黑龙江省实验大鼠遗传学概貌分析

韩凌霞，刘霄磊，牛成明，周 刚，司昌德，曲连东

（1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物中心，哈尔滨 15001；2.黑龙江省实验动物质量监督检验站，哈尔滨 15001）

2008年，本实验室根据国家标准《实验动物近交系小鼠、大鼠生化标记检测方法》［1］GB/T 14927.1-2001，对黑龙江省5个生产单位的送检大鼠进行了生化标记位点的检测，品系包括SD、Wistar、DA和PVG大鼠，对其遗传概貌进行了描述。

1 材料和方法

1.1 实验动物

2008年黑龙江省实验动物质量监督检验站承检的5批送检大鼠，送检编号分别为2011、2014、3026、8028和8029，被检品系分别为SD、Wistar以及新引进的DA和PVG，各5只。

1.2 仪器设备与试剂

DYY-6C型稳压稳流电泳仪、电泳微量点样器和醋酸纤维板购于北京六一仪器厂，实验动物大鼠遗传检测试剂盒购自中国药品生物制品检定所（批号：0407），检测所用生化试剂均为分析纯。

1.3 样品的制备

按照参考文献［1］制备样品。将大鼠逐一放在通风橱内干燥器内乙醚麻醉，至站立不稳后取出。摘眼球采血，常规方法制备血清。另取肾脏、部分小肠、部分肺脏、2侧睾丸，分别在研钵中加石英砂研磨，转移在1.5mL的EP管中称重，加2倍（v/m）蒸馏水混匀，4℃12 000r/min离心10min。保留上清液，立即检测，或在4℃备存。

1.4 各同工酶的检测

参照国标，分别对相应组织中的Akp1、Es1、Es3、Es4、Es10和Es6、8、9等8种同工酶的表达情况进行检测。

2 结果

2.1 碱性磷酸酶-1（Akp1）的检测结果

利用肾脏组织对Akp1位点进行了检测，结果所有被检样品都出现明显的2条带，如箭头所示为a带型，带型清楚。见图1。各样品用送检单位的编号表示，余下图例略同。

2.2 酯酶-1（Es1）的检测结果

以血清为检测组织，结果表明存在a、b两种带型。其中送检单位2011全部个体、2014中3个体（泳道7、9、10）、3026全部个体为a带型，其余个体为b带型。如箭头所示，见图2。

2.3 酯酶-3（Es3）的检测结果

利用小肠组织对Es3位点进行了检测，结果显示各品系个体都是a带型，如箭头所示，见图3。其中SHR、BN、SD和F344为标样。

2.4 酯酶-4（Es4）的检测结果

利用肾脏组织对Es4位点进行了检测，结果所有被检组织都出现明显的3条带，为b带型，图略。

1～5：来自2011；6～10：来自2014；11～15：来自3026；16～20：来自8028；21～25：来自8029图1 Akp1的检测结果1-5：from 2011；6-10：from 2014；11-15：from 3026；16-20：from 8028；21-25：from 8029Fig.1 The results ofAkp1 detection in the rats

1～5：2011；6～10：2014；11～15：3026；16～20：8028；21～25：8029图2 Es1的检测结果1-5：2011；6-10：2014；11-15：3026；16-21：8028；22-26：8029Fig.2 The results of Es1 detection in the rats

1～5：2011；6～7、11～13：2014；8：SHR；9：BN；10：SD；14～18：3026；19：F344；20～25：8028；26～29：8029图3 Es3的检测结果1-5：2011；6-7 and 11-13：2014；8：SHR；9：BN；10：SD；14-18：3026；19：F344；20-25：8028；26-29：8029Fig.3 The results of Es3 detection in the rats

1～5：来自2011；6：WKY；7：SHR；8～12：来自2014；13～17：来自3026图4 Es10的检测结果1-5：2011；6：WKY；7：SHR；8-12：2014；13-17：3026Fig.4 The results of Es10 detection in the rats

表1 各被检单位在8个生化标记位点的检测结果Tab.1 The results of detection of 8 biochemicalmarkers in rats from different resources

2.5 酯酶-10（Es10）的检测结果

肺脏样品在Es10位点出现3条带，均为b带型，如箭头所示。8028和8029未检测。见图4。

2.6 酯酶-6，8，9（Es6，8，9）的检测结果

由于Es6，8，9的被检组织来自睾丸，所以只对雄性个体进行了检测。结果表明，2011带型为Es6-a、Es8-b、Es9-a；8028大鼠带型为Es6-a、Es8-b、Es-9a；8029大鼠带型为 Es6-b、Es8-a、Es-9c（图略）。

3 讨论

目前实验动物遗传检测的国家标准方法，除生化标记同工酶之外，还有下颌骨形状分析法和皮肤移植法，但皮肤移植法，一般需观察100d左右［2］。对实验小鼠、大鼠的遗传质量监测在国内外主要采用皮肤移植法和生化标记基因法［3-5］。所以我们选用生化标记基因法进行对送检大鼠的遗传概貌进行了分析。

本研究参照实验动物生化标记检测方法的国家标准［1］，分别对5批送检大鼠的相应组织中Akp1、Es1、Es3、Es4、Es10和Es6，8，9等8种同工酶的表达情况进行了检测。检测结果发现，来自送检单位2011和3026的大鼠在Es3位点中虽都出现3条带，属于a带型，但个体之间仍存在表达量、迁移率等差异；来自2014的大鼠在Es1和Es3位点中个体之间存在带型差异，体现了封闭群的杂合特点。带型汇总见表1。

8028和8029分别是新引进的DA大鼠与PVG大鼠，国标中没有相应位点的描述，且送检个体较少，本研究的检测结果与已发表的研究结果一致［6］。

［1］GB/T 14927.1-2008实验动物近交系小鼠、大鼠生化标记检测方法［S］.

［2］GB/T 14927.2-2001实验动物近交系小鼠、大鼠皮肤移植法［S］.

［3］孙贺娟，王冬平，王钜，等.长爪沙鼠生化基因为点检测方法的建立［J］.上海实验动物科学，2004，24（4）：211-213.

［4］李华，王太一，史晓平.生化标记基因法对近交系小鼠扩大生产群的遗传检测［J］.中国实验动物学杂志，1996，6（1）：43-46.

［5］史顺娣，王丹，赵宏旭，等.采用电泳法对近交系大鼠进行遗传监测［J］.中国医学科学院学报，1988，10（5）：311-316.

［6］林彦，唐小玲，王洪，等.近交系DA大鼠遗传学质量［J］.中国比较医学杂志，2009，5（19）：59-61.