金盏花苷E通过自噬途径下调GPX4 和SLC7A11 抑制肝癌细胞的增殖和迁移

摘要：目的 探讨金盏花苷E抑制肝癌细胞增殖和迁移的分子机制。方法 金盏花苷E处理肝癌细胞，CCK-8 检测细胞活力；Western blotting检测GPX4、SLC7A11、LC3、P62的表达以及Akt/mTOR的磷酸化。自噬抑制剂LY294002和激活剂Rapamycin与金盏花苷E联合处理肝癌细胞，EdU和Transwell 实验分别检测肝癌细胞的增殖和迁移能力。TCGA数据库分析GPX4 和SLC7A11 在肝癌及正常肝组织中的表达水平，以及与肝癌患者存活之间的关系。Western blotting 和qPCR分别检测GPX4 和SLC7A11 在肝癌细胞和正常肝细胞中的表达水平。结果 金盏花苷E 能够显著抑制肝癌细胞的存活（Plt;0.05）；GPX4 和SLC7A11在肝癌组织和肝癌细胞中均显著高表达；GPX4和SLC7A11的表达与肝癌患者存活呈显著负相关（Plt;0.001）；金盏花苷E显著抑制GPX4 和SLC7A11 蛋白的表达，激活Akt-mTOR通路，增强LC3 Ⅱ的表达（Plt;0.01）；自噬激活剂Rapamycin 显著增强金盏花苷E 对GPX4 和SLC7A11 的抑制作用，而自噬抑制剂LY294002 则明显逆转了金盏花苷E 对GPX4 和SLC7A11的抑制作用（Plt;0.05）；抑制自噬途径能够逆转金盏花苷E对肝癌细胞增殖和迁移的抑制作用，增强自噬途径则发生相反的变化（Plt;0.01）。结论 金盏花苷E经自噬途径下调GPX4和SLC7A11抑制肝癌细胞的增殖和迁移。

关键词：金盏花苷E；谷胱甘肽过氧化物酶4；溶质转运蛋白第7 家族11 成员；自噬；肝细胞癌

肝癌是我国常见的一种消化系统恶性肿瘤，也是癌症患者死亡的常见原因之一，其中肝细胞癌（HCC）占原发性肝癌的70%～80%［1-3］。大多数肝癌患者由于确诊时就已经处于中晚期，故治疗效果和预后相对较差。因此，寻找影响HCC发生、发展的潜在生物学标记物，并以其为靶点进行治疗是改善肝癌患者治疗和预后的重要策略。

自噬是机体重要的生物学过程，不仅在细胞调节中发挥蛋白质降解、维持细胞器稳态、代谢稳态等作用［4］，也和肿瘤的发生发展息息相关，调控自噬可作为癌症治疗的重要方法之一［5］。PI3K/Akt/mTOR通路不仅影响细胞增殖、分化、凋亡、转移和血管生成，也是调节肿瘤细胞自噬的重要途径之一，常被作为肿瘤治疗的关键信号途径［6-9］。溶质载体第7家族成员11（SLC7A11）也被称为xCT，是一种细胞跨膜蛋白，组成xc-系统的轻链，负责将细胞外胱氨酸转运至胞内，用于产生半胱氨酸，参与谷胱甘肽的生物合成［10］。SLC7A11在各种人类癌症高表达，并调节肿瘤的发展、增殖、转移、微环境和治疗耐药性［11， 12］，被认为是癌症治疗的一个潜在靶点［13］。它下游的调节因子谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）作为胞内的一种非常重要的抗氧化酶，在细胞存活和功能中发挥关键作用［14］，抑制GPX4也已被证明是一种很有前途的癌症治疗方法［15］。如天然产物姜黄素通过激活自噬途径，下调GPX4和SLC7A11的表达，抑制非小细胞肺癌的增殖［16］。

金盏花苷E（CE）作为一种天然五环三萜皂苷，具有抗炎、缓解缺血再灌注损伤和非酒精性脂肪肝等作用［17-19］。我们已有的研究表明，金盏花苷E能够抑制肝癌HepG2细胞的增殖和迁移［20］，但金盏花苷E调控肝癌进展的分子机制尚需进一步探明。在本研究中，我们发现金盏花苷E能够通过下调Akt/mTOR信号途径，促进肝癌细胞自噬，增强GPX4和SLC7A11蛋白降解，抑制肝癌细胞增殖和迁移。

