P-ERK在宫颈上皮内肿瘤诊断中的应用

李 静 许颖思

宫颈上皮内肿瘤(CIN)是宫颈癌的早期病变,准确的诊断对于治疗和预后具有重要的意义,我们探讨发现 P-ERK在宫颈上皮内肿瘤诊断中具有重要的临床意义。

1 资料与方法

1.1 资料

收集我院宫颈锥切病例 104例,年龄 36～62岁,患者均经病理组织学确诊,其中宫颈鳞状上皮化生 38例,宫颈上皮内肿瘤 I级 20例,宫颈上皮内肿瘤 2级 22例,宫颈上皮内肿瘤 3级/原位癌 24例。

1.2 免疫组织化学法

采用采用 MaxvisionTM免疫组化法,按照免疫组化试剂盒的操作说明进行。和 P-ERK为工作液,由美国基因公司提供,具体步骤:① 4μm连续切片,裱于涂有 APES的载玻片上,70℃烤片 2h;②二甲苯脱蜡,梯度酒精入水;③ 3%过氧化氢室温孵育 30m in,消除内源性过氧化物酶;④抗原修复:切片浸于pH 6.0柠檬酸溶液中,电饭锅中煮沸 5min,保温 10min,自然冷却;⑤ PBS洗,5m in×2次;⑥加入适当稀释倍数的一抗,4℃冰箱 12 h;⑦复温,PBS洗去一抗;⑧加 Maxvision试剂,室温作用1 h;⑨ PBS洗 2次;⑩ DAB显色,苏木精复染,酒精脱水,二甲苯透明,封片,光镜下观察抗原在癌组织中表达。

1.3 结果判断

随机选择 4个高倍视野,记数 400个细胞,根据着色强度及显色癌细胞比例进行半定量分为 -、+、++、+++四级。①按切片中细胞显色有无及着色深浅评分:无显色为 0分,淡黄色为 1分,棕黄色为 2分,棕褐色为 3分。②根据显色癌细胞的比例记分:阳性细胞数为 1% ～25%,计 1分,26%～49%计 2分,50%～75%计 3分,76% ～100%计 4分。每例积分 =① ×②。按积分高低分:0～4分为阴性,4分以上为阳性,结果由两位病理医师分别诊断,不同结果讨论决定,保证结果的客观性。

1.4 统计学分析

采用卡方检验和等级秩和检验。

2 结果

宫颈鳞状上皮化生组 38例,6例 P-ERK表达阳性,阳性表达率为15.7%;宫颈上皮内肿瘤 66例,P-ERK表达阳性 38例,阳性表达率为 57.6%;两组比较具有非常显著性意义(χ2=17.5,P=0.00003,P＜0.01),而宫颈上皮内肿瘤 1、2、3级间阳性表达率比较无显著性意义(u=0.02,P＞0.05),见表 1。

表1 P-ERK在宫颈鳞状上皮化生和上皮内肿瘤组织中的表达(例,%)

3 讨论

宫颈鳞状上皮内肿瘤(CIN)是非常常见疾病,易发展为宫颈癌,常易误诊,我们应用P-ERK检测两组病变,为确诊两组病变提供客观证据。

ERK为脯氨酸导向的丝/苏氨酸激酶,磷酸化的 ERK(PERK)才具有使脯氨酸相邻的丝/苏氨酸磷酸化的活性[1]。ERK的活化是将信号从细胞膜表面受体转导至核的关键,其上游通路 Ras-Raf-MEK可促使ERK向P-ERK的转化平时 ERK位于胞质内,一旦被激活,可迅速穿过核膜,再激活转录因子和(或)P70核蛋白体S6激酶[2],并调节转录因子的活性,这些转录因子进一步调节各自的靶基因转录,引起相应蛋白的表达或活性改变,最终可影响细胞代谢和功能,产生特定生物学效应,同时P-ERK进入核内后,可以启动一些基因的表达,其产物以异二聚体或同二聚体形式结合成核转录因子激活蛋白-l(AP-1),该因子与myc基因旁的特异的 DNA序列结合,从而启动转录,最信号共同诱导Cyclin D 1的表达和活性,促进细胞周期由G期向S期转化,加速DNA合成,导致细胞的异常增生,修复能力增强,导致细胞进入永生化,形成肿瘤。

我们研究发现,pERK在宫颈上皮内肿瘤的阳性表达率显著高于不成熟鳞状上皮化生,为诊断上皮内肿瘤提供依据,还发现宫颈上皮内各级间其阳性表达率差异无显著意义,但随着级数增高而增高,可能是样本含量过小导致,有待进一步研究。

[1] Mizumoto Y,Kyo S,Moil N,et al.Activation of ERKl/2 occurs independently of KBAS or BBAF status in endomatral cancer and isassociated with favorable prognosis〔J〕.Cancer Sci,2007,98(5):652.

[2] Ebisuy AM,Kondoh K,Nishida E.The duration,magnitude and compartmentalization of ERK MAP kinase activity:mechanisms for providing signaling specificity〔J〕.JCell Sci,2005,118:2997.