自身免疫性肝炎和乙型肝炎患者自身抗体检测及对比分析

张利方 李 方 石莉萍

自身免疫性肝炎(Automiune Hepatitis,AIH)是一种累及肝脏实质,由自身免疫反应引起,伴有血清自身抗体阳性,不明原因的慢性肝病,通常经相关自身抗体检测进行诊断。但由于某些自身抗体阳性也见于乙型肝炎(HB)患者(约10～15%),因而影响临床诊断和治疗。本文应用间接免疫荧光法检测AIH和HB患者血清自身抗体、对比分析两种疾病自身抗体的表现特征。

1 资料与方法

1.1 研究对象

2001年10月至2008年5月在我院住院确诊的AIH 患者(AIH 组)43例,其中男12例,女31例,平均年龄57岁,符合国际自身免疫性肝炎组(IAIHC)修订的诊断标准[1]。HB患者(HB组)为2006年5月至2008年5月乙肝表面抗原阳性,且病史两年以上的住院患者100例,其中男78例,女22例,平均年龄55岁,符合2000年9月西安会议病毒性肝炎防治方案规定的诊断标准[2]。

1.2 检测方法

(1)应用间接免疫荧光法检测血清抗核抗体(Anti-Nuclear Antibody,ANA)、抗平滑肌抗体(Anti-Smooth Muscle Antibody,SMA)、抗线粒体抗体(Anti-Mitchondral Antibody,AMA)和抗中性粒细胞胞浆抗体(Antineutrophil Cytoplas Mic Antibody,ANCA,包括核周型pANCA、胞浆型cANCA自身抗体),基质选用甲醛固定的人中性粒细胞、HEP-2细胞和5种组织(猴肝、心肌组织,大鼠肝、肾和胃组织)的冰冻切片作抗原,以生物薄片技术将带有细胞和组织的6种切片组合成一个反应区,待测起始血清1∶10、1∶100稀释,与各种组织细胞共同孵育30min,加入异硫氰酸荧光素(FITC)标记的抗体孵育30min,洗片,甘油封片后荧光显微镜下观察结果。组织或细胞内出现特征性绿色荧光为阳性。以上检测试剂和技术由德国 EUROIMMUN实验免疫试剂公司提供。

(2)应用美国BECKMAN UNICEL DXC800全自动生化分析仪,按常规方法检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL),应用美国IMMAGE特种蛋白全自动免疫仪检测IgG、IgA、IgM 。

1.3 统计学处理

2 结 果

2.1 二组血清自身抗体检出率比较

AIH组血清中各种自身抗体阳性率均明显高于HB组,差异有显著性统计学意义(P＜0.01)。AIH患者主要以ANA,SMA抗体为主,其中有24例患者ANA合并SMA抗体阳性,占55.8%,而HB患者只有16例ANA抗体阳性,无一例SMA抗体阳性。见表1。

2.2 二组患者ANA滴度比较

ANA阳性的40例AIH患者和16例HB患者ANA滴度存在非常显著性差异(P＜0.01),AIH患者抗体以高滴度(≥1∶320)为主,而HB患者以低滴度(≤1∶100)为主。见表2。

2.3 二组患者ANA荧光模型比较

AIH患者荧光模型以核仁型和核膜型为主,HB患者以颗粒型所占比例较高。见表3。

表1 二组患者自身抗体检出率比较(n,%)

表2 二组患者ANA滴度比较(n,%)

表3 二组患者ANA荧光模型比较(n,%)

2.4 二组患者肝功能和免疫球蛋白指标比较

AIH患者血清ALT、AST浓度明显高于HB患者(P＜0.05)。AIH患者免疫球蛋白以IgG升高为主,而 HB患者以IgA轻度升高为主。TBIL和IgM 二组患者无明显差异。见表4。

3 讨 论

尽管自身抗体在AIH发病机制中的确切作用尚未得到证实,但自身抗体的检测越来越受到临床及实验室的重视,尤其对AIH自身抗体新的检测项目的应用,为过去原因不明的肝功能异常或治疗效果不佳的AIH患者提供了鉴别诊断和治疗的依据。

表4 二组患者肝功能和免疫球蛋白指标比较(±s)

表4 二组患者肝功能和免疫球蛋白指标比较(±s)

注:与 HB组比较,1)P＜0.05,2)P＜0.01

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本文中AIH和HB患者自身抗体检出率存在非常显著性差异(P＜0.01),AIH患者主要以ANA(93.0%)和SMA(67.4%)抗体为主,其中 ANA合并SMA阳性患者占55.8%,AMA和pANCA、cANCA抗体阳性率分别为 13.9%和6.9%、2.3%。而HB患者仅有ANA阳性,阳性率占16.0%。抗体滴度检测中,AIH患者自身抗体均为高滴度(≥1∶320),而HB患者以低滴度为主,高滴度仅见于5例患者中,这5例患者产生高滴度抗体是由病毒感染过程中的自身免疫反应所导致,还是病毒参与激活自身免疫性疾病及诱导产生自身抗体值得进一步研究。一般认为,多数低滴度自身抗体可反映机体出现自身免疫反应或疾病状态,不直接影响免疫系统功能,即高滴度自身抗体的存在即与自身免疫性疾病密切相关[3,4]。在临床治疗上AIH采用免疫抑制剂治疗,而HB患者只用干扰素抗病毒治疗,若对存在高滴度自身抗体HB患者采用干扰素治疗,可能诱导或增强自身免疫活性细胞,使HB病毒复制增加。因而需进行自身抗体及滴度监测以实施有针对性的个体化治疗。

ANA免疫荧光模型包括均质型、颗粒型、核仁型、核点型、核膜型、着丝点型等,在肝病的发生发展过程中,自身免疫功能的变化多集中在与细胞增值、分裂有关的核仁成分上,本文结果中AIH患者主要以核仁型(50.0%)、核膜型(25.0%)为主,而HB患者以颗粒型(37.5%)较常见,两组荧光模型的特点可辅助临床进行鉴别诊断。ALT、AST、TBIL是反映肝功能损害较为敏感的指标[5],自身抗体与肝细胞相互作用所产生的超敏反应可损伤肝细胞和影响转氨酶的释放,进一步加重肝脏的损害[6],本文中AIH 组ALT、AST和IgG明显升高,进一步证实了这种变化。

血清自身抗体检测对AIH的诊断具有重要意义,随着检查方法的普及,AIH检出率显著增加,已逐渐成为非病毒性肝病中的主要病种。因此,对原因不明的肝炎患者常规检测自身抗体,监测抗体的滴度,有利于AIH的临床诊断、鉴别诊断和治疗。