1 材料和方法

1.1 主要药品和抗体

金盏花苷E（CE，HPLC≥95%，上海源叶生物科技有限公司），兔单克隆抗体β-actin（1∶3000）、辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔（鼠）IgG（H+L）抗体（1∶10000）（ABclonal） ，p-Akt（Ser473）（1∶ 1000） 、p-mTOR（Ser2448）（1∶500）、SQSTM1/P62（1∶500）以及GAPDH（1∶1000）单克隆抗体（Cell Signaling Technology），SLC7A11（1∶1000）以及GPX4（1∶1000）抗体（BOSTER），LC3（1∶500）抗体（Sigma），环己酰亚胺（CHX，MCE），自噬激活剂（Rapamycin，Selleck Chemicals），自噬抑制剂LY294002和细胞裂解液（RIPA）（碧云天），自噬双标慢病毒mRFP-GFP-LC3和助转剂polybrene（通用生物），CCK-8 试剂盒（迈珂生物），EdU检测试剂盒（锐博生物），Transwell小室（Falcon），总RNA提取试剂盒（天根生化），cDNA合成及qPCR检测试剂盒（百时美生物）。

1.2 细胞培养

Huh7肝癌细胞购自中国科学院细胞库，用含10%胎牛血清（Lonsera），1%青霉素-链霉素（碧云天）的DMEM完全培养基，HepG2肝癌细胞（赛库生物）用含10%胎牛血清（Lonsera），1%NEAA（碧云天），1%青霉素-链霉素（碧云天）的MEM完全培养基，置于37 ℃，5% CO2条件下培养。

1.3 CCK-8检测细胞活力

将Huh7细胞按1×104/孔接种于96孔板，细胞贴壁后使用不同浓度金盏花苷E处理细胞并设置空白对照（无细胞的完全培养基），金盏花苷E作用24 h 后加入CCK-8工作液10 μL/孔，置于37℃，5% CO2培养箱中反应2 h，使用全波段酶标仪在450 nm波长处测量每孔A值，并根据如下公式计算细胞存活率。存活率（%）=（A实验组-A空白组）/（A对照组-A空白组）×100%。

1.4 RT-qPCR 检测SLC7A11 和GPX4 mRNA 的表达水平

提取肝癌细胞Huh7、HepG2 和正常肝细胞HL-7702中的总RNA，先通过逆转录合成cDNA，之后进行qPCR，具体操作根据cDNA合成及qPCR检测试剂盒说明书进行。热扩增条件如下：首先95 ℃预变性30 s，然后进行循环扩增，95℃变性10 s，60℃退火和延伸30 s，共40 个循环，2-ΔΔCT 法进行结果分析。qPCR 中所需的SLC7A11、GPX4以及GAPDH上下游引物如表1所示。

1.5 Western blotting检测蛋白表达量

分组处理Huh7 和HepG2 细胞后，弃去培养基，预冷PBS 清洗1 遍，加入含有PMSF 预冷的RIPA 细胞裂解液，4 ℃摇床裂解10 min，12 000 r/min，4 ℃离心10 min，收集细胞裂解上清，加入2×Loading buffer100 ℃金属浴煮沸5 min。取等量蛋白进行SDS-PAGE，将电泳后的蛋白转移至聚偏二氟乙烯膜（PVDF）膜上，用5%脱脂奶粉室温封闭2 h，1×TBST清洗3次，相应一抗4 ℃摇床孵育过夜。次日1×TBST清洗3次后，加入对应二抗后室温孵育2 h，1×TBST清洗后加入化学发光液和底物孵育后，使用化学发光成像系统（上海勤翔）进行结果检测， Image J进行吸光度分析。

1.6 mRFP-GFP-LC3慢病毒感染

将状态良好的Huh7和HepG2细胞接种到6孔板，接种密度保证在第2 天进行病毒感染的时候细胞汇合率介于30%～50%，放37 ℃，5% CO2 培养箱中培养过夜。感染前从冰箱取出并在冰上慢慢融化病毒，吸去细胞原有培养基，加入5 TU/mL 的病毒以及5 μg/mLpolybrene 进行感染，感染后第2 天（24 h），弃去含有病毒的培养液，换上新鲜的完全培养液并使用20 μg/mL以及15 μg/mL 金盏花苷E分别刺激Huh7 和HepG2细胞24 h，通过荧光显微镜观察并拍照。

