香叶木素对APAP诱导的肝损伤作用及机制研究

摘 要 为了探究香叶木素（diosmetin）对对乙酰氨基酚（APAP）诱导的肝损伤作用及机制，将48只昆明小鼠随机分为6组，分别为空白组（NC）、APAP肝损伤模型组（DILI）、香叶木素低、中、高剂量治疗组（XL+DILI、XM+DILI、XH+DILI）、香叶木素高剂量对照组（XHD），每组8只。NC组和XHD组小鼠腹腔注射生理盐水，其余小鼠腹腔注射等体量的APAP注射液（300 mg/kg），每日2 次，连续注射4 d。第5天开始NC组和DILI组小鼠灌胃生理盐水，XL+DILI组、XM+DILI组、XH+DILI组和XHD组小鼠分别按照25"" mg/kg、50 mg/kg、100 mg/kg、100 mg/kg等体量灌胃香叶木素药液，每日2次，连续3 d。最后一次给药12 h后，检测各组小鼠血清中谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）活性，以及肝组织中谷胱甘肽（GSH）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢（H2O2）和丙二醛（MDA）的水平，肝组织切片HE染色观察肝损伤情况，qPCR检测细胞色素P450酶2E1（CYP2E1） mRNA表达水平，Western blot检测CYP2E1、热休克蛋白60（HSP60）和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase 3）在蛋白水平的表达。结果表明：香叶木素可降低ALT和AST活性，提高GSH和SOD水平，显著降低H2O2和MDA水平。香叶木素可显著降低DILI小鼠肝组织中CYP2E1" mRNA和蛋白表达水平，对肝脏组织中HSP60和Caspase 3蛋白的表达具有良好的抑制作用。综上所述，香叶木素具有抗APAP诱导的小鼠肝损伤的作用，其机制可能与改善氧化应激、抑制CYP2E1表达、减缓线粒体应激和细胞凋亡有关。

关键词 香叶木素；药物性肝损伤；氧化应激；CYP2E1；线粒体应激；细胞凋亡

药物性肝损伤（drug-induced liver injury， DILI）是指机体对药物或其代谢产物的特异性反应所导致的肝损伤［1］。近年来，药物性肝损伤的发生率逐年增高，其发病机制复杂，单一药物或者药物联合使用均可以诱发DILI［2］。根据发病机制，将DILI分为固有型DILI（intrinsic DILI）、特异型DILI（idiosyncratic DILI）及间接型DILI （indirect DILI）［3］。

对乙酰氨基酚（acetaminophen， APAP）又名扑热息痛，在临床上主要用于解热镇痛、抗炎等，也是引起DILI的常见原因，是固有肝毒性药物的典型代表［4］。安全剂量下，APAP在肝脏中主要通过Ⅱ相代谢途径代谢，85%～90%的APAP在葡萄糖醛酸基转移酶（glucuronic transferase， UGTs）和磺基转移酶（sulfonate transferase， SULTs）的催化作用下与葡萄糖醛酸和硫酸物结合，生成无毒的代谢产物［5］。但APAP剂量过大时，超出治疗剂量的APAP主要经细胞色素P450（cytochrome P450， CYP450）氧化酶系统中的" CYP2E1代谢成N-乙酰基-对苯醌亚胺（N-acetyl-p-benzoquinone imine， NAPQI）［6］，NAPQI聚集会导致还原型谷胱甘肽（glutathione， GSH）的严重耗竭，过量的NAPQI与其他蛋白质、不饱和脂质发生反应，并产生氧化应激、脂质过氧化等，最终导致肝细胞死亡而造成肝损伤［7-8］。

线粒体是真核生物进行氧化代谢产生能量的细胞器，对氧化损伤极为敏感，缺氧、细胞渗透压改变、各种毒物以及射线等均会引起线粒体肿胀［9］。同时，线粒体也是NAPQI的主要靶标，参与APAP引起的代谢损伤和炎症损伤［10］，过量的NAPQI与线粒体膜蛋白结合形成复合物，从而改变线粒体膜结构，致使线粒体膜通透性增加，膜电位被破坏［11］，并且 NAPQI消耗细胞内大量的GSH会造成肝脏内的氧化还原平衡状态被打破，从而使线粒体中活性氧（reactive oxygen species， ROS）水平升高，导致线粒体膜脂质过氧化，膜流动性降低，引发线粒体应激反应［12］。

