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报告基因

  • 胆汁酸和 MAPK信号通路对 HepG2细胞中 PPARα转录表达的调控作用
    域的荧光素酶报告基因质粒,通过双荧光素酶报告基因系统在HepG2细胞中研究了ERK1/2、JNK1/2信号通路、FXR以及胆汁酸对hPPARα转录表达的调控作用,并进一步验证参与调控的顺式作用元件,为防治NAFLD的研究提供新思路。1 材料和方法1.1 细胞株及主要试剂人肝癌细胞HepG2购自中科院上海细胞库;人胚胎肾细胞HEK293T由广州大学精准基因编辑中心乔云波教授课题组馈赠;萤火虫荧光素酶报告基因质粒PGL4-UPRE-luc2P-Hygro(10

    山西医科大学学报 2023年10期2023-11-24

  • 放射性核素探针在嵌合抗原受体T 细胞治疗显像中的应用
    接标记显像、报告基因显像和内源性细胞显像，笔者将对这3 种显像方法的优劣势进行综述，并展望未来的发展方向。1 直接标记显像直接标记是指使用放射性核素对CAR-T 标记的技术，其标记过程简单，对细胞的操作较少。根据小分子和纳米颗粒能在体内滞留的特性，CAR-T 可使用小分子和纳米颗粒直接进行放射性标记。1.1 基于小分子的标记Parente-Pereira 等[9]用111In-tropolate 直接标记CAR-T 后，发现通过静脉注射时，111In-tr

    国际放射医学核医学杂志 2023年5期2023-08-15

  • 双重数字PCR法评价Luc2P系列报告基因细胞系的稳定性
    速发展，基于报告基因的生物活性分析方法越来越广泛地应用于重组蛋白类药物的质量控制［1-5］。《中国药典》三部（2020版）已收录了2个品种的报告基因测活方法：Ⅰ型干扰素和康柏西普［6］。药物反应性的报告基因细胞系是此类方法的基础，细胞系的稳定性是方法稳定性的前提。因此，对于报告基因测活方法，报告基因细胞系的稳定性至关重要。可通过监测细胞传代过程中报告基因拷贝数变化来考察细胞的稳定性。目前检测基因拷贝数的常用方法是qPCR，但该法为相对定量，需要标准物质［7

    中国生物制品学杂志 2023年7期2023-07-30

  • 鸡PPARγ基因转录本5的两个上游开放阅读框功能分析
    。本研究采用报告基因和定点突变等技术，开展cPPARγ5 两个uORFs 功能分析。1 材料与方法1.1 试验材料pcDNA3.1（+）真核表达载体（购自美国Invitrogen 公司）， pGL3-basic 荧光素酶报告基因载体（购自美国Promega 公司），海肾报告基因载体pGL3-TK（购自美国Promega 公司），5'UTR 转录后分析用报告基因载体psiCHECK2（本实验室保存）[12]。鸡永生化前脂肪细胞系ICP1（本实验室保存），鸡胚

    东北农业大学学报 2023年1期2023-02-07

  • 基于NF-κB荧光蛋白报告基因抗肿瘤药物筛选平台的建立
    细胞模型、以报告基因和其他类型连用为靶点的细胞模型。事实上，前3种药物筛选细胞模型通常均是与报告基因联用建立起来的，这样可以快速且直观地观察到药物作用于细胞后的变化。常用的报告基因有5种，分别是荧光素酶（luciferase，Luc）［10］、 氯霉素乙酰转移酶（chloramphenicol acetyltransferase，CAT）［11］、 β-半乳糖苷酶（β-galactosidase，β-gal）［12］、 分泌性人胎盘碱性磷酸酶（secret

    激光生物学报 2022年6期2023-01-11

  • 内皮细胞与前肾细胞的命运决定受转录因子Cloche/Npas4l、Tal1和Lmo2的调节
    成了一个敲入报告基因，以观察野生型和突变型胚胎中内皮祖细胞及其衍生物。出乎意料的是，研究人员发现在npas4l突变体中，表达npas4l报告基因的细胞对前肾小管的形成有贡献。野生型胚胎早期侧板中胚层的单细胞转录组学和活体成像确实揭示了内皮和前肾标记物的共表达，这一发现被基于creERT2的谱系追踪所证实。在tal1和lmo2突变体中也观察到表达npas4l报告基因的细胞对前肾小管的贡献增加，并且在注射了tal1mRNA的npas4l突变体中这种作用被逆转。

    广东药科大学学报 2022年5期2022-12-30

  • 视网膜神经节细胞特异的报告基因干细胞系构建及其应用
    的治疗。利用报告基因将视网膜神经节细胞可视化，使我们能够更直观地了解其发育过程，也有利于后续的富集再利用。封面展示了视网膜神经节细胞特异的荧光报告基因干细胞系在眼科学研究中的应用。封面主体由三个元素组成：视网膜类器官在明场下的形态、同一区域在荧光显微镜下的形态和切片染色的荧光图像组成。封面上部为类器官形态图，明场形态及其对应荧光图像构成一个类似眼睛的图案，一方面以显示该干细胞系的部分应用，昭示它的建立可以在眼科学研究中起重要的作用；另一方面明场图像和荧光图