1.7 EdU检测细胞的增殖能力

将Huh7 以及HepG2 细胞接种于24 孔板，待细胞贴壁后使用20 μmol/L Rapamycin 和30 μmol/LLY294002 分别预处理细胞1 h，再用20 μg/mL 以及15 μg/mL 金盏花苷E 分别刺激Huh7 和HepG2 细胞24 h，之后进行EdU实验检测细胞增殖能力。实验操作按试剂盒说明书进行，荧光倒置显微镜（Olympus）观察并拍照。使用Image J软件分析EdU阳性染色细胞（红色荧光）与Hoechst 染色细胞（蓝色荧光）数量，并计算EdU阳性染色细胞在总细胞中所占的比例。

1.8 Transwell实验检测细胞的迁移能力

细胞分组及处理同1.6 部分。处理后的细胞分别使用无血清的DMEM以及MEM培养基重悬，取细胞悬液200 μL 接种于Transwell 小室上层，500 μL 含有20%胎牛血清的完全培养基置于Transwell小室下层，置于37 ℃，5% CO2培养箱中培养24 h。取出小室，用脱脂棉签轻轻擦去小室上层细胞，之后将小室放入4%多聚甲醛中固定30 min，PBS清洗1遍后放入0.1%结晶紫中室温染色15 min，PBS清洗3次，使用荧光倒置显微镜观察并拍照。

1.9 统计学分析

所有数据以均数±标准差表示。通过SPSS 17.0 软件进行数据分析，Student's t 检验进行两组之间的比较，使用单因素方差分析进行多组间比较，Plt;0.05表示差异具有统计学意义 。

2 结果

2.1 金盏花苷E对肝癌细胞活力的影响

本研究选取Huh7肝癌细胞为研究对象，金盏花苷E≥10 μg/mL作用Huh7细胞24 h，细胞活力被明显抑制；选取浓度为10、15和20 μg/mL的金盏花苷E处理Huh7细胞（图1，Plt;0.05）。

2.2 GPX4 和SLC7A11 在肝癌组织和细胞中的表达及其与肝癌患者存活之间的关系

TCGA数据库分析发现，GPX4 和SLC7A11 在肝癌组织中的表达均显著高于正常肝组织（图2A）；它们的表达水平与肝癌患者存活之间的相关性分析显示，GPX4 和SLC7A11 高表达的患者，其存活时间和存活率均显著降低（Plt;0.001，图2B）。检测肝癌细胞和正常肝细胞HL-7702 中GPX4 和SLC7A11 的表达显示，无论是mRNA水平还是蛋白水平，两者在肝癌细胞系中的表达均显著高于正常肝细胞（Plt;0.01，图2C、D）。

2.3 金盏花苷E对GPX4和SLC7A11表达的影响

金盏花苷E刺激肝癌细胞24 h后，Western blotting检测GPX4和SLC7A11蛋白水平显示金盏花苷E可浓度依赖性的抑制上述蛋白的表达（Plt;0.01，图3）。

2.4 金盏花苷E对GPX4和SLC7A11降解的影响

检测金盏花苷E对GPX4和SLC7A11蛋白降解的影响，与CHX单独处理组相比，金盏花苷E能够明显促进GPX4和SLC7A11蛋白的降解（Plt;0.05，图4）。

2.5 金盏花苷E对自噬途径的影响

检测金盏花苷E对自噬途径的影响，使用不同浓度的金盏花苷E处理肝癌细胞24 h，自噬标志蛋白LC3Ⅱ的表达明显增强；Akt 和mTOR的磷酸化被显著抑制，但P62的表达并未受明显影响（图5）。mRFP-GFP-LC3慢病毒转染结果显示，金盏花苷E作用24 h 后自噬体（黄色斑点）明显增加，自噬溶酶体（红色斑点）无明显变化（图6）。

2.6 自噬途径抑制或激活对金盏花苷E下调GPX4 和SLC7A11表达的影响

使用自噬抑制剂LY294002 和自噬激活剂Rapamycin分别与金盏花苷E联合处理肝癌细胞，发现与金盏花苷E单独处理组相比，Rapamycin预处理能够进一步下调SLC7A11的表达；而LY294002预处理组则能够逆转金盏花苷E对GPX4和SLC7A11的抑制作用。而且LC3Ⅱ的表达水平也进一步证明了Rapamycin对自噬途径的激活作用，以及 LY294002对自噬途径的抑制作用（图7）。