香叶木素（diosmetin）是一种天然黄酮类化合物，主要来源于蓬子菜、菊花、柠檬、柑橘类等多种植物［13］，具有抗菌、抗炎、抗肿瘤及雌激素样作用，其作用机制涉及清除自由基、诱导细胞凋亡以及抑制细胞内信号传递等［14］。有研究表明，香叶木素能保护组织免受氧化应激损伤，具有抗氧化、减轻APAP引起的急性肝损伤等作用［15］。

目前关于香叶木素对APAP诱导的肝损伤作用的研究较少，且机制尚不明确。本研究旨在从线粒体应激的角度出发，探究香叶木素对APAP诱导肝损伤的作用及其机制，寻找其作用的靶点，为进一步研发治疗APAP诱导的肝损伤的新型药物提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验动物

洁净级昆明小鼠，体质量为（25±5） g，雌雄各半，购自中国农业科学院兰州兽医研究所，动物饲养于甘肃农业大学动物医学院实验室，自由进食饮水。动物试验经甘肃农业大学伦理委员会" 批准。

1.2 主要试剂

香叶木素（货号：S31450）购自上海源叶生物科技有限公司；谷草转氨酶（AST/GOT）测定试剂盒（货号：C010-1-1）、谷丙转氨酶（ALT/GPT）测定试剂盒（货号：C009-1-1）、微量丙二醛（MDA）测定试剂盒（货号：A003-2）、谷胱甘肽（GSH）测定试剂盒（货号：A006-1-1）、过氧化氢（H2O2）测定试剂盒（货号：A064-1-1）和总超氧化物歧化酶（T-SOD）测定试剂盒（货号：A001-1）等均购于南京建成生物工程研究所；高效RIPA组织/细胞裂解液（货号：R0010）、PBS磷酸盐缓冲液干粉（货号：P1010）、苯甲基磺酰氟PMSF（货号：P8340）、5×蛋白上样缓冲液（含DTT）（货号：P1040）、BCA蛋白浓度测定试剂盒（货号：PC0020）和ECL超敏发光液（货号：PE0010）均购于北京索莱宝科技有限公司；Tween-20（货号：gfdbz057）购自天津光复试剂有限公司；HiScript Q RT SuperMix for qPCR （+gDNA wiper）试剂盒（货号R123-01）和高灵敏性染料法定量PCR检测试剂盒ChamQ SYBR qPCR Master Mix（货号Q311-02/03）购于南京诺唯赞生物技术有限公司；TransZol UP强效型RNA提取试剂盒（货号：ET111-01）购自北京全式金生物技术有限公司；

细胞色素P450 2E1（CYP2E1）抗体（货号：bs-1725R）、热休克蛋白-60（HSP60）抗体（货号：bs-0191R）、活化半胱胺酸蛋白酶蛋白-3（Caspase-3）抗体（货号：bsm-33199M）、β-肌动蛋白（β-Actin）抗体（货号：bs-10966R）、3-磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）抗体（货号：bs-0755R）、辣根过氧化物酶标记羊抗兔IgG （货号：bs-80295G-HRP）及辣根过氧化物酶标记羊抗小鼠IgG （货号：bs-40296G-HRP）均购于北京博奥森公司。

1.3 仪 器

SpectraMax i3x多功能酶标测定仪（美国Molecular Devices公司），Amersham Imager600全自动化学发光成像系统（美国GE公司），Light Cycler96荧光定量PCR仪（瑞士罗氏集团），蛋白电泳仪及转膜装置（美国Bio-Rad公司），冷冻型高通量组织研磨器（宁波新芝），Leica ASP300S自动组织脱水机、HistoCore Arcadia H石蜡包埋机和HistoCore MULTICUT轮转式切片机均购自德国莱卡公司。

