乳腺癌淋巴管密度的临床意义

李光明 段百芸

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,且发病率呈逐年上升趋势。乳腺癌的淋巴结转移发生较早,同时又是决定乳腺癌分期和选择治疗方案最关键的因素之一。新近发现的 LYVE-1被认为是目前特异性最强的淋巴管内皮细胞标记物之一,尤为引人注目。本研究采用免疫组化方法检测 LYVE-1在乳腺肿瘤中的表达,计数淋巴管密度(lymphatic vessel density,LVD),并对 LVD与临床病理参数作相关性分析,进一步探讨淋巴管生成与乳腺癌淋巴结转移的关系,为治疗乳腺肿瘤及判断预后提供新思路。

1 资料与方法

1.1 资料

收集 2006年 1月 ～2007年 10月手术切除并经病理检查证实为原发性乳腺癌的石蜡包埋标本 100例,所有患者均为女性,术前未作过放、化疗及内分泌治疗。患者年龄 30～79岁,中位年龄 51岁。参照 2003年 WHO乳腺癌病理诊断标准进行组织学分型,100例乳腺癌中浸润性导管癌 70例,导管内癌 11例,混合型8例,小叶癌 6例,髓样癌 3例,Paget病 2例;伴淋巴结转移 48例,无转移者 52例。参照 1997年 UICC肿瘤TMN标准进行临床分期Ⅰ期 23例,Ⅱ期 49例,Ⅲ期28例。

1.2 方法

石蜡标本 4μm厚连续切片,采用 Envision二步法免疫组化染色,实验步骤按试剂盒说明进行。所用一抗 LYVE-1为鼠抗人单克隆抗体,购自 R＆D公司,工作浓度为 1∶40,PV9000试剂盒,购自北京中杉金桥生物技术有限公司。以 PBS液代替一抗为阴性对照,已知阳性的结肠癌组织切片为阳性对照(随试剂附带)。

1.3 结果判读

1.3.1 LYVE-1阳性的判读 淋巴管内皮细胞胞质呈现棕褐色或黄褐色为 LYVE-1染色阳性表达。

1.3.2 LVD计数 参照 Schoppmann[1]的方法进行计数,先于低倍镜(×40倍)下扫描肿瘤周边部 LYVE-1阳性淋巴管密集区,即“热区”。然后在高倍镜(×200倍)视野下计数 5个热区中 LYVE-1阳性淋巴管数,取平均值,即为淋巴管密度。着棕黄色、不含红细胞、无肌性或纤维性管壁、可有内皮细胞的不整形管腔视为LYVE-1阳性微淋巴管。管腔明显管壁完整不论有无内皮细胞、管壁不完整但有内皮细胞,或成丛的内皮细胞形成多个迂回相连的管腔均计数为 1个微淋巴管。用盲法判定结果,每张切片由两名高年资病理科医师计数,计数差 10%以上则重新计数。

1.4 统计分析

结果用 SSPS11.5统计软件对数据进行分析处理,LYVE-1所标记淋巴管的密度各组数据均用均数 ±标准差±s)表示,各组及组间LVD比较及其与临床病理参数的相关性,采用 t检验、Student-Newman-Keuls检验或方差分析。

2 结果

2.1 乳腺癌和乳腺纤维腺瘤组织中的 LVD

LYVE-1阳性产物为棕黄色颗粒,绝大多数表达在淋巴管内皮细胞上,且多位于肿瘤间质。乳腺癌癌旁组织淋巴管管壁呈棕褐色,数量多,管腔开放,形态不规则,管壁较薄。LYVE-1所标记的乳腺癌癌旁组织淋巴管的平均密度为(9.52±3.47),乳腺纤维瘤组织中淋巴管的平均密度为(1.31±1.02),两者比较,P＜0.01,差异有统计学意义,说明乳腺恶性肿瘤中淋巴管的密度高于乳腺纤维腺瘤。

2.2 LVD与乳腺癌各临床病理参数的关系

LVD与乳腺癌患者的年龄、肿瘤大小、组织学类型、雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progesterone receptor,PR)和 c-erbB2无显著相关(P＞0.05),但与淋巴结转移、临床病理分期显著相关(P＜0.01)。特别是,乳腺癌淋巴结转移患者 LVD显著高于无淋巴结转移者(P＜0.01),提示乳腺癌 LVD与淋巴结转移有关,见表 1。