2.7 自噬途径抑制或激活对金盏花苷E抑制肝癌细胞增殖和迁移的影响

检测Rapamycin 和LY294002 与金盏花苷E 联合作用对肝癌细胞增殖和迁移的影响，结果显示，金盏花苷E单独处理的肝癌细胞，EdU阳性染色细胞占比明显低于对照组；Rapamycin 与金盏花苷E联合作用，EdU阳性染色细胞数量显著低于金盏花苷E单独处理组，而LY294002与金盏花苷E联合处理组EdU阳性染色细胞数量较金盏花苷E组明显增加（图8A、C）。Transwell实验发现金盏花苷E单独处理的肝癌细胞迁移能力与对照组相比显著降低。与金盏花苷E 处理组相比，Rapamycin 与金盏花苷E联合处理能够进一步抑制肝癌细胞的迁移能力；而LY294002 则逆转了金盏花苷E对肝癌细胞迁移的抑制作用（图8B、D）。

3 讨论

肝癌作为消化系统常见的恶性肿瘤，发病率和死亡率均较高。虽然已有研究表明，在肝癌HepG2细胞中，天然活性产物金盏花苷E能够通过下调HMGB1 的表达抑制肝癌细胞增殖和迁移［20］。鉴于肿瘤发生、发展在分子机制方面的复杂性，本文以两种肝癌系HepG2 和Huh7 为研究对象，深入探讨了金盏花苷E抑制肝癌细胞增殖和迁移的新机制。本研究结果表明，金盏花苷E通过激活自噬途径促进GPX4 和SLC7A11 蛋白降解，抑制肝癌细胞的增殖和迁移。

本研究在肝癌细胞系Huh7中，通过CCK-8实验验证了金盏花苷E对肝癌细胞活力的抑制作用。该结果不仅进一步证明了我们前期结果的可靠性，也证明了金盏花苷E对肝癌的抑制作用并非HepG2细胞特异性的，但是金盏花苷E抑制肝癌细胞增殖和迁移的分子机制尚不完全清楚。

越来越多的研究表明，抑制GPX4 和SLC7A11 可达到治疗肿瘤的目的［21-23］。本研究通过TCGA数据库分析和细胞水平检测均发现，GPX4 和SLC7A11 在肝癌组织和肝癌细胞中均显著高表达，且它们的表达水平与肝癌患者存活呈现明显负相关。金盏花苷E能否通过影响GPX4 和SLC7A11 的表达，抑制肝癌细胞的增殖和迁移呢？ 金盏花苷E处理的肝癌细胞中GPX4和SLC7A11 蛋白表达被明显抑制。然而，我们在转录水平并未获得和蛋白水平一致的实验结果。我们猜想，金盏花苷E 可能通过调控蛋白降解途径抑制GPX4 和SLC7A11 的表达。本研究结果显示，金盏花苷E 和CHX 联合处理的肝癌细胞，无论是GPX4 还是SLC7A11 蛋白降解速度均明显高于CHX组。该结果意味着金盏花苷E能够通过促进蛋白降解下调GPX4和SLC7A11的表达。

自噬降解途径是体内蛋白降解的主要方式之一［24， 25］， Akt/mTOR是调节自噬的重要信号途径，参与肿瘤发生、发展的一系列病理学过程，且很多研究证明天然产物能够通过靶向Akt/mTOR介导的自噬抑制肿瘤的增殖［26］。因此，靶向Akt/mTOR介导的自噬是许多肿瘤治疗的重要策略［27， 28］。本研究结果显示，金盏花苷E处理肝癌细胞24 h 能够明显抑制Akt 和mTOR的磷酸化，并显著诱导自噬标志蛋白LC3Ⅱ的表达，但不影响P62的表达水平。自噬发生时，定位在胞浆的LC3Ⅰ与磷脂酰乙醇胺（PE）结合形成LC3Ⅱ，P62与泛素化的蛋白质结合，再与LC3Ⅱ蛋白形成复合物，在自噬溶酶体内降解。当自噬流畅通的时候， LC3Ⅱ增加，P62降低。但我们的结果显示，金盏花苷E作用肝癌细胞后LC3Ⅱ表达增加，但P62并无明显改变。造成该现象的原因可能是金盏花苷E仅影响自噬体的形成，对自噬溶酶体的形成并无明显作用。