1.4 方 法

1.4.1 动物分组及处理 取香叶木素粉末溶于0.9%的生理盐水中，分别配制成25 mg/kg、50 mg/kg和100 mg/kg的药液，4 ℃保存，备用。将48只试验小鼠适应性饲喂1周后，随机分为6组：空白组（NC组）、APAP肝损伤模型组（DILI组）、香叶木素低剂量治疗组（XL+DILI组， 25 mg/kg）、香叶木素中剂量治疗组（XM+DILI组， 50 mg/kg）、香叶木素高剂量治疗组（XH+DILI组， 100 mg/kg）、香叶木素高剂量对照组（XHD组， 100 mg/kg），每组8只。试验时NC组和XHD组小鼠腹腔注射生理盐水，其余各组小鼠均腹腔注射等体积的APAP注射液（300 mg/kg），每日两次，连续注射4 d。第5天开始NC组和DILI组小鼠灌胃生理盐水，XL+DILI组、XM+DILI组、XH+DILI组和XHD组小鼠分别按照25 mg/kg、50 mg/kg、100 mg/kg、100 mg/kg等体量灌胃香叶木素药液，每日2次，连续3 d，最后一次给药后禁食12 h，不限制饮水，称体质量，小鼠眼眶静脉丛采血，血液于室温静置30 min后，" 4 ℃、3 000 r/min离心10 min分离血清，分装。同时摘除小鼠肝脏，清洗干净后一侧肝脏组织于4%多聚甲醛溶液中固定，其余组织保存于"" -80 ℃冰箱，备用。

1.4.2 肝功能指标检测 按照试剂盒说明书测定小鼠血清中ALT、AST的活性。

1.4.3 HE染色检测肝组织病变 将肝脏组织固定14 d后，用滤纸吸去多余的多聚甲醛，并修整为1 cm3大小的组织块，标记后流水冲洗24 h，使用全自动脱水透明仪进行梯度脱水及透明，然后将组织取出进行包埋以及切片，厚度为5 μm。切片放置在烘片机上37 ℃烘烤6～8 h，之后取出置于染色架上，依次放入二甲苯、苯酒精、100%酒精、95%酒精、80%酒精、70%酒精及蒸馏水中，苏木精染色，然后用自来水流水冲洗15 min，盐酸乙醇分化2～3 s，流动自来水冲洗反蓝30 min后进行伊红染色。

染色完成后对切片进行脱水透明，中性树胶封片，放置在37 ℃烘箱中烘干，然后置于光学显微镜下观察各组小鼠肝脏组织的病理形态学" 特征。

1.4.4 氧化应激指标检测 取适量肝脏样品制成10%肝组织匀浆，4 ℃、2 500 r/min离心10 min取上清液，按照试剂盒说明书测定SOD活性、GSH、MDA和H2O2含量。

1.4.5 qPCR法检测肝脏组织相关基因表达 使用Trizol试剂提取各组小鼠肝脏组织总RNA，然后按照逆转录试剂盒说明反转录成cDNA，建立20 μL的PCR反应体系，以GAPDH为内参，进行40次扩增。反应温度设定为预变性95 ℃ 600 s，95 ℃ 10 s，60 ℃退火30 s。采用2-△△Ct法计算目标基因的表达。引物信息见表1。

1.4.6 Western blot检测肝脏组织相关蛋白表达 用RIPA裂解液提取肝脏组织蛋白，BCA 法测定各组蛋白的浓度，并将所有蛋白标定为同一浓度。然后配制分离胶和浓缩胶，对处理好的蛋白样品进行SDS-PAGE，设置为120 V电泳90 min，然后将蛋白转印到PVDF膜上，将PVDF膜在5%脱脂奶粉溶液中封闭2 h。将多余的脱脂奶粉溶液从PVDF膜上洗掉后，用一抗及相应的二抗孵育。PVDF膜孵育二抗后，置于摇床上PBST清洗2 h，之后在PVDF膜表面滴加 ECL发光液，使用化学发光仪显影成像，并用Image J软件对条带的灰度值进行分析。

试验中所有抗体均用PBST稀释。

1.4.7 统计学方法 所有试验数据以“平均数±标准差”的形式表示，应用统计学软件SPSS 26.0进行单因素方差分析（One-way ANOVA），Plt;0.05表示差异有统计学意义。

2 结果与分析

2.1 香叶木素对小鼠血清ALT、AST活性的影响

由图1-A可知，与NC组相比，DILI、XL+DILI、XM+DILI及XH+DILI组小鼠血清中ALT活性均显著升高（Plt;0.05），而XHD组小鼠血清ALT活性无显著差异（Pgt;0.05）。相较于DILI 组，XM+DILI、XH+DILI和XHD组小鼠血清ALT活性均显著降低（Plt;0.05），而" XL+DILI组小鼠血清ALT活性无显著差异" （Pgt;0.05）。

由图1-B可知，与NC组相比，DILI、XL+DILI、XM+DILI及XHD组小鼠血清中AST活性均显著升高（Plt;0.05），而XH+DILI组小鼠血清AST活性无显著差异（Pgt;0.05）。与DILI 组相比，XL+DILI、XM+DILI、XH+DILI和XHD组小鼠血清中AST活性均显著降低（Plt;0.05）。

