外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞、B细胞及IL-6在不同分期慢性肾脏病患者中的表达及临床意义

【摘要】 目的：探讨外周血T淋巴细胞亚群、自然杀伤细胞（NK细胞）、B细胞及白细胞介素-6（IL-6）在不同分期慢性肾脏病（chronic kidney disease，CKD）患者中的表达及临床意义。方法：选取盐城市中医院肾内科2022年10月—2023年6月收治的80例CKD 3～5期患者设为CKD组，另外选择同期21例健康体检者设为对照组，其中CKD组患者根据肾小球滤过率水平分为CKD 3期组、CKD 4期组、CKD 5期组。用流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群（CD4+ T细胞、CD8+ T细胞）、NK细胞、B细胞，用酶联免疫吸附试验检测IL-6水平。比较以上指标在不同分期CKD患者中的表达，并采用Spearman相关性分析以上指标与CKD严重程度的相关性。结果：CKD 3期组、CKD 4期组、CKD 5期组CD4+ T细胞、CD8+ T细胞、NK细胞、B细胞均明显低于对照组，且CD4+ T细胞、CD8+ T细胞、NK细胞、B细胞随CKD严重程度加重逐渐降低，差异均有统计学意义（Plt;0.05）；CKD 3期组、CKD 4期组、CKD 5期组IL-6水平明显高于对照组，且IL-6水平随CKD严重程度加重逐渐升高，差异均有统计学意义（Plt;0.05）；IL-6水平与CKD分期呈负相关，CD4+ T细胞、CD8+ T细胞、NK细胞、B细胞与CKD分期呈正相关（Plt;0.05）。结论：随着CKD进展，患者的免疫功能受到显著影响，外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞、B细胞及IL-6在评估CKD患者疾病进展中有重要临床意义。

【关键词】 慢性肾脏病 T淋巴细胞亚群 白细胞介素-6

Expression and Clinical Significance of T Lymphocyte Subsets， NK Cell， B Cell and IL-6 in Peripheral Blood in Patients with Different Stages of Chronic Kidney Disease/SHI Hongjuan， MENG Xianjie， QIN Songlin. //Medical Innovation of China， 2024， 21（16）： 099-102

[Abstract] Objective： To investigate the expression and clinical significance of T lymphocyte subsets， natural killer cell （NK cell）， B cell and interleukin-6 （IL-6） in peripheral blood in patients with different stages of chronic kidney disease （CKD）. Method： A total of 80 patients with CKD stage 3-5 admitted to the Department of Nephrology， Yancheng Traditional Chinese Medicine Hospital from October 2022 to June 2023 were selected as the CKD group， and 21 healthy subjects in the same period were selected as the control group. Patients in the CKD group were divided into CKD stage 3 group， CKD stage 4 group and CKD stage 5 group according to the glomerular filtration rate level. T lymphocyte subsets （CD4+ T cell， CD8+ T cell）， NK cell and B cell in peripheral blood were detected by flow cytometry， and IL-6 levels were detected by enzyme linked immunosorbent assay. The expression of the above indexes in patients with different stages of CKD were compared， and Spearman correlation was used to analyze the correlation between the above indexes and the severity of CKD. Result： CD4+ T cell， CD8+ T cell， NK cell and B cell in CKD stage 3 group， CKD stage 4 group， CKD stage 5 group were significantly lower than those in control group， and CD4+ T cell， CD8+ T cell， NK cell and B cell gradually decreased with the severity of CKD， the differences were statistically significant （Plt;0.05）. The levels of IL-6 in CKD stage 3 group， CKD stage 4 group， CKD stage 5 group were significantly higher than that in control group， and the levels of IL-6 increased gradually with the severity of CKD， the differences were statistically significant （Plt;0.05）. IL-6 level was negatively correlated with CKD stage， and CD4+ T cell， CD8+ T cell， NK cell and B cell were positively correlated with CKD stage （Plt;0.05）. Conclusion： With the progression of CKD， the immune function of patients is significantly affected， and peripheral blood T lymphocyte subsets， NK cell， B cell and IL-6 have important clinical significance in evaluating the disease progression of patients with CKD.

