瓶尔小草黄酮类化合物的分离及紫外光谱鉴定

张志信,张仕秀

(文山学院生化系,云南文山 663000)

瓶尔小草科植物瓶尔小草 (Ophioglossum vulgatumL.)又称一支箭、一支枪、独叶一支箭、单枪一支箭、一矛一盾、矛盾草、蛇须草。以全草入药,清热解毒,消肿止痛。用于小儿肺炎,脘腹胀痛,毒蛇咬伤,疔疮肿毒;外用治急性结膜炎,角膜云翳,眼睑缘炎。分布东北、陕西、湖北、云南、贵州、广西、台湾及长江下游等地[1-2]。

黄酮类化合物广泛存在于植物中,生理活性作用广泛,能维持血管正常的渗透压、防止血管脆化,对多种炎症、冠心病、心绞痛等均有良好的疗效。同时,黄酮类化合物还是一种良好的活性自由基清除剂,具有调整免疫和内分泌作用,还有抗癌、抗炎等多种医疗保健作用,是一类重要的生物活性因子。据文献报道瓶尔小草中主要含 3-O-甲基槲皮素、7-O-双葡萄糖苷、4′-O-葡萄糖苷[3]。瓶尔小草功效与黄酮类化合物有着密切关系,实验通过探讨瓶尔小草中黄酮类化合物的提取、紫外光谱分析,从而判断瓶尔小草中黄酮类化合物的特性,为充分利用瓶尔小草资源提供依据。

1 仪器、试剂及材料

1.1 仪 器

UV-2550紫外分光光度计 (日本岛津),R-201旋转蒸发器 (上海申顺生物科技有限公司),DZF-6020型真空干燥箱 (上海 -恒科技有限公司),DHG-9076A型电热恒温鼓风干燥箱 (上海跃进医用光学器械厂),XA-1型高速万能植物粉碎机 (江苏姜堰市洪林电器设备厂)。

1.2 试 剂

乙醇,甲醇,盐酸,氯化铝,硅胶板,氢氧化钠,硼酸,醋酸钠,冰乙酸,正丁醇,氯化铁均为分析纯。

1.3 材 料

瓶尔小草,购于文山县中草药市场,经文山学院沐建华老师鉴定为瓶尔小草科植物瓶尔小草。

2 实验方法

2.1 黄酮类化合物的提取

瓶尔小草洗净称取烘干后粉碎,过 60目筛,取100 g,加 8倍量的 75%乙醇回流提取 1.5 h,重复提取 3次,合并 3次提取液抽滤,滤液浓缩至浸膏状,加 1/3倍量聚酰胺粉拌成糊状,60℃真空干燥后研磨成细粉备用。[4]

2.2 聚酰胺树脂的预处理

以 95%乙醇浸泡 24 h后,4倍体积 95%乙醇洗脱,控制流速 1 mL/min,再以大量蒸馏水洗至无醇味,备用。

2.3 分离纯化

取处理好的聚酰胺粉,均匀放置于聚酰胺柱顶端,用蒸馏水洗至颜色极淡,再分别用 10%,30%,50%,70%和 90%的乙醇溶液作为洗脱剂,以 1 mL/min流速依次洗脱,分别收集各梯度洗脱液,减压浓缩至干,重结晶。

2.4 紫外光谱特性

将样品分别用甲醇溶解,制备成 0.04 mg/mL的溶液,然后在UV-2550紫外分光光度计上测定,以甲醇作参比液,扫描范围为 200～600 nm,再在提取物的甲醇溶液中加入不同的诊断剂,以无水甲醇作参比进行扫描。[5-6]

3 结果与分析

选取各种浓度的乙醇洗脱液进行紫外光谱特性分析,分别得到 10%,30%,50%,70%和 90%乙醇洗脱液的紫外特征情况,结果见表 1～5所示。

表1 10%乙醇洗脱液的紫外特征

表2 30%乙醇洗脱液的紫外特征

表3 50%乙醇洗脱液的紫外特征

表4 70%乙醇洗脱液的紫外特征

表5 90%乙醇洗脱液的紫外特征

4 结 论

由 10%,30%,50%,70%和 90%乙醇洗脱液的紫外光谱特性分析可知,在无水甲醇溶液作为溶剂的溶液中,其紫外特征在带Ⅰ (300～400 nm),带Ⅱ (220～280 nm)处都有明显的吸收峰,当在不同乙醇浓度的洗脱液的甲醇溶液中加入不同的诊断剂后,其吸收峰都发生了明显的红移现象。在溶有醋酸钠的甲醇溶液中加入硼酸后,因结构中邻二酚羟基可在醋酸钠的碱性条件下与硼酸鳌合,引起相应的峰带红移,在 70%乙醇洗脱液中此红移现象较明显,可判断此提取物中的黄酮类化合物结构中含有B环上有邻二酚 OH。当加入甲醇钠后立即测定,90%乙醇洗脱液带Ⅰ红移 55 nm,由此可判断其母核上含有有 4′-OH或 7-OH;70%乙醇洗脱液带Ⅰ红移 65 nm,由此可判断其母核为查耳酮则含有 4′-OH或 2-OH,带Ⅱ红移 47 nm,有 5,7-二 -OH;50%乙醇洗脱液带Ⅰ红移 53 nm,由此可判断其母核上含有 4′-OH或 7-OH,30%乙醇洗脱液带Ⅰ红移 53 nm则母核有 4′-OH或 7-OH,带Ⅱ红移 7 nm,A环无羟基 10%乙醇洗脱液带Ⅰ红移 53 nm由此可判断其母核上有 4′-OH或 7-OH,带Ⅱ不红移 A环无羟基[7]。

[1] 朱成兰.云南常用中草药彩色图谱[M].海口:海南出版社,2003:203.

[2] 范亚文,包文美,王全喜.中国瓶尔小草科植物孢子形态的研究[J].西北植物学报,1997,(6):182.

[3] 赵保发,张志信,张仕秀,等.不同采收季节瓶尔小草黄酮类化合物含量分析 [J].时珍国医国药,2009,(2):345-346.

[4] 肖义军,陈元仲,陈炳华,等.不同寄主红花桑寄生总黄酮提取物抗白血病细胞株 HL-60的研究 [J].中国中药杂志,2008,(4):427-431.

[5] 张海德,张水华,肖凯军,等.酱油中黄酮类物质的分离与鉴定[J].食品与发酵工业,2008,(1):46-49

[6] 郭珍.紫外光谱在天然产物结构鉴定中的应用[J].光谱实验室,2006,(3):594-597.

[7] 田燕.紫外 -可见光谱在黄酮类鉴定中的应用 [J].大连医科大学学报,2002,(3):312-214.