综上所述，XM+DILI和XH+DILI组小鼠血清中ALT和AST活性较之DILI 组均显著降低（Plt;0.05），说明香叶木素能够显著降低DILI小鼠血清中的ALT和AST活性，且在高剂量时效果最好。

2.2 香叶木素对小鼠肝组织病理变化的影响

如图2可见，NC组（图2-A）与XHD组（图2-F）小鼠肝小叶结构完整，肝细胞中央静脉周围呈放射状排列，肝窦清晰，肝索、肝细胞排列整齐，细胞核染色均匀，大小正常，无变性、坏死等病理变化。DILI组（图2-B）小鼠肝细胞大量坏死，肝索萎缩，可见细胞核碎裂、溶解、消失。XL+DILI组（图2-C）小鼠肝细胞坏死、变性，肝索萎缩。XM+DILI组（图2-D）小鼠肝细胞轻度变形，排列不整齐。XH+DILI组（图2-E）小鼠个别肝细胞坏死，肝索整齐，无明显病变。该结果表明，香叶木素能够改善APAP导致的肝组织损伤。

2.3 香叶木素对小鼠肝组织氧化应激水平的" 影响

由图3-A、3-B可知，与NC组相比，DILI、" XL+DILI和XM+DILI组小鼠肝脏GSH含量和SOD活性均显著降低（Plt;0.05）， XH+DILI组小鼠肝脏GSH含量无显著差异（Pgt;0.05），而SOD活性显著降低（Plt;0.05），XHD组小鼠肝脏GSH含量和SOD活性均无显著差异（Pgt;" 0.05）。相较于DILI 组，XH+DILI和XHD组小鼠肝脏GSH含量和SOD活性均显著升高" （Plt;0.05），XL+DILI和XM+DILI组小鼠肝脏GSH含量和SOD活性均无显著差异" （Pgt;0.05）。该结果表明，高剂量香叶木素可以显著提高DILI组小鼠肝脏GSH含量和SOD活性。

由图3-C、3-D可知，与NC组相比，DILI和XL+DILI组小鼠肝组织中MDA含量与H2O2含量均显著升高（Plt;0.05）；XM+DILI、XH+DILI和XHD组小鼠肝组织中MDA含量显著升高（Plt;0.05），而H2O2含量无显著差异（Pgt;" 0.05）。相较于DILI 组，XL+DILI、 XM+DILI、XH+DILI及XHD组小鼠肝组织MDA含量和H2O2含量均显著降低（Plt;0.05）。该结果表明，香叶木素可以显著降低DILI组小鼠肝组织中MDA含量和H2O2含量。

2.4 香叶木素对小鼠肝组织" CYP2E1基因和蛋白表达的影响

由图4-A可知，与NC组相比，DILI、XL+DILI、XM+DILI及XH+DILI组小鼠肝组织中" CYP2E1基因表达水平显著升高（Plt;0.05），而XHD组小鼠" CYP2E1基因表达水平无显著差异（Pgt;0.05）。相较于DILI 组，XL+DILI、XM+DILI、XH+DILI和XHD组小鼠肝脏中" CYP2E1基因表达水平均显著降低（Plt;0.05）。结果表明，香叶木素可以显著降低DILI组小鼠肝组织中" CYP2E1基因的表达水平。

由图4-B可知，与NC组相比，DILI组小鼠肝组织中CYP2E1蛋白表达水平显著升高（Plt;0.05），说明APAP可促进CYP2E1蛋白的表达；相较于DILI 组，XL+DILI、XM+DILI和XH+DILI组小鼠肝脏中CYP2E1蛋白表达水平显著降低（Plt;0.05），表明香叶木素可以抑制DILI组小鼠肝组织中CYP2E1蛋白的表达。

2.5 香叶木素对小鼠肝组织HSP60和Caspase 3蛋白表达的影响

由图5-A可知，与NC组相比，DILI、XL+DILI和XM+DILI组小鼠肝组织中HSP60蛋白表达水平显著升高（Plt;0.05），而XH+DILI和XHD组小鼠HSP60蛋白表达水平无显著差异（Pgt;0.05）。相较于DILI 组，XL+DILI、XM+DILI、XH+DILI和XHD组小鼠肝脏中HSP60蛋白表达水平均显著降低（Plt;0.05）。结果表明，香叶木素可以显著降低DILI组小鼠肝组织中HSP60蛋白的表达水平。

