 19(CK19)与其发生、发展和预后有着重要的关系。缝隙连接蛋白 26(CX26)是尿路上皮细胞表达的主要缝隙连接蛋白,具有显著抑癌作用。2007年 5月 ～2009年 10月,我们采用免疫组织化学法检测了 BTCC组织中 CX26、CK19蛋白的表达变化,并探讨其临床意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 BTCC患者 40例,男 33例、女 7例,年龄 33.5～77.5岁；癌组织分化程度为高分化 12例,中分化 23例,低分化 5例；TNM分期 T1期 10例,T2期 21例,T3期 8例,T4期 1例；有淋巴转移 7例,无淋巴结转移 33例；患者均经病理确诊,术前未行放化疗,术中切除膀胱肿瘤组织。另收集 10例正常膀胱组织标本作为对照,取自膀胱结石及前列腺增生症开放手术的患者。标本均经病理证实,10%甲醛固定,石蜡包埋,5μm连续切片。

1.2 CX26、CK19蛋白检测方法 采用免疫组化SABC法检测,严格按试剂盒说明书操做,以 PBS代替一抗作为阴性对照。采用双盲法对每张切片在高倍镜(×400)下计数 5个视野,CX26蛋白高表达于所有正常上皮组织,主要定位于细胞膜且分布均匀,阳性细胞细胞膜呈淡黄色；CK19主要分布于膀胱移行上皮细胞和肿瘤细胞的胞质和胞膜中,阳性细胞细胞质呈棕黄色。根据染色强度计分:0分为无染色颗粒,1分为有黄染的细小颗粒,2分为有较多的黄色颗粒,3分为有粗大的棕黄色颗粒。阳性细胞百分比计分:0分为无阳性细胞；1分为 1%～25%；2分为 26%～50%；3分为 51%～100%。以两项相加得分 ＞2分为阳性,≤2分为阴性。

1.3 统计学方法 采用 SPSS11.0统计软件。两样本率的比较采用 χ2检验,相关关系采用 Spearman等级相关分析。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 CX26、CK19蛋白的表达 BTCC组织中CX26、CK19的阳性率分别为 35.0%、77.5%,正常膀胱组织中分别为 90.0%、45.0%,两者相比,P均＜0.05。

2.2 CX26、CK19蛋白表达与 BTCC临床病理参数的关系 见表1。由表可见,BTCC组织中 CX26、CK19蛋白表达均与癌组织分化程度有关(P＜0.05),与年龄、临床分期及有无淋巴结转移无关(P均 ＞0.05)。

表1 CX 26、CK 19蛋白表达与 BTCC临床病理参数的关系

2.3 BTCC组织中 CX26、CK19蛋白表达的关系BTCC组织中 CX26、CK19蛋白表达呈负相关(r=-0.319,P＜0.05)

3 讨论

肿瘤的发生从生物学角度看主要表现为两方面,一方面是肿瘤细胞凋亡障碍,另一方面是细胞异常增殖,即细胞周期调控蛋白的失调可能是肿瘤发生的原因之一。

细胞间隙连接(GJ)是位于相邻细胞间的膜通道结构,由细胞质膜上的连接子相互衔接而成。连接子围绕中央亲水小管呈环形排列,构成这种亚单位的蛋白质称为细胞缝隙连接蛋白(CX)。缝隙连接作为细胞交换的通道,能够在细胞间直接传递离子和相对分子质量小于 1 kD的分子,包括细胞内的代谢产物、第二信使 cAMP、cGMP、1,4,5-三磷酸肌醇以及氨基酸、核苷酸等。恶性肿瘤细胞间往往缝隙连接减少,使细胞间失去生长调控。CX26是 CX家族的重要成员,可直接影响细胞间的连接通讯,具有显著抑癌作用。有学者[1]研究发现,CX26与喉癌的发生发展关系密切,与临床分期、病理分级及淋巴结转移密切相关,与临床分型无关。周莉等[2]发现,CX26在乳腺癌组织中的阳性率低于癌旁正常组织,表明 CX26阳性表达使乳腺癌患者死亡率变小,与预后相关。由于 CX26是膀胱移行上皮细胞主要表达的连接蛋白,在促进细胞分化成熟、维持细胞间协调稳定、抑制肿瘤生长等方面起重要作用。Gee等[3]研究发现,在正常膀胱上皮 CX26基因有一定量的表达,而在癌组织中 CX26基因表达明显降低,且恶性程度高的膀胱癌组织中 CX26阳性率较恶性程度低者明显低。本研究结果显示,BTCC组织中CX26表达随着癌组织恶性程度增高表达逐渐减弱。在肿瘤的早期,如表浅的非浸润癌中 CX26就有明显降低,提示 CX26改变是膀胱癌发生的早期事件之一,有可能作为肿瘤早期诊断的一个新指标。

CK是一类由细胞角蛋白基因编码的水溶性聚合多肽,相对分子质量为 40～68 kDa,是上皮细胞在发生、分化、成熟过程中逐渐形成的,分布于大多数上皮和间皮细胞源性的细胞中,构成哺乳类动物上皮和间皮细胞源性细胞的细胞骨架。CK19是一种相对分子质量为 40 000的酸性蛋白质,等电点为5.2,基因定位于 17q21.2,是 CK家族中最小的成员。CK19在各种腺上皮和腺上皮起源的恶性肿瘤中均有表达,但在正常外周血、骨髓组织、淋巴结中不表达,且在上皮肿瘤组织中表达稳定[4]。有研究表明,CK19的表达与鼻咽癌、胃癌的发生发展有关,CK19与乳腺癌的复发转移有关,还可以作为诊断口腔鳞癌分化程度的指标[5～8]。章慧平等[9]研究发现,CK19在膀胱癌组织中的表达高于癌旁组织,提示 CK19与膀胱癌的发生有关,可作为膀胱癌的一个新的肿瘤标记物。张忠英等[10]采用电化学发光免疫分析技术检测尿 CK19片段,认为其在膀胱癌等泌尿系肿瘤的诊断和复发检测中具有敏感性高、无创伤的优点,优于血清 CK19和尿细胞学检查,并可降低急性尿路感染患者的假阳性率。本研究结果显示,CK19的表达强度与病理分级呈正相关 ,随着BTCC恶性化程度增高表达逐渐增强。在肿瘤的晚期,如浸润癌中表达有明显增强,说明 CK19改变是膀胱癌晚期的表现。

本研究还发现,BTCC组织中 CX26、CK19蛋白表达呈负相关。随肿瘤分级增加,CX26表达下降,而 CK19表达增强,说明膀胱癌组织中 CX26基因失活可能促使 CK19基因发生作用,使细胞凋亡减少,导致肿瘤发生发展,为膀胱肿瘤早期诊断及预后判断提供依据。

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