    眼科学报 2022年4期2022-11-23

  • 昆虫双杂交实验中家蚕BmHSP83和BmMAD3蛋白引起的假性现象
    uc荧光素酶报告基因的表达(图1)。将两个待测蛋白(X和Y)分别构建成pIE2-DBD-X和pIE2-AD-Y两个载体，与pUAS-Luc一起共转染昆虫细胞，如果两个蛋白相互作用，则触发下游报告基因的表达。昆虫双杂交依靠荧光素酶检测系统来反映昆虫细胞内蛋白质的相互作用特性，因而在研究昆虫蛋白质相互作用方面具有独特的优势。昆虫双杂交(I2H)是在酵母双杂交(Y2H)技术基础上发展起来的一种蛋白质互作分析技术，使那些无法用Y2H分析的蛋白，尤其是那些受到翻译后

    环境昆虫学报 2022年1期2022-03-24

  • 转录因子STAT5A启动子荧光素酶报告基因质粒的构建及鉴定
    前双荧光素酶报告基因系统是转录水平调控研究重要的实验方法。通过对启动子序列和活性的分析，验证启动子结合元件的反式激活能力，进而验证基因之间的转录调控关系[1]。乳腺癌现已超过肺癌，成为全球最常见的恶性肿瘤。而作为体表肿瘤，乳腺癌的转移是患者因癌症死亡的主要原因[2]。根据文献报道，在发育的乳腺中，催乳素(prolactin，PRL)所介导的PRL-JAK2-STAT5A是较经典的调控分子通路，可以调控乳腺发育、增殖、分化、泌乳等重要功能[3-4]。在催乳素

    癌变·畸变·突变 2022年1期2022-02-15

  • 一种基于PXR启动子报告基因药物筛选方法的构建及其应用
    有极大意义。报告基因技术在基于细胞检测方法的开发中发挥了重要作用［11］。本实验旨在建立pGL3-basic-PXRpro报告基因药物筛选方法，并考察恩诺沙星、氟苯尼考以及10种连翘天然产物激活mPXR的诱导效应。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 实验动物、细胞株与质粒 昆明小白鼠（20± 5 g）购自中国科学院兰州兽医研究所实验动物中心（SCXK（甘）2015-0001）。动物购进适应性饲养3 d开始实验，小鼠饲养条件：温度（24±2）℃、湿度50%

    生物技术通报 2021年9期2021-11-06

  • 对肿瘤内miR-21表达进行契伦科夫光学成像的新方法：基于HSV1-tk报告基因
    分子影像学与报告基因方法相结合，可展示基因的原位表达情况，一定程度上弥补了上述不足［6］。典型的报告基因体系，如I型单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV1-tk）报告基因，结合9-［4-［18F］氟-3-(羟甲基)丁基］鸟嘌呤（［18F］FHBG）示踪剂和正电子发生断层成像（PET），已获美国食药监局批准用于临床成像［7］。已报道的microRNA表达报告基因活体成像策略有［8］：（1）整合原microRNA启动子基因与光学报告基因，构建直接展示相应microRN

    分子影像学杂志 2021年3期2021-07-18

  • Rb荧光素酶报告基因检测系统构建及检测能力评估
    种易于检测的报告基因系统对于研究Rb基因与肿瘤发生的关系和筛选靶向治疗药物具有重要意义。报告基因(reporter gene)是一类可以编码荧光蛋白或酶，从而将看不见的底物转化为发光或彩色产物的一类基因，是生物医学领域基础研究的一个重要工具，广泛应用于检测细胞的信号转导和基因表达。通过在报告基因上附加元件来调节报告基因的活性，利用光学成像技术实时报告其表达的位置或水平，使了解疾病的分子基础和体外药物研发成为可能[5]。本实验选择以荧光素酶作为报告基因构建R

    西安交通大学学报（医学版） 2021年3期2021-05-15

  • 双荧光素酶报告基因系统在家蚕基因启动子研究中的应用
    至双荧光素酶报告基因表达载体中，通过检测双荧光素酶报告基因系统荧光蛋白的酶活，从而分析目的基因启动子的转录活性，这是基因转录调控研究中常用且有效的手段之一[2]。家蚕是鳞翅目昆虫的模式生物，本文以家蚕基因启动子调控机制的研究为切入点，对双荧光素酶报告基因系统的工作原理与特点、研究和应用现状进行综述，有助于我们从细胞和分子层面理解昆虫生长发育过程的基因转录表达调控机制，为今后该系统在昆虫中的深入应用提供思考。1 双荧光素酶报告基因系统的发展历史荧光素酶是最初

    广东蚕业 2021年1期2021-03-18

  • 开放实验教学 优化分子生物学精品实验项目
    设计了“通过报告基因检测细胞内cAMP 水平变化”“哺乳动物细胞的基因转染”等实验项目。其中尤以“报告基因检测”实验较为复杂，难度较高，该实验涉及报告基因载体质粒构建、细胞报告基因转染、报告基因表达产物鉴定等多个环节［5］。特别是本实验中接触到多种实验技能，如细胞培养的无菌操作技术、细胞传代培养技术、细胞计数、质粒的脂质体转染技术、蛋白浓度测定方法、报告基因的检测技术和生物统计学分析等。然而，由于实验学时和操作时间的限制，学生要参与所有过程是困难的，所以大