由图5-B可知，与NC组相比，DILI组小鼠肝组织中Caspase 3蛋白表达水平显著升高（Plt;0.05）。相较于DILI 组，XL+DILI、XM+DILI和XH+DILI组小鼠肝脏中Caspase 3蛋白表达水平显著降低（Plt;" 0.05）。该结果表明，香叶木素对DILI组小鼠肝组织中Caspase 3蛋白的表达具有良好的抑制" 作用。

3 讨 论

APAP是临床上广泛使用的解热镇痛药，其肝毒性问题愈加突出，已成为引起急性药物性肝损伤甚至肝衰竭的最常见药物之一［16］。本研究采用APAP诱导建立小鼠DILI模型，观察香叶木素对DILI的作用。谷丙转氨酶（alanine transaminase， ALT）和谷草转氨酶（aspartate transferase， AST）是判断肝损伤的重要指标［17］。ALT主要分布于肝细胞浆的可溶性部分，是非常灵敏的肝损伤指标，可以反映肝细胞的完整性，ALT活性增高往往说明肝实质细胞受到损伤［18］。AST主要分布于肝细胞浆的可溶性部分及线粒体中，当肝细胞发生了严重损伤甚至发生病变时，线粒体受损，AST将大量进入血液［19］。研究结果显示，DILI模型构建成功，中剂量和高剂量的香叶木素能够显著降低APAP诱导的DILI小鼠体内的ALT和AST活性。此外，APAP肝毒性可引起肝脏小叶中心性坏死、肝淤血以及散在的淋巴细胞和中性粒细胞浸润等［20］。HE染色结果显示，DILI组小鼠肝细胞大量坏死，肝索萎缩，可见细胞核碎裂、溶解，而香叶木素各剂量治疗组小鼠肝脏损伤出现一定好转。结合ALT和AST结果与组织病理观察结果，表明香叶木素对APAP导致的药物性肝损伤具有治疗作用。

APAP诱导的肝损伤发病机制十分复杂，其中氧化应激是非常关键的步骤［21-22］。正常情况下，生物体内的氧化系统与抗氧化系统处于动态平衡状态，但是各种因素导致体内的ROS水平与抗氧化剂平衡紊乱，即产生氧化应激［23］。总超氧化物歧化酶（superoxide dismutase， SOD）是机体内重要的抗氧化酶，具有清除自由基，减轻自由基对机体组织损伤的能力［24］。GSH是生物体内绝大多数细胞中巯基的主要来源，是机体抗自由基的主要成分，肝细胞中的GSH可达机体总GSH的95%以上，在维持机体氧化还原平衡中发挥着十分重要的作用［25-26］。丙二醛（malondialdehyde， MDA）是生物体内自由基攻击生物膜中多不饱和脂肪酸，引发脂质过氧化从而形成的产物，可以间接反映细胞氧化应激水平，常用来评价机体的脂质过氧化和氧化损伤程度，体内MDA含量越高说明机体氧化损伤越严重［27］。过氧化氢（hydrogen peroxide， H2O2）是一种相对稳定的重要ROS分子，常用于研究细胞氧化损伤［28］。本研究结果显示，香叶木素可以提高APAP所致DILI小鼠肝脏组织GSH含量和SOD活性，显著降低MDA含量和H2O2含量，表明其可以改善氧化应激，从而缓解APAP诱导的药物性肝损伤，发挥护肝作用。

在治疗剂量下，APAP是安全的，但APAP 使用过量时会导致Ⅱ相代谢途径中的代谢酶饱和，剩余的APAP会通过CYP450酶系统生成NAPQI，过量的NAPQI会消耗细胞内大量的GSH，导致细胞中线粒体蛋白巯基团的共价结合［29］，最终致使线粒体应激和功能障碍，引起肝细胞的凋亡与坏死［30］。NAPQI还会扰乱线粒体电子传递链（electron transfer chain， ETC），导致电子从电子传递链中泄漏，从而形成超氧自由基，破坏细胞内的氧化还原平衡［31-32］。CYP2E1作为CYP450酶系中主要的一种，大部分分布于肝脏组织，是参与氧化应激和脂质过氧化的关键酶，同时也在细胞凋亡、炎性因子形成以及星状细胞活化等过程中发挥一定作用［33］。有研究表明，抑制CYP2E1活性可减轻APAP诱导的肝损伤［34-35］。热休克蛋白60 （heat shock protein 60， HSP60）主要存在于线粒体中，能帮助线粒体蛋白正确折叠，维持线粒体蛋白稳定，对于维持线粒体完整性和呼吸链稳态十分重要［36］。此外，有少部分HSP60分布于细胞质中，与多种蛋白相互作用，具有调节细胞存活和代谢的功能［37］。研究发现，肝细胞凋亡是引发急性肝损伤的重要机制之一［38］。半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase 3）处于Caspase家族中多种凋亡途径的下游，是细胞凋亡执行的标志性分子，在细胞凋亡过程中起重要作用，当细胞凋亡启动时它会被活化，可进一步促进凋亡进程［39-40］。本研究结果显示，香叶木素可以显著降低DILI小鼠肝组织中CYP2E1 mRNA和蛋白的表达水平，对DILI小鼠肝脏中HSP60和Caspase 3蛋白的表达具有良好的抑制作用，表明香叶木素可能通过抑制CYP2E1的表达、缓解线粒体应激和细胞凋亡，减轻APAP导致的肝损伤。

