微柱凝胶间接免疫分析技术在血小板抗体筛查及交叉配血中的应用

孙长杰 林海兰

[摘要] 检测受血者血清中是否存在待输血小板的抗体,或反复输注血小板、全血及含有血小板的血液制品后产生血小板抗体,导致输注血小板无效。只有经过血小板抗体筛查和配型,输注与患者相合或基本相合的血小板,才能达到安全有效的输注血小板疗效,另外血小板抗体筛查可协助诊断某些血小板减少症。血小板输注无效的特征是多次输血小板均未取得满意效果。有些病人可能有一次输血小板效果不好,而以后几次效果不错。只有在2次及2次以上输血小板效果都不好,才能诊断为血小板输注无效。

[关键词] 微柱凝胶间接免疫分析技术;血小板抗体筛查;血小板特异性抗原;血小板配型试验

[中图分类号] R552[文献标识码] A[文章编号] 1004-8650(2009)05-020-02

1原理

微柱凝胶中依次加入稀释液、受检者血清、血小板、指示红细胞。指示红细胞上包被有动物抗人血小板抗体,该抗体Fc段结合在人红细胞膜上,Fab段与血小板结合,如果受检者血清中存在抗血小板抗体,该抗血小板抗体Fab段亦与血小板抗原结合,相邻的抗血小板抗体Fc段通过抗人球蛋白搭桥连结成网络状凝聚复合物,即以抗人球蛋白为桥,连接抗血小板抗体、血小板和指示细胞,形成指示红细胞—血小板—抗血小板抗体—抗人球蛋白-抗血小板抗体—血小板—指示红细胞免疫复合物,形成凝集网络。该复合物在一定离心力下,浮于胶表面或位于胶中;如果受检者血清中无抗血小板抗体,则不能形成上述网络状血凝复合物,指示红细胞沉于微注凝胶管尖底部。

血小板输注无效的判断原则:不正常反应:1小时血小板回收率(PPR)<30%或血小板寿命<2天;不成功输注:1小时血小板增加指数(CCI)<7.5×109-10×109/L;18小时血小板增加指数(CCI)<4.5×109-7.5×109/L。

如果CCI或PPR不能达到,则输后血小板增加<5×109/L(输注1个单采量)可作为输注无效的指标。其原因可分为免疫、非免疫和血小板质量低下三类。

2讨论

血小板输注效果的判定主要以血小板的回收率和校正血小板计数增加值为指标。血小板的回收率与发热、感染、DIC、出血、脾肿大等因素有关,而最重要的是患者体内是否存在血小板同种抗体。理想的血小板交叉配合试验应该包括HLA型和HPA型均能达到配合,才能达到有效的血小板治疗的目的。

简易致敏血小板血清学试验技术方法:标本用量少,保持时间长,可作为一般实验室输血的常规筛选及血小板减少性疾病的诊断等方面的临床应用;可以采用保存血小板做配合性试验,但试验过程较繁琐,需要进间相对较长,难以保证配合性血小板的及时发出,影响临床使用。

HLA淋巴细胞毒试验:LCT灵敏度均较高主要针对患者HLA抗体,对于混合抗体或HPA抗体引起的PTR效果不佳,但在我们检测的样本中,血小板抗体阳性患者均含有HLA抗体,很少单纯HPA抗体。

单克隆抗体固相血小板抗体试验:为针对HPA和HLA的试验方法,但患者血清纤维蛋白原干扰或血小板浓度高均导致假阳性结果,血小板浓度低会导致假阴性。另外,实验方法一般用富含血小板血浆进行配型实验,要求采用供者新鲜血样,如果应用保存血小板进行配合性实验,供者血小板浓度需要调整。

酶联免疫吸附实验方法:是最常用的检验方法,但这些方法缺点较多,如操作复杂、费时或特异性低。

流式细胞术:是一种单细胞定量分析的新技术,具有快速、灵敏的特点,但费用昂贵不易于用于常规检查。

微柱凝胶间接免疫分析技术:为检测血小板抗原抗体反应提供了最为理想的方法,操作简单、方便、快捷;结果更为准确和高度特异性,容易观察,重复性好,保存时间长,实验步骤标准化,自动化程度高,所需标本量少等优点。所用时间短,整个试验过程在30分钟以内,基本同红细胞血型交叉配血试验所需时间,并可用于大量标本,数十份标本同时检测,故可以用于临床常规的血小板配型试验。

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(收稿日期2009-02-03)