    实验室研究与探索 2021年1期2021-02-27

  • 报告基因在超声成像中的应用进展
    ［1-2］。报告基因是一种编码易被检测的蛋白质或酶的基因［3］，作为新兴分子影像探针，将报告基因转入生物体后，通过影像技术检测其表达产物释放的信号，能获得基因表达水平和细胞定位等生物学信息。目前已有光学报告基因应用于研究基因表达的时空性与特异性，但因其表达产物受光散射和组织自发荧光干扰较大，难以获得高分辨率的深层组织图像。超声成像是一种非侵入性的医学影像技术，通过接收、分析、显示反射及散射的超声波信号，获得体内器官的功能和解剖信息［4］。与光子仅能穿透毫米

    临床超声医学杂志 2020年12期2020-12-20

  • 转录因子KLF7对IL-6基因的转录调控分析
    子区荧光素酶报告基因和KLF7表达质粒，KLF7过表达可显著提高人IL-6启动子活性[14]。在成纤维细胞诱导分化为成熟脂肪细胞过程中，高浓度棕榈酸（PA）可促进鼠脂肪细胞KLF7、IL-6表达；过表达KLF7促进成熟脂肪细胞IL-6表达，而干扰KLF7抑制成熟脂肪细胞IL-6表达。以上报道提示，KLF7可能直接调控IL-6基因表达。为验证这一推测，本文开展鼠转录因子KLF7调控IL-6基因的转录调控研究。研究证实KLF7直接调控IL-6基因表达，对了解K

    东北农业大学学报 2020年10期2020-11-16

  • 抑制剂T0070907 对鸡PPARγ基因表达影响的研究
    鼠胰腺细胞的报告基因和功能检测中得到证实[12]，目前已成为研究PPARγ基因功能的主要工具。然而，本实验室在前期针对鸡PPARγ基因的功能研究中偶然发现，T0070907 非但不能抑制鸡PPARγ的活性，反而对该基因的表达具有一定的促进作用。为验证这一现象的真实性，本研究利用荧光定量PCR、western blot 和报告基因技术，分别从mRNA 表达水平、蛋白表达水平及蛋白活性等方面检测了抑制剂T0070907 对DF-1 细胞中鸡PPARγ基因两种亚

    中国预防兽医学报 2020年2期2020-06-01

  • 重组双荧光素酶报告基因质粒psiCHECK-2-Intron构建转染及转染细胞萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶表达
    ，双荧光素酶报告基因检测已成为研究转录因子参与基因调控的有效手段,通过对启动子DNA片段的分析，验证启动子结合元件的反式激活能力,探讨转录因子在信号转导中的分子机制[2]，在分子生物学中常用来研究基因功能、基因与基因间的调节、蛋白与基因的作用以及非编码RNA对基因表达的调控[3]。双荧光素酶报告基因检测中，海肾荧光素酶为报告基因，萤火虫荧光素酶为内参基因，两个荧光素酶基因都有自己的启动子、终止位点，二者独立表达且互不干扰[4]。常见双荧光素酶报告基因载体有

    山东医药 2020年9期2020-05-20

  • MicroRNA-129-5p在卵巢癌中表达的光声成像研究
    一种酪氨酸酶报告基因来监测卵巢癌中miR-129-5p的表达。酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)是负责黑色素生产的主要酶，可以提供很强的光声成像的吸收对比度。我们通过黑色素体内外含量、酪氨酸酶活性、光声信号证明了酪氨酸酶报告基因监测miR-129-5p表达活性的可行性。1 材料与方法1.1 材料酪氨酸酶TYR基因(NM_000372)质粒GV140-TYR购自上海吉凯公司；卵巢癌细胞SKOV3购自中国科学院上海细胞库，并培养在DMEM培养基中，补充有

    中国妇幼健康研究 2019年10期2019-11-02

  • 报告基因法在生物技术药物活性检测中的应用
    100071报告基因法（reporter gene assays，RGA）是通过分子生物学手段，将报告基因整合入待测的生物系统中，继而通过检测报告基因产生的信号，研究特定生物学过程的方法。从广义上讲，利用荧光蛋白观察转染细胞的效率，或者利用抗性基因筛选阳性克隆都属于报告基因法。具体而言，报告基因与目的基因或调控序列相连，通过检测报告基因编码产物的活性，直观反映细胞内基因的转录活性或表达水平[1]。比如将报告基因置于特定启动子调控序列之后，可研究某种条件下启

    生物技术通讯 2019年2期2019-05-07

  • MR示踪技术在干细胞治疗心肌梗死中的研究进展
    踪成像和MR报告基因成像。MR细胞示踪成像的标志物具有特异性高、亲和力强、半衰期长（保证足够时间成像）、标记率高等特点，同时能在合适的磁场强度下改变弛豫率，最小检测单位可达细胞水平[4]。本文综述MR细胞示踪成像技术的研究进展。1 MR标记细胞示踪成像1.1 顺磁性对比剂 MRI对比剂是通过缩短组织纵向弛豫时间或横向弛豫时间，使得T1WI或T2WI上的目标成像区域产生高信号和低信号，从而达到区分目标区域和周围组织的效果。T1阳性对比剂[如钆（Gd3+）和锰

    国际医学放射学杂志 2019年1期2019-03-19

  • 鸡miR-17-92基因簇宿主基因启动子的甲基化及其功能分析
    7HG启动子报告基因载体pGL3-cMⅠR17HG（-4428/-2506）和A/T富集区启动子报告基因载体（PGL3-AT-MⅠR17-92(-440/-1）为本实验室保存的载体。1.2 主要分子生物学软件 Primer Premier 5.0；GraphPad Prism 5；NCBⅠ（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/）；UCSC（http://genome. ucsc.edu/）；JASPAR（http://jaspar.bi