[Key words] Chronic kidney disease T lymphocyte subsets Interleukin-6

First-author's address： Department of Nephrology， Yancheng Traditional Chinese Medicine Hospital， Yancheng 224001， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2024.16.021

慢性肾脏病（CKD）是一种长期且逐渐进展的疾病，它对全球的健康和经济体系都带来了沉重的负担，该疾病与高血压、糖尿病、心血管疾病及遗传因素关系密切[1-2]，其诊断和分期多通过肾小球滤过率（GFR）等判断[3]。根据世界卫生组织的数据，全球约有10%的人口受到CKD的困扰[4]，CKD对患者的生活质量和生活预期造成了严重的负面影响。在早期阶段CKD不会引起明显的症状，CKD根据eGFR的范围分为5期，第5期也称为终末期肾病（ESKD），此时患者的肾脏功能几乎完全丧失，需要透析或肾移植来维持生命[5]。近年来，研究表明CKD的发病机制与免疫因素有密切的关系。T淋巴细胞、B细胞和自然杀伤细胞（NK细胞）是免疫系统中的重要细胞，它们在维护机体免疫功能和抵御感染中发挥关键作用[6-7]。白细胞介素-6（IL-6）是一种重要的细胞因子，IL-6的表达增加与炎症、免疫功能下降和心血管疾病风险增加有关[8]。然而外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞、B细胞及IL-6在CKD病程中的表达及其与不同分期的关系尚未明确。本研究旨在探讨外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞、B细胞及IL-6在不同分期CKD患者中的表达及临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取盐城市中医院肾内科2022年10月—2023年6月收治的80例CKD 3～5期患者设为CKD组。纳入标准：（1）确诊为CKD 3～5期；（2）未接受任何激素或免疫抑制剂治疗。排除标准：（1）过敏体质；（2）近期存在急性感染、外伤或其他急性疾病；（3）合并心、肝、肺、脑等脏器功能障碍。同期另选择21例健康体检者设为对照组，纳入标准：体检结果显示所有主要健康指标（如血压、胆固醇、血糖等）均在正常范围。排除标准：（1）有精神健康问题；（2）有重度饮酒或药物滥用史。CKD组根据文献[9]《KDIGO慢性肾脏病评价及管理临床实践指南》进行分期：患者GFR 30～59 mL/（min·1.73 m2）纳入CKD 3期组（n=27），患者GFR 15～29 mL/（min·1.73 m2）纳入CKD 4期组（n=29），患者GFRlt;15 mL/（min·1.73 m2）纳入CKD 5期组（n=24）。本研究经本院医学伦理委员会审核批准。患者及健康体检者明确表示愿意参与研究，并签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞、B细胞通过流式细胞术（flow cytometry）进行检测 （1）样本准备：采取2～4 mL外周血，离心。（2）细胞染色：将特定的荧光标记的抗体与血样中的细胞孵育，这些抗体能特异性结合到细胞表面的抗原上。例如，CD4抗体用于标记辅助性T细胞（CD4+ T细胞），CD8抗体用于标记细胞毒性T细胞（CD8+ T细胞），CD56抗体用于标记NK细胞，CD19抗体用于标记B细胞。（3）流式细胞检测：经过染色的样本单个细胞通过激光进行照射，这些细胞上的荧光标记抗体被光激活，从而发射出特定波长的荧光，流式细胞仪随后捕获这些荧光信号，并将信息传递给计算机系统进行数据分析和解读。（4）数据分析：通过专用软件，根据荧光强度来鉴定和计数T淋巴细胞亚群、NK细胞和B细胞。