CQ和3-MA 是经典的自噬抑制剂，CQ主要通过影响自噬溶酶体的形成，3-MA作为PI3KⅢ家族的特异性抑制剂，通过阻断自噬体的形成，发挥自噬抑制作用。LY294002是一种非特异性的PI3K抑制剂，可广泛阻断细胞内PI3K信号通路的磷酸化过程，从而抑制自噬体的形成。已有研究表明， LY294002能够阻断 HER2 阳性的胃癌细胞中 T-DM1 诱导的自噬［29］；LY294002能够逆转紫胶桐酸对HepG2 细胞自噬的诱导作用［30］；LY294002通过抑制自噬参与 gracillin的抗黑色素瘤作用［31］。本实验证明金盏花苷E处理后显著诱导LC3Ⅱ的表达，但不影响P62 的表达水平，意味着金盏花苷E主要影响自噬体的形成。因此，本文选取LY294002作为自噬抑制剂进行后续研究。

为进一步证明自噬途径在金盏花苷E抑制GPX4和SLC7A11表达中的作用，本研究采用了自噬激活剂Rapamycin［32］和自噬抑制剂LY294002［33］联合金盏花苷E处理肝癌细胞，检测GPX4和SLC7A11蛋白的表达。结果显示，Rapamycin确实能够进一步增强金盏花苷E对GPX4和SLC7A11蛋白的抑制作用，而LY294002则明显逆转了金盏花苷E的上述效应。为证明自噬途径在金盏花苷E抑制肝癌细胞增殖和迁移中的作用，我们通过EdU和transwell实验检测自噬抑制剂和激活剂对金盏花苷E调控细胞增殖和迁移的影响，结果同样支持金盏花苷E通过激活自噬途径抑制肝癌细胞增殖和迁移的结论。

总之，本研究在肝癌HepG2 和Huh7 细胞中证明，金盏花苷E通过增强自噬途径介导的GPX4和SLC7A11降解，抑制肝癌细胞的增殖和迁移。本研究不仅在另一肝癌细胞系中验证了金盏花苷E对肝癌细胞增殖和迁移的抑制作用，还提示了金盏花苷E发挥抗癌作用的新机制。

由于GPX4和SLC7A11是铁死亡的重要负性调节因子［22， 34， 35］，而铁死亡作为2012年发现的一种新型细胞死亡形式，已经成为很多肿瘤治疗的重要策略［36， 37］。在本研究中，金盏花苷E能够抑制GPX4和SLC7A11的表达提示我们，铁死亡可能在金盏花苷E抗肿瘤作用中发挥一定的作用。我们接下来的工作将重点关注金盏花苷E对肝癌细胞铁死亡的影响及可能的分子机制。

参考文献：

[1] Xia CF， Dong XS， Li H， et al. Cancer statistics in China and UnitedStates， 2022： profiles， trends， and determinants[J]. Chin Med J，2022， 135（5）： 584-90.

[2] Wang SN， Wu XW， Wu XM， et al. Systematic analysis of the role ofLDHs subtype in pan-cancer demonstrates the importance of LDHDin the prognosis of hepatocellular carcinoma patients[J]. BMCCancer， 2024， 24（1）： 156.

[3] 谢思雨， 李淼生， 江峰乐， 等. EHHADH是肝细胞癌脂肪酸代谢通路的关键基因： 基于转录组分分析[J]. 南方医科大学学报， 2023， 43（5）： 680-93.

[4] Metur SP， Lei YC， Zhang ZH， et al. Regulation of autophagy geneexpression and its implications in cancer[J]. J Cell Sci， 2023， 136（10）： jcs260631.

[5] Jain V， Singh MP， Amaravadi RK. Recent advances in targetingautophagy in cancer[J]. Trends Pharmacol Sci， 2023， 44（5）：290-302.

[6] Chow AK， Yau SW， Ng L. Novel molecular targets in hepatocellularcarcinoma[J]. World J Clin Oncol， 2020， 11（8）： 589-605.