    中国畜牧杂志 2018年11期2018-11-24

  • 基于CRISPR/Cas9技术的人胚胎干细胞多模态示踪系统构建
    构建稳定表达报告基因的细胞株可对移植干细胞的命运进行实时监控，有助于移植策略的优化．多模态成像是指将光学成像与其他成像模式相结合，同时获得多种参数的成像方式，最新的进展是三融合报告基因技术，由生物发光，荧光和PET(Positron Emision Tomograph)报告基因组成[4]．生物发光是生物利用体内的酶将化学能转化为光能而发光的一种现象，常见的酶包括萤火虫荧光素酶(Fluc)和海肾荧光素酶(Renilla Luciferease, Rluc)等

    复旦学报（自然科学版） 2018年5期2018-11-14

  • 镉暴露上调HMOX1表达的启动子相关活化区域鉴定
    g.1.2 报告基因的构建及鉴定具有共同下游3'末端和不同5'末端的启动子序列克隆进报告基因载体PGL6，双酶切初步鉴定后测序鉴定.1.3 实验方法1.3.1 细胞培养、处理和转染：用含10%胎牛血清的DMEM培养基，于 37℃、5%CO2培养箱中 HeLa.用 50μM Cd2+处理细胞：用脂质体共转染报告基因和内参基因.1.3.2 RT-PCR和免疫印迹：提取总RNA并逆转录成cDNA，按下面的循环条件做RT-PCR：94℃预变性2min，94℃变性

    赤峰学院学报·自然科学版 2018年7期2018-08-11

  • c-Myc转录上调长链非编码RNA ZEB1-AS1促进结直肠癌细胞增殖
    c位点缺失的报告基因载体构建。按照说明书操作，并将测序正确的克隆命名为pMD20-del-ZEB1-AS1。使用限制性内切酶XhoⅠ和HindⅢ消化pGL4、pMD20-wt-ZEB1-AS1和pMD20-del-ZEB1-AS1，并用T4 DNA连接酶连接载体和目标片段，阳性克隆命名pGL4-wt-ZEB1-AS1和pGL4-del-ZEB1-AS1。1.6 双荧光素酶报告基因将NCM460细胞以10 000细胞/孔的密度接种96孔板，次日使用Lipof

    分子影像学杂志 2018年3期2018-08-01

  • 人源DNMT1基因启动子荧光素酶报告基因载体的构建及其活性检测
    动子荧光素酶报告基因载体为深入研究其调控机制和生物学意义奠定了基础。1 材料与方法1.1 材料 DMEM 培养基 (HyClone 公司);pGL3-Basic 质粒、质粒小量提取试剂盒 (Promega公司);Polyjet (恩博生物公司);限制性核酸内切酶XhoⅠ和KpnⅠ (NEW ENGLAND BioLabs公司);T4 DNA连接酶 (TaKaRa 公司);细胞基因组DNA提取试剂盒(QIAGEN公司)；E.coli DH5α Compete

    皖南医学院学报 2018年1期2018-03-19

  • 一种新型双荧光素酶报告基因表达载体的构建
    01荧光素酶报告基因系统是检测转录因子与目的基因启动子区DNA相互作用的一种检测方法，具有灵敏度高、特异性好、检测时间短等特点，而且对所测定的活体没有任何毒性[1-2]。pGL4.10为Promega公司构建的荧光素酶报告基因载体，含有萤火虫荧光素酶报告基因(Firefly)，可用作定量分析哺乳动物基因表达的工具[3]。但由于pGL系列载体中只含有Firefly，因此使用中无法排除本底因素的干扰，容易产生检测误差。我们将海肾荧光素酶报告基因(hRLUC)克

    郑州大学学报（医学版） 2018年1期2018-02-05

  • 上海生科院发现植物核孔蛋白在响应ABA信号与盐胁迫中的作用
    9A-LUC报告基因的表达，并部分揭示了其调控逆境响应基因表达的分子机理。RD29A-LUC报告基因在sickle-1（sic-1）突变体的背景下能够在ABA与高盐处理后高度表达，通过EMS诱变后的抑制子筛选，该研究发现NUP85的突变导致RD29A-LUC报告基因在sic-1中的表达受到明显的抑制。与该正向遗传筛选结果吻合的基因表达研究发现，RD29A、COR15A与COR47等逆境响应基因的表达在nup85突变体以及其他核孔蛋白突变体如nup160与h

    蔬菜 2018年1期2018-01-16

  • STAT3荧光素酶报告基因检测系统的构建及其检测STAT3活化能力的研究
    T3荧光素酶报告基因检测系统的构建及其检测STAT3活化能力的研究王 博1,2，张 英3，王林玉1,2，江山娇1,2，蔡永松4，周 艳5，李琰清6，侯卫坤7*(1西安交通大学第一附属医院转化医学中心，西安 710061；2陕西省肿瘤精准医学重点实验室；3西安交通大学第一附属医院消化内科；4西安交通大学第一附属医院骨科；5西安交通大学第一附属医院皮肤科；6西安交通大学第一附属医院检验科；7西安交通大学医学部附属红会医院关节病医院骨坏死与关节重建病区；*通讯作