1.2.2 IL-6通过酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）进行检测 （1）样本准备：采集患者静脉血，经离心后取上清血浆。（2）抗体包被：将特异性抗IL-6抗体加入ELISA试剂盘的孔内，孵育后洗涤去除未结合的抗体。（3）样本孵育：将血浆样本加入包被抗体的孔中，孵育后洗涤去除未结合的成分。（4）酶标抗体孵育：加入与IL-6特异性结合的荧光标记的酶标抗体，孵育后洗涤去除未结合的抗体。（5）底物加入：加入底物，与酶标抗体发生反应产生颜色。（6）光度检测：使用酶标仪测量每个孔的吸光度，根据标准曲线计算IL-6的浓度。

1.3 观察指标

（1）比较不同分期CKD患者外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞、B细胞、IL-6的表达变化。（2）评估外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞、B细胞、IL-6与CKD分期的相关性。

1.4 统计学处理

采用SPSS 21.0软件进行试验数据的统计分析。计量资料用（x±s）表示，组间比较行F检验；计数资料以率（%）表示，组间采用字2检验。两个变量之间关系使用双变量相关分析，数据符合正态分布，用Spearman相关系数描述。Plt;0.05认为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 基线资料

四组基线资料比较，差异均无统计学意义（Pgt;0.05），具有可比性，见表1。

2.2 外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞、B细胞及IL-6表达情况

CKD 3期组、CKD 4期组、CKD 5期组CD4+ T细胞、CD8+ T细胞、NK细胞、B细胞均明显低于对照组，且CD4+ T细胞、CD8+ T细胞、NK细胞、B细胞随CKD严重程度加重逐渐降低，差异均有统计学意义（Plt;0.05）；CKD 3期组、CKD 4期组、CKD 5期组IL-6水平明显高于对照组，且IL-6水平随CKD严重程度加重逐渐升高，差异均有统计学意义（Plt;0.05）。见表2。

2.3 外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞、B细胞及IL-6与CKD分期的相关性

Spearman相关性分析显示，IL-6水平与CKD分期呈正相关，CD4+ T、CD8+ T细胞、NK细胞、B细胞与CKD分期呈负相关（Plt;0.05），见表3。

3 讨论

CKD临床表现多样，包括蛋白尿、水肿、疲劳、肌肉痉挛等，对患者的生活质量产生重要影响，同时也会增加患者的心血管病风险[10-11]。在CKD患者中，免疫系统紊乱是一个常见的现象。T淋巴细胞亚群、NK细胞、B细胞是免疫系统中的重要组成部分，它们在免疫应答、感染防御和炎症调控中起着关键作用，CD4+ T细胞和B细胞主要参与免疫应答的启动和调控；CD8+ T细胞和NK细胞则主要负责直接攻击病原体和肿瘤细胞[12-15]。IL-6是一种参与炎症和免疫反应的细胞因子。

在本研究中，随着CKD的进展，CD4+ T细胞、CD8+ T细胞、NK细胞、B细胞在外周血中的表达明显降低，结果表明随着CKD的加重，患者可能出现免疫功能低下或免疫抑制，导致辅助性T细胞和B细胞的数目降低。由于这几种细胞在启动和调节免疫应答中起着关键作用，其数量的减少可能导致体内对外来病原体的免疫应答减弱，彭琪彦[16]和王汉敏等[17]的研究也证实了这一点。在王丽琼等[18]和龚云等[19]的研究中，IL-6的表达随着CKD的加重而增加，这与细胞毒性和炎症反应有关。外周血T淋巴细胞亚群的减少影响患者的抗感染能力，加剧感染性并发症的风险，NK细胞和B细胞的减少同样指示了CKD患者特有的免疫抑制状态，这是由于慢性炎症环境对这些免疫细胞的直接影响。

综上所述，深入研究外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞、B细胞及IL-6的表达，能够更好地了解CKD在不同分期的病理机制，为制订更精确的治疗策略和预测疾病的进展提供重要的依据。

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（收稿日期：2024-01-02） （本文编辑：陈韵）

*基金项目：盐城市医学科技发展计划项目（YK2021040）

①盐城市中医院肾内科 江苏 盐城 224001

通信作者：秦松林