综上所述，香叶木素具有缓解APAP诱导的小鼠肝损伤的作用，其机制可能与改善氧化应激、抑制CYP2E1的表达、减缓线粒体应激和细胞凋亡有关。

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Effect and Mechanism of Diosmetin on APAP-Induced Liver Injury

YAO Yale， PAN Yangyang， ZHANG Zhijie， CHEN Guowen， WANG Zhongyi，

FAN Biyue， AN Zhixia， MA Xiaoyan and WANG Meng

（College of Veterinary Medicine， Gansu Agricultural University， Lanzhou 730070，China）

Abstract In order to investigate the effect and mechanism of diosmetin on acetaminophen（APAP）-induced liver injury， forty-eight Kunming mice were randomly divided into six groups with eight mice in each group.The groups included normal control group （NC）， APAP liver injury model group （DILI）， diosmetin low， medium and high dose treatment groups （XL+DILI， XM+DILI， XH+DILI）， diosmetin high dose control group （XHD）.The mice in the NC group and XHD group were injected intraperitoneally with saline， while the rest of the mice were injected intraperitoneally with equal"" amount of APAP injection （300 mg/kg） twice a day for 4 days.On the fifth day， mice in the NC group and DILI group were gavaged with saline， while mice in the XL+DILI， XM+DILI， XH+DILI and XHD groups were gavaged with diosmetin at levels of 25 mg/kg， 50 mg/kg， 100 mg/kg and 100"" mg/kg twice a day for 3 days.Twelve hours after the last gavage， the serum alanine transaminase （ALT）， aspartate transferase （AST） activities and the levels of glutathione （GSH）， superoxide dismutase （SOD）， hydrogen peroxide （H2O2） and malondialdehyde （MDA） in liver tissues of the mice were measured， and liver sections were stained with hematoxylin-eosin to observe liver injury.The expression of cytochrome P450 enzyme 2E1 （CYP2E1） at the mRNA level was detected by qPCR， and the expression of" CYP2E1， heat shock protein 60 （HSP60） and cysteine aspartate protease 3 （Caspase 3） at the protein level was detected by Western blot.The results showed that diosmetin reduced ALT and AST activity， increased GSH and SOD levels， significantly reduced H2O2 and MDA levels.Gene and protein expression of" CYP2E1" in liver tissues of DILI mice were significantly reduced， and the expression of HSP60 and Caspase 3 proteins in liver were well inhibited.In summary， diosmetin can protect the liver from APAP induced injury in mice， and the mechanism may be related to the improvement of oxidative stress， inhibition of" CYP2E1 expression， moderation of the mitochondrial stress and apoptosis.

Key words Diosmetin; Drug-induced liver injury; Oxidative stress; CYP2E1; Mitochondrial stress; Apoptosis

Received "2022-11-15 """Returned 2023-02-08

Foundation item The National Natural Science Foundation of China （No.32160850）; Natural Science Foundation of Gansu Province （No.22JR5RA868）; Youth Mentor Support Fund of Gansu Agricultural University （No.GAU-QDFC-2021-05）.

First author YAO Yale， male， master student.Research area： veterinary pharmacology and toxicology.E-mail： 2931669157@qq.com

Corresponding"" author WANG Meng， female， Ph.D，master supervisor.Research area： veterinary pharmacology and" development of the new veterinary drug.E-mail： wangmeng@gsau.edu.cn

（责任编辑：顾玉兰 Responsible editor：GU Yulan）