    山西医科大学学报 2017年11期2017-12-01

  • 基于CV-1细胞雌激素受体报告基因试验方法建立及双酚A类似物雌激素效应的检测
    胞雌激素受体报告基因试验方法建立及双酚A类似物雌激素效应的检测范德玲, 吉贵祥, 杨先海, 汪 贞, 王 蕾, 刘济宁①, 石利利(环境保护部南京环境科学研究所， 江苏 南京 210042)以荧光素酶为报告基因，通过雌激素反应元件调控的带有荧光素酶报告基因质粒pERE-TATA-Luc和雌激素受体表达质粒rERa/pCI，采用瞬时共转染方法，将Luc报告基因质粒和受体表达质粒共转染至非洲猴肾CV-1细胞，以雌二醇作为阳性对照物，其浓度为10-10mol·L

    生态与农村环境学报 2017年10期2017-10-24

  • 用双萤光素酶报告基因技术验证小鼠lncRNA-H19与miR-199a-5p的靶向关系*
    用双萤光素酶报告基因技术验证小鼠lncRNA-H19与miR-199a-5p的靶向关系*侯婧瑛1， 周长青1， 郑韶欣2， 郭天柱1， 龙会宝1， 伍权华1， 钟婷婷1， 吴 浩1， 汪 蕾1， 王 彤1△(中山大学孙逸仙纪念医院1急诊科，2心内科， 广东 广州 510120)目的： 构建长链非编码RNA-H19(lncRNA-H19)萤光素酶报告质粒，利用双萤光素酶报告基因技术验证小鼠lncRNA-H19与微小RNA-199a-5p(miR-199a-5

    中国病理生理杂志 2016年12期2017-01-04

  • 人PD-L1基因启动子克隆及其荧光素酶报告基因载体的构建
    及其荧光素酶报告基因载体的构建丰江舟1，杨梦梦2，朱彬彬3，曹文清2，郑立春4，周兴路4，王 潞1，吴志浩5(1.皖南医学院第一附属医院 弋矶山医院 肿瘤内科，安徽 芜湖 241001；2.皖南医学院 麻醉学院，安徽 芜湖 241002;3.皖南医学院 法医学院，安徽 芜湖 241002；4.皖南医学院 医学影像与检验学院，安徽 芜湖 241002；5.皖南医学院 医学生物学教研室，安徽 芜湖 241002)目的：对人源PD-L1基因启动子进行PCR扩增,

    皖南医学院学报 2016年6期2016-12-19

  • C3启动子克隆及荧光素酶报告基因载体构建
    隆及荧光素酶报告基因载体构建Salman Naseer1，Shahid Khan1，M Imran1，何冰2，林佳2（华北理工大学 1. 国际教育中心，2. 生命科学学院，河北 唐山 063000）为克隆C3基因启动子序列，构建C3基因启动子荧光素酶报告基因载体，运用PCR的方法从血液中提取到的基因组DNA中获得目的基因，双酶切后连接到荧光素酶报告基因载体上，构建C3基因启动子报告基因载体．构建的pGL3-Basic-C3-promotor重组质粒和内参质

    高师理科学刊 2016年11期2016-12-15

  • NF-κB荧光素酶报告基因系统的构建及验证
    κB荧光素酶报告基因系统的构建及验证郭志兰1,2，车路阳3，李晶哲2，孙震晓1，刘长振21 北京中医药大学中药学院，北京 100102;2 中国中医科学院医学实验中心北京市重点实验室，北京 100700;3 中国人民解放军总医院骨科，北京 100853为了定量检测NF-κB的活化效果及筛选与NF-κB活化调控相关的药物，通过去除逆转录病毒载体pQCXIP原有的CMV启动子，并分别插入NF-κB增强子序列及荧光素酶NanoLuc报告基因序列，构建了一种新的含

    生物工程学报 2016年10期2016-11-14

  • 人MUC5AC启动子荧光报告基因的构建与分析
    C启动子荧光报告基因的构建与分析王孝芸，蓝楠，张沄，王星，李国平(西南医科大学附属医院炎症与变态反应实验室，四川 泸州 646000)目的 构建人MUC5AC启动子荧光报告基因并进行分析。方法 PCR技术克隆人MUC5AC启动子[(-1 300)～(+48)bp]长度片段的基因，将纯化的PCR产物与T载体连接，然后将连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，并利用酶切和测序进行重组质粒鉴定；将该重组质粒克隆至pGL3-ehancer荧光报告基因载体上，用脂质

    海南医学 2016年15期2016-03-13

  • 基于报告基因检测的PXR、FXR和LXRα激动剂高通量筛选模型的建立
    006)基于报告基因检测的PXR、FXR和LXRα激动剂高通量筛选模型的建立庄嘉琅，曾行，钟国平，金晶，苟晓丽，毕惠嫦，黄民(中山大学药学院药物代谢与药动学实验室，广东 广州510006)黄民(1963-)，男，博士，教授，博士生导师，研究方向: 临床药理学与药物基因组学，E-mail: huangmin@mail.sysu.edu.cn摘要：目的 建立基于报告基因法的高通量筛选细胞模型，用来发现PXR、FXR和LXRα受体激动剂。方法利用Real-tim

