吴 佳
(长沙民政职业技术学院,湖南 长沙 410004)
HPLC法测定不同产地黄连中小檗碱的含量
吴 佳
(长沙民政职业技术学院,湖南 长沙 410004)
目的:对黄连中主要成分进行全面分析,评价不同产地和品种的黄连药材的内在质量,以开发生药资源。方法:采用色谱柱为Alltima C18(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为乙腈-0.05mol磷酸二氢钠水溶液 (磷酸调PH=2.5)(30∶70),流速0.8 ml·min-1,检测波长345 nm。结果:盐酸小檗碱进样量在0.09~1.81μg范围内呈良好的线性关系,r=0.9998,平均回收率为101.20%。结论:本方法快速简便,结果准确、可靠,重现性好,可用于评价黄连的内在质量。
HPLC;黄连;小檗碱
黄连为毛茛科植物黄连Coptis chinensis Franch.、三角叶黄连Coptis deltoidea C.Y.Cheng et Hsiao或云连Coptis teeta Wall.的干燥根茎[1]。味苦、性寒、入心、肝、胃、大肠经,功能清热燥湿、泻火解毒。是一种很好的清热解毒消炎药,具有广谱抗生素的作用。常用于治疗湿热内蒸、痞满胀闷、烦躁呕逆、泄泻痢疾、消渴、暴发火眼、痈疽肿毒、中耳炎、急性扁桃体炎、百日咳、大叶性肺炎、流行性脑脊髓膜炎、胆囊炎等,且具有抗癌、抗放射及促进细胞代谢的作用[2]。近年来,黄连复方中的药理和临床研究也有了新的发现,并扩大了应用范围,引起了人们对黄连的特别关注。但由于野生资源的过度采挖及旅游开发等诸多因素,使黄连的自然环境遭到严重破坏,野生资源状况堪忧。市场紧缺的需求和随着国家对GAP的倡导,国家和地方也加大了黄连人工栽培的支持力度,使其黄连的资源状况得到了缓解。然而人工栽植品种黄连的品质如何综合评价?黄连中主要的药效成分为生物碱,而小檗碱又是黄连中含量最大的生物碱,所以本文以小檗碱的含量做为指标,评价不同产地的黄连的内在质量。
Agilent 1100高效液相系统,二极管阵列检测器,HP工作站;AlltimaC18(4.6 mm ×250 mm,5 μm);KQ-100超声仪,Sartorius电子天平,乙腈、甲醇为色谱纯,水为高纯水,其余试剂均为分析纯。盐酸小檗碱购自中国药品生物制品检定所,纯度为99%。黄连药材采自四川、广州等地,经鉴定为黄连Coptis chinensis的干燥根。
2.1 色谱条件
色谱柱为 Alltima C18(4.6 mm ×250 mm,5 μm)。流动相:乙腈-0.05mol磷酸二氢钠水溶液(磷
酸调 PH=2.5)(30∶70),柱温30℃,流速0.8 ml·min-1,检测波长345 nm。上述色谱条件下,小檗碱与其它各组分离度良好。
2.2 对照品溶液的制备
图1 盐酸小檗碱对照品及样品色谱图
取对照品盐酸小檗碱适量,精密称定为44.56 mg,置于10 mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度,为对照品溶液。将上述溶液保存于4℃冰箱中,备用。
B 2.3 供试品溶液的制备
取黄连药材粉末(过40目筛)约0.1g,精密称定,置于50 mL容量瓶,精密加盐酸-甲醇(1∶100)溶液约45ml,60℃水浴锅中温浸15分钟,超声处理30分钟,冷却至室温,加盐酸-甲醇(1∶100)溶液至刻度。过滤,取续滤液过0.45 μm滤膜,5 L进样。色谱图见图1
精密吸取上述对照品溶液 1μL、2μL、5μL、10μL、15μL、20μL,进样 HPLC分析。以峰面积积分值对应进样浓度回归处理,计算得小檗碱的标准曲线Y=6223.8 x+104.74,r=0.9998,结果表明小檗碱在0.09-1.81μg范围内进样浓度与峰面积之间呈良好的线性关系。
精密吸取同一供试品溶液5 μL于同一天内连续进样5次,记录小檗碱的峰面积,得出日内精密度为1.55%,见表1;精密吸取同一供试品溶液5 μL连续进样3 d,每天3次,记录峰面积,以上小檗碱成分的日间精密度分别为1.43%,见表2。表明仪器较为稳定。
表1 日内精密度结果
表2 日间精密度结果
精密吸取同一供试品溶液5 μL分别于配制后的0,2,4,8,12,24,48,72 h 测定面积积分值,小檗碱稳定性的RSD为1.03%,见表3。表明处理后的样品在3 d内稳定。
表3 稳定性实验结果
称取黄连药材粉末约0.1g共6份,精密称定,按2.3项下制备样品,测定小檗碱的平均含量为48.07 mg·g-1,RSD 为 1.41%,见表 4。
表4 重复性实验结果
精密称取适量已知含量的黄连药材粉末(60目)6份,加入一定量的2.2项下对照品溶液,按2.3项下制备样品,测定,计算加样回收率,小檗碱的加样回收率为101.20%,RSD为1.24%,见表5。
表5 加样回收率实验结果
按样品溶液制备法制备十批样品溶液,同法进行测定,外标法计算结果,见表6。
表6 样品含量测定结果
由表6可知,十个产地的黄连中小檗碱的含量为88.01mg/g-43.99mg/g之间,可用来评价黄连质量。其中四川洪雅和云南的小檗碱最高,这与传统的道地药材雅连、云连质量优相符,另外湖南邵阳产的黄连小檗碱含量也较高,这对于发展湖南中药材事业,开发优质高产的中药资源提供有力依据。此实验结果摸索出的测量方法简单、准确,可以很好地评价黄连的质量,为更好地评价黄连药材的优劣提供依据。
[1]国家药典委员会.中国药典Ⅰ部[S].北京:化学工业出版社,2005.213.
[2]田智勇,李振国.黄连的研究新进展[J].时珍国医国药,2004,15(10):704 -706.
R282
A
1671-5136(2010)02-0132-03
2010-04-25
吴 佳 (1982-),女,湖南沅江人,长沙民政职业技术学院艺术学院辅导员、湖南中医药大学中药学专业硕士。