表1 乳腺癌LVD与临床病理参数的相关性

3 讨论

侵袭和转移是恶性肿瘤的基本特征,也是肿瘤患者致死的主要原因之一。大量临床及病理观察表明,淋巴道转移是肿瘤转移的最常见及最基本的途径;在肿瘤侵袭和转移的过程中,肿瘤的血管和淋巴管生成是肿瘤生长和转移的必要条件。但长期以来由于缺乏淋巴管内皮细胞特异性标记物,肿瘤淋巴管生成的研究相对滞后于肿瘤血管生成。近年来,LYVE-1淋巴管内皮细胞特异性标志物的发现,研究人员利用淋巴管的特异性标志物来计算单位面积中淋巴管的数目,即肿瘤组织中的淋巴管密度(LVD),通过了解肿瘤内部和周围是否有 LVD升高,及 LVD升高是否与肿瘤转移有关,作为判断肿瘤转移与预后的 1个指标[1]。

LYVE-1,是 Banerji于 1999年发现的 CD44糖蛋白的同系化合物,其均匀分布于淋巴管内外腔面,具有从组织摄取透明质酸盐并转运至淋巴液的作用,是被发现的第 1个淋巴道透明质酸盐受体,几乎只特异性地表达在淋巴管内皮细胞上,而在血管内皮细胞上没有表达[2]。后来研究表明 LYVE-1还表达于炎症组织中巨噬细胞的 1个亚群和肝脏、脾脏血管窦内皮细胞,很快有学者通过研究提出这种现象可能与肿瘤细胞和白细胞归巢有关[3]。LYVE-1的出现,使简单而准确地识别淋巴管成为可能,从而在技术上使我们得以研究淋巴管生成。现已有大量的研究以 LYVE-1为标记物证实肿瘤有淋巴管生成,且与肿瘤淋巴道转移具有一定的相关性[4～6]。

本研究对 100例乳腺癌标本癌旁 LVD检测表明,LVD与乳腺癌淋巴结转移、临床病理分期显著相关:临床病理分期越晚,发生淋巴结转移,乳腺癌癌旁LVD越高。但与患者的年龄、肿瘤大小、ER、PR和 cerbB2无显著相关。特别是,乳腺癌淋巴结转移者LVD显著高于无淋巴结转移者,提示乳腺癌癌旁 LVD与淋巴结转移有关。这与 Coskun等[7]的研究结果一致。表明:LVD是反映乳腺癌淋巴结转移的 1个相关指标,对患者预后判断有重要意义。

本研究发现乳腺癌癌旁组织淋巴管数量多,管腔开放,形态不规则,管壁较薄;乳腺纤维腺瘤组织虽见毛细淋巴管,但管腔较小,数量较少;乳腺癌癌旁组织LVD显著高于乳腺纤维腺瘤组织,与文献报道一致。另外,肿瘤和瘤周淋巴管的形态、结构与正常组织中的淋巴管相比,还存在如下特点:在大块癌巢附件处淋巴管因受挤压而呈闭塞状态,其它部位的淋巴管大部分则呈扩张或极度扩张状态,管腔扩大,突向管腔内外的内皮质膜突起大多消失;内皮细胞的连接方式逐渐由复杂型向简单型转变,大量的连接开放便形成较为宽大的内皮细胞通道,癌细胞可经这些通道进入淋巴管;随着肿瘤的生长这种功能性淋巴管增多,同时淋巴管管壁结构也发生变化,在有肿瘤细胞靠拢的地方会出现明显的间隙和缺口,这有利于肿瘤细胞进入淋巴管腔。肿瘤周围存在的扩张淋巴管,与淋巴结转移密切相关[8]。肿瘤周围的淋巴管,可增加肿瘤边缘淋巴管的表面积,后者使肿瘤细胞入侵机会增加。淋巴管数目的增加以及淋巴管的扩张,从而导致LVD的增加,这可能是肿瘤细胞淋巴转移的形态学基础及淋巴管密度的增加的机理。增生或扩张的淋巴管为肿瘤细胞向淋巴结转移提供了途径,因此研究 LVD及其临床意义,对明确淋巴管生成的机制具有一定的意义,可以为乳腺癌的预后判断及抗淋巴结转移治疗提供理论和试验依据。

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