    中国药理学通报 2015年2期2016-01-12

  • TNF-α 3′-UTR双荧光素酶报告基因系统的构建及丹参酮类药物筛选
    R双荧光素酶报告基因系统的构建及丹参酮类药物筛选韦忠红1,2，朱智杰1,2,刘玉萍1,2，刘兆国1,2，盛晓波1,2，汪思亮1,2，陶丽1,2，祝娉婷1,2，陈文星1,2,王爱云1,2，陆茵1,2(1.南京中医药大学药学院,2.江苏省药效与安全性评价重点实验室,江苏 南京210046)中国图书分类号：R284.1；R329.2；R345；R394.2；R394.3；R965.1；R977.3摘要:目的构建并鉴定pGL3-TNF-α 3′端非翻译区(UTR)

    中国药理学通报 2015年1期2016-01-11

  • 视黄酸刺激RARE调控荧光素酶报告基因表达系统的构建与应用
    调控荧光素酶报告基因表达系统的构建与应用袁源 陈亚琼（中国科学院上海生命科学研究院营养科学研究所，上海 200031）类维生素A，通过视黄酸（retinoic acid，RA）代谢旺盛组织的靶基因调控，与生物节律通路相互作用，在代谢性疾病发展过程中发挥着重要作用。在293T及小鼠肝原代细胞中，构建视黄酸反应元件（RARE）调控的荧光素酶报告基因表达系统，为研究类维生素A与节律和代谢研究中靶基因上游调控信号分子提供可能。用定点突变PCR方法在pGL3-Bas

    生物技术通报 2015年6期2015-10-27

  • 启动子陷阱技术在植物启动子克隆研究中的应用
    阱技术是一种报告基因的随机整合技术，现已成为基因功能研究中的重要手段。从启动子陷阱技术的原理、启动子陷阱报告基因的种类、启动子陷阱在植物中的应用及在应用过程中存在的问题等方面进行综述，并针对有关问题进行讨论和展望。关键词 启动子陷阱 ；T-DNA ；报告基因 ；功能研究分类号 Q75Application of Promoter-trap in Promoter Cloning Research of PlantsLI Ji HUANG Tiandai H

    热带农业科学 2015年9期2015-10-14

  • MicroRNA-195与Smad7靶向关系的研究
    区的荧光素酶报告基因载体，利用双荧光素酶报告基因验证MicroRNA195与其潜在靶基因Smad7的靶向关系。方法：PCR扩增出Smad7基因3′-UTR区片段，以此构建含3′-UTR的荧光素酶报告基因载体（wild type，WT）；将miRNA-195与荧光素酶报告重组子共转染至293T细胞中，双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶活性；构建含Smad7基因3′-UTR突变体（mutant，Mut）的荧光素酶报告基因质粒，检测荧光素酶活性变化。结果：测序结

    江苏大学学报（医学版） 2015年4期2015-07-22

  • Smad3调控成釉细胞Amelotin启动子转录活性的研究
    动子荧光素酶报告基因载体，用双荧光素酶报告基因检测系统分析Smad3对Amelotin启动子转录活性的影响;同时在发现新的启动子功能性序列的基础上，进一步研究分析，确定Smad3与Amelotin的关系及其调控机制，以期为今后进一步研究牙体硬组织发育过程中相关基因的调控机制奠定基础。1 材料和方法1.1 主要试剂和仪器Smad3抗体(Santa Cruz Biotechnology，美国);基因组DNA提取试剂盒(北京天根生化科技有限公司);PCR引物合成

    牙体牙髓牙周病学杂志 2015年6期2015-05-18

  • 细胞色素氧化酶3A4启动子报告基因的构建及其活性检测
    3A4启动子报告基因的构建及其活性检测张 帆1，司 文1，高旭东2，冯 帆3，王春平2，杨予涛4，杨永平2，杨俊兰11解放军总医院 肿瘤内科，北京 100853；2解放军第三零二医院 肝脏肿瘤诊疗与研究中心，北京 100039；3沈阳军区总医院 药剂科，辽宁沈阳 110016；4首都医科大学 神经科学研究所，北京 100071目的建立细胞色素氧化酶(cytochrome P-450，CYP)3A4启动子报告基因并在孕烷X受体(pregnane X rece

    解放军医学院学报 2015年2期2015-03-21

  • 孕烷X受体应答元件萤光素酶报告基因的构建及活性检测
    元件萤光素酶报告基因的构建及活性检测冯 帆1，张 帆2，司 文2,3，高旭东4，王春平4，杨予涛5，杨俊兰2，杨永平4，史国兵11沈阳军区总医院 药剂科，辽宁沈阳 110016；2解放军总医院 肿瘤内科，北京 100853；3南开大学医学院，天津 300192；4解放军第302医院 肝脏肿瘤诊疗与研究中心，北京 100039；5首都医科大学神经科学研究所，北京 100071目的建立孕烷X受体(pregnane X receptor，PXR)应答元件萤光素酶

    解放军医学院学报 2015年2期2015-03-21

  • B7-H1启动子荧光素酶报告基因载体的构建及活性检测
    动子荧光素酶报告基因载体的构建及活性检测吴胜昔1，陈永文2，朱广倍1，费 蕾2，吴玉章2*(1.重庆理工大学 药学与生物工程学院， 重庆 400054； 2.第三军医大学 基础部 免疫学教研室，重庆 400017)目的构建含B7-H1启动子的荧光素酶报告基因载体，转染肝癌HepG2细胞进行活性检测。方法PCR扩增B7-H1启动子上游区域基因片段，并插入到含有荧光素酶报告基因的载体PGL3-Basic中构建重组子，经双酶切和测序鉴定后，将重组子转染HepG2

