雌激素受体β在子宫内膜中的表达

赵 栋 黄诗颖 翁 雷 孙 静

(1.同济大学附属上海市第一妇婴保健院妇科,上海 200040;2.复旦大学药学院药理教研室,上海 201203)

子宫内膜异位症是一种常见的复杂妇科疾病,发病机制尚不明确,主要临床表现是疼痛及不孕。子宫内膜异位症在正常妇女中发病率为0.5%～5%,而在患不孕症的妇女中高达25%～45%[1]。有研究[2]表明子宫内膜的基质和腺体细胞主要表达雌激素受体α(ER-α),而对于子宫内膜是否表达雌激素受体β(ER-β),研究结果并不一致。本研究应用RT-PCR以及免疫组化法测定ERβ在异位内膜及在位内膜的表达情况。

1 资料与方法

1.1 标本来源 收集2008年7月—2008年12月同济大学附属上海市第一妇婴保健院进行手术治疗的子宫内膜异位症患者异位及其在位子宫内膜标本,常规4%甲醛固定,石蜡包埋。收集异位内膜标本15例,对应增生期在位内膜12例,分泌期在位内膜3例,患者年龄23～41岁,平均年龄35岁。选择同期因宫颈病变行全子宫切除患者的子宫内膜15

例作为对照,增生期10例,分泌期5例,患者年龄36～49岁,平均年龄45岁。所有患者月经周期规律,术前半年之内未接受激素治疗,术前签署知情同意书。

1.2 逆转录聚合酶链式扩增 采用Trizol法制备总RNA,制备的RNA样品用核酸定量分析仪检测OD260、OD260/OD280的值,并计算 RNA产量。所用Trizol试剂购自GIBCO公司,逆转录试剂盒购自Promega公司。

1.3 免疫组织化学染色 主要步骤包括5μm切片,脱蜡水化,抗原修复,封闭内源性过氧化物酶。一抗为小鼠抗人ERb(Serotec,UK),二抗为连接生物素的马抗小鼠抗体(Vector Lab,CA),非特异性的小鼠IgG作为阴性对照,已知阳性的卵巢组织作为阳性对照。

2 结 果

2.1 逆转录聚合酶链式扩增 组织的OD260/OD280在1.8～2.0,RNA的纯度高,同时得到总RNA的浓度;紫外灯下28S、18S带清晰,5S带模糊,RNA的完整性好。在位及异位内膜组织中ER-βmRNA阳性表达率均为100%。

2.2 免疫组化 ER-β在内膜异位症患者的异位内膜病灶,在位内膜及正常对照组的在位内膜的基质细胞和腺上皮细胞均不表达,仅有部分血管内皮细胞表达ER-β(图 1)。

图1 A正常卵巢组织(阳性对照)B对照组子宫内膜C子宫内膜异位病灶D内膜异位症患者的在位子宫内膜

3 讨 论

子宫内膜异位症是一种雌激素依赖性的疾病,雌激素可以刺激异位内膜细胞的增殖,是内膜异位病灶形成的必要条件之一[3]。ER-β激动剂在小鼠子宫内膜异位症模型中可有效治疗子宫内膜异位症,使得研究者对于ER-β在子宫内膜细胞中的作用产生极大的兴趣。因为雌激素作用绝大多数是通过受体介导的,所以要了解这种新的雌激素受体在子宫内膜异位症的作用,首先必需了解ER-β在子宫内膜组织中的分布情况。有关ER-β在子宫内膜中及内膜异位病灶的表达,虽有相关报道,但结果不一[4-5]。分析其原因主要是试验试剂及试验方法的不同。有些学者用流式细胞技术检测雌激素受体,首先细胞在制备过程中生化特性可能发生改变;其次,流式细胞技术主要用于检测细胞表面抗原,而且雌激素受体为核蛋白,抗体要与细胞结合,必须破坏核膜,或者用注射器将抗体注入细胞核内同时固定,所以用流式细胞技术研究核蛋白在方法上面值得商榷。

本研究用RT-PCR法探测15例子宫内膜异位症患者的在位及异位内膜以及15例非内膜异位症患者的子宫内膜,结果显示内膜异位症组及对照组均表达ER-αmRNA。免疫组化法测定正常组及对照组子宫内膜蛋白质分布结果显示子宫内膜基质细胞及腺上皮细胞的细胞核中均无ER-β蛋白表达,只有血管内皮细胞表达ER-β。本试验采用小鼠抗人的单克隆抗体具有极高的特异性,使用非特异独特型抗体作为阴性对照有效地排除假阳性,结果直观、真实、可靠。

特异性ER-β激动剂在小鼠模型中可有效治疗包括子宫内膜异位症在内的一些炎性疾病,目前正在进行人类的临床研究。而子宫内膜及异位内膜的细胞核中很可能无ER-β存在,所以,ER-β激动剂对于子宫内膜异位症的治疗作用可能为非受体依赖性的。它可能是通过影响细胞增殖、自然凋亡、免疫系统、新生血管形成、或者下丘脑-垂体-卵巢轴等起的作用,不过这还需要进一步研究加以验证。

1 Ozkan S,Murk W,and A rici A.Endometriosis and infertility:epidemiology and evidence-based treatments[J].Ann Acad Sci,2008,1127:92-100.

2 Brandenberger AW,Lebovic DI,Tee DK,et al.,Oestrogen recep tor(ER)-alpha and ER-beta isoforms in normal endometrial and endometriosis-derived stromal cells[J].Mol Hum Reprod,1999,5(7):651-655.

3 Lebovic,DI,Mueller MD,Taylor RN,Immunobiology of end ometriosis[J].Fertil Steril,2001,75(1):1-10.

4 王海霞,解其贵,赵俊红,等.子宫内膜癌雌激素受体α、β亚型和孕激素受体m RNA表达与临床病理的关系[J].中国临床医学,2008,15(6):863-865.

5 Lecce G.,Meduri G,A ncelin M,et al.,Presence of estrogen receptor beta in the human endometrium through the cycle:expression in glandular,stromal,and vascular cells[J].JClin End ocrinol Metab,2001,86(3):1379-1386.