    基础医学与临床 2014年7期2014-11-27

  • 活体示踪干细胞治疗心肌梗死的分子影像技术进展
    性核素成像、报告基因成像、光学成像以及高效有机整合几种成像技术为一体的多模态成像。1.MRIMRI是通过使用顺磁性对比剂来评价心脏结构和功能的最好技术[3]。MRI具有良好的空间 [10～100 μm(小动物磁共振)，500～1 500 μm(临床)]和时间分辨率，可示踪标记超顺磁和顺磁性对比剂的干细胞[3]。磁共振光谱成像(如19F MRI)亦可示踪移植心肌的干细胞[4]。1.1超顺磁性氧化铁纳米颗粒Arbab等[6]报道SPIO不影响细胞的活力、增殖、

    新医学 2014年5期2014-08-22

  • 受体报告基因实验及其在维甲酸和维甲酸X受体干扰物监测中的应用
    1021受体报告基因实验及其在维甲酸和维甲酸X受体干扰物监测中的应用钟恩惠，王艺磊，王淑红*集美大学水产学院，厦门 361021受体报告基因实验具有快速、经济、灵敏、方便等诸多优势，在高通量筛选类或抗雌雄激素等通过核受体起作用的环境内分泌干扰物方面得到了广泛的应用。环境中的维甲酸和维甲酸X受体干扰物如有机锡等有着类似的作用机制，研究者也开始采用受体报告基因实验的方法对该类污染物进行筛选与监测。本文综述了受体报告基因实验的技术方法，包括报告基因和宿主细胞的选

    生态毒理学报 2014年2期2014-04-08

  • 雌激素样化合物对人细胞色素氧化酶2A6基因的转录调控
    CYP2A6报告基因高容量筛选系统，分析环境和天然雌激素样化合物对CYP2A6基因转录的影响。方法构建3种CYP2A6基因转录上游－2460～＋1全长、增强子-启动子串联和3倍增强子-启动子串联的荧光素酶报告基因重组体pGL3-2A6 3UP，GL3-2A6 EP和pGL3-2A6 3EP，分别与雌激素受体α（ERα）及海肾荧光蛋白表达载体三重共转染人肝HepG2细胞。用双荧光素酶报告基因分析技术，选择确认对雌二醇诱导应答最强的CYP2A6报告基因系统；分

    中国药理学与毒理学杂志 2014年1期2014-03-23

  • MRI报告基因成像在心脏细胞示踪中的应用进展
    006MRI报告基因成像在心脏细胞示踪中的应用进展周鑫斌武丽浙江中医药大学第一临床医学院，浙江 杭州 310006近年来基于细胞替代的心脏修复和再生治疗有了长足发展，但目前缺乏连续的非侵入性有效成像手段来评估移植干细胞的存活及预后。核磁共振(MRI)报告基因成像技术的出现使得在体评估心肌梗死后所移植细胞的存活、增殖、迁移及分化情况成为可能。现就MRI报告基因细胞示踪成像的机制、心脏中应用现状及前景做一综述。核磁共振；报告基因；心脏再生；细胞示踪；文献综述近

    中国民族民间医药 2014年11期2014-01-25

  • 鸡肝脏胆汁酸结合蛋白基因启动子活性分析
    BABP基因报告基因系列缺失载体。报告基因结果表明，鸡L-BABP基因启动子-1 096/-66区域具有最强的启动子活性，-545/-62区域启动子活性最弱；C/ EBPα可以显著抑制鸡L-BABP基因的表达，可为深入研究鸡L-BABP的表达调控机制奠定基础。鸡；肝脏胆汁酸结合蛋白；启动子；活性分析脂肪酸结合蛋白家族（Fatty acid binding pro⁃teins,FABPs）对细胞内脂肪酸的运输起重要作用[1-3]，通过与脂肪酸结合增加脂肪酸可

    东北农业大学学报 2014年4期2014-01-14

  • Chelex法结合环介导间接聚合酶链式反应检测肉制品单增李斯特菌
    将探针标记于报告基因(大豆Lectin基因)的两端，此标记的报告基因与待测靶基因经杂交、缺口补平、环化后，采用反向聚合酶链式反应扩增报告基因，实现对靶基因的检测。结果：该检测体系检出限低于100CFU/g(mL)，且与其他食源性致病菌的检测无明显交叉反应，对200份肉制品进行检测，阳性率为2.5%，与传统细菌分离检测结果完全相符。结论：环介导间接聚合酶链式反应可以快速、灵敏、特异检测肉制品中单增李斯特菌污染。环介导间接聚合酶链式反应；肉制品；单增李斯特菌单

    食品科学 2012年10期2012-10-25

  • hTERT启动子引导hNIS基因重组腺病毒介导放射性核素的裸鼠显像
    00052）报告基因指其表达产物非常容易被检测的基因。报告基因显像则是通过将报告基因转染给靶细胞后，通过检测报告基因从而显影的一种方法。现有的报告基因如荧光素酶、转铁蛋白、钠碘转运体（NIS）等，可以通过光学成像，核素显像，MRI等方法进行检测[1-2]。其中，NIS基因因为可将细胞外的碘转运进入细胞内，所以可以方便地进行放射性核素显像。在既往研究中已证明使用脂质体可在体外将NIS基因转入大细胞肺癌细胞内，用筛选后的肿瘤细胞构建荷瘤裸鼠模型，进行放射性核素

    天津医科大学学报 2012年4期2012-10-20

  • 红色荧光蛋白和荧光素酶双报告基因转基因小鼠的建立
    和荧光素酶双报告基因转基因小鼠的建立张余琴 林晓琳 贾俊双 谢饶英 樊全荣 赵尊兰杨升 高飞 姚开泰 肖东△南方医科大学肿瘤研究所，△比较医学研究所暨实验动物中心，广东 广州 510515背景与目的：活体动物体内光学成像(opticalin vivoimaging)主要采用生物发光与荧光两种技术。生物发光是用荧光素酶(luciferase，Luc)基因标记细胞或DNA，而荧光技术则采用荧光报告基团(GFP、RFP、Cyt及dyes等)进行标记，利用一套非常

    中国癌症杂志 2012年5期2012-05-28

  • 利用合适的启动子提高外源基因在Jurkat细胞中的表达
    用荧光素酶双报告基因系统检测 SV40、CMV 启动子与 EF1α、UbC启动子在 Jurkat 细胞中的相对活性，通过高活性启动子来实现外源基因在 Jurkat 细胞中的高效表达，以利于 Jurkat 细胞系在哺乳动物 T 淋巴细胞以及免疫相关功能研究中的应用。1 材料与方法1.1 材料1.1.1细胞及质粒 人 T 淋巴细胞白血病细胞株 Jurkat（Clone E6-1）来自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库/中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心

    中国医药生物技术 2012年4期2012-04-13

  • 人心肌肌球蛋白轻链基因启动子驱动的GFP和Luc报告基因在人心肌细胞系中的表达*
    细胞的特异性报告基因，本研究拟构建的心肌肌球蛋白轻链2v启动子驱动的绿色荧光蛋白(green fluorescent protein，GFP)和萤光素酶(luciferase，Luc)报告基因慢病毒载体［3-6］，转染人心肌细胞系(human cardiomyocyte cell line，HCM)和人肺癌细胞系A549，观察2种细胞中报告基因的整合表达特征，以及pMLC2v-GFP和pMLC2v-Luc是否具有心肌细胞特异性，为利用多个报告基因同步示踪实

    中国病理生理杂志 2012年9期2012-01-30

  • 山酮类化合物抑制人脑胶质瘤细胞增殖活性及作用机制探讨
    ;质粒p53报告基因(pG53-Luc)、Bax报告基因(pGBax-Luc)和内参照基因(SV-40-Rluc)由日本千叶大学医学部第一生物化学研究室提供。Fig 1 Chemical structures of 1'-hydroxy Austocystin D，Austocystin D and Austocystin H1.2细胞系人原发性脑肿瘤细胞(T-98和U251SP)和继发性脑肿瘤细胞(KT)由日本千叶大学医学部第二生物化学研究室提供。各细胞

    中国药理学通报 2011年9期2011-05-29

  • 大豆苷元对HEC-1B细胞增殖及雌激素受体报告基因表达的影响
    及雌激素受体报告基因表达的影响刘小丽1，薛晓鸥1*，唐炳华2，牛建昭2（1.北京中医药大学东直门医院，北京 100700；2.北京中医药大学基础医学院科研中心，北京 100029）目的 探讨大豆苷元对子宫内膜癌细胞增殖的影响及其对雌激素受体报告基因表达的影响。方法 体外培养子宫内膜癌细胞子宫内膜癌雌、孕激素受体阴性细胞系（HEC-1B），采用四甲基偶氮唑盐法（MTT）检测不同浓度大豆苷元对子宫内膜癌细胞增殖的影响，同时检测大豆苷元对雌激素应答原件（ERE）

    湖南中医药大学学报 2011年1期2011-01-29

  • 人白介素-15基因系列启动子克隆及其荧光素酶报告基因载体的构建
    及其荧光素酶报告基因载体的构建陶千山,罗 欣,柴 瑜,胡道军,张胜权(安徽医科大学 生物化学与分子生物学教研室,安徽 合肥 230032)目的 克隆人白介素-15(IL-15)基因系列启动子,构建 IL-15基因启动子荧光素酶报告基因载体。方法通过 PCR方法从 HaCaT细胞基因组DNA中获得 IL-15基因编码序列 5′上游七段逐步缺失的 IL-15启动子序列;双酶切后,分别重组到含萤火虫荧光素酶的报告基因 p GL3-Basic载体上,构建 IL-1

    中国生化药物杂志 2011年3期2011-01-06

  • 基因捕获技术及其在水稻突变体库构建上的应用
    词基因捕获；报告基因；水稻突变体库中图分类号 Q343.1+3 文献标识码A文章编号 1007-5739（2009）02-0125-02水稻是世界上最重要的三大经济作物之一，同时也是生命科学研究的模式植物，水稻基因组的全序列得到破译之后，分离和研究水稻中的基因功能成为一项迫切而重要的任务。基因捕获是一种将带有报告基因的重组载体随机整合到基因组中，使插入基因被激活或失活，然后通过检测报告基因的表达和利用一些基于PCR的分子生物学技术来分离被插入基因的研究基因

    现代农业科技 2009年2期2009-03-16

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