[7] Wang Y， Deng BC. Hepatocellular carcinoma： molecularmechanism， targeted therapy， and biomarkers[J]. Cancer Metastasis Rev， 2023， 42（3）： 629-52.

[8] Glaviano A， Foo ASC， Lam HY， et al. PI3K/AKT/mTOR signalingtransduction pathway and targeted therapies in cancer[J]. MolCancer， 2023， 22（1）： 138.

[9] He PZ， He Y， Ma JJ， et al. Thymoquinone induces apoptosis andprotective autophagy in gastric cancer cells by inhibiting the PI3K/Akt/mTOR pathway[J]. Phytother Res， 2023， 37（8）： 3467-80.

[10]Lee J， Roh JL. SLC7A11 as a gateway of metabolic perturbation andferroptosis vulnerability in cancer[J]. Antioxidants， 2022， 11（12）：2444.

[11] Liu JY， Xia XJ， Huang P. xCT： a critical molecule that links cancermetabolism to redox signaling[J]. Mol Ther， 2020， 28（11）： 2358-66.

[12]Huang Y， Dai ZY， Barbacioru C， et al. Cystine-glutamate transporterSLC7A11 in cancer chemosensitivity and chemoresistance[J].Cancer Res， 2005， 65（16）： 7446-54.

[13]Li SJ， Lu ZY， Sun RB， et al. The role of SLC7A11 in cancer： friendor foe[J]？ Cancers， 2022， 14（13）： 3059.

[14]Zhang W， Liu Y， Liao Y， et al. GPX4， ferroptosis， and diseases[J].Biomed Pharmacother， 2024， 174： 116512.

[15] Jia CX， Zhang X， Qu TT， et al. Depletion of PSMD14 suppressesbladder cancer proliferation by regulating GPX4[J]. PeerJ， 2023，11： e14654.

[16]Tang X， Ding H， Liang ML， et al. Curcumin induces ferroptosis innon-small-cell lung cancer via activating autophagy[J]. ThoracCancer， 2021， 12（8）： 1219-30.

[17]Le YF， Guo JN， Liu ZJ， et al. Calenduloside E ameliorates nonalcoholicfatty liver disease via modulating a pyroptosis-dependentpathway[J]. J Ethnopharmacol， 2024， 319（Pt 2）： 117239.

[18]Li JX， Bu YJ， Li B， et al. Calenduloside E alleviates cerebralischemia/reperfusion injury by preserving mitochondrial function[J]. J Mol Histol， 2022， 53（4）： 713-27.

[19]汤 托， 王胜男， 蔡田雨， 等. 金盏花苷E通过ROS介导的JAK1-stat3信号途径抑制LPS诱发的炎症反应[J]. 南方医科大学学报， 2019，39（8）： 904-10.

[20]Wang SN， Chen XL， Cheng J， et al. Calunduloside E inhibits HepG2cell proliferation and migration via p38/JNK-HMGB1 signallingaxis[J]. J Pharmacol Sci， 2021， 147（1）： 18-26.

[21]Zhang W， Jiang BP， Liu YX， et al. Bufotalin induces ferroptosis innon-small cell lung cancer cells by facilitating the ubiquitination anddegradation of GPX4[J]. Free Radic Biol Med， 2022， 180： 75-84.

[22]Li DB， Wang YH， Dong C， et al. CST1 inhibits ferroptosis andpromotes gastric cancer metastasis by regulating GPX4 proteinstability via OTUB1[J]. Oncogene， 2023， 42（2）： 83-98.

[23]Wang XB， Chen YQ， Wang XD， et al. Stem cell factor SOX2 confersferroptosis resistance in lung cancer via upregulation of SLC7A11[J]. Cancer Res， 2021， 81（20）： 5217-29.

[24]Hanzl A， Winter GE. Targeted protein degradation： current andfuture challenges[J]. Curr Opin Chem Biol， 2020， 56： 35-41.

[25]Wang Y， Le WD. Autophagy and ubiquitin-proteasome system[J].Adv Exp Med Biol， 2019， 1206： 527-50.

[26]Xu ZR， Han X， Ou DM， et al. Targeting PI3K/AKT/mTORmediatedautophagy for tumor therapy[J]. Appl MicrobiolBiotechnol， 2020， 104（2）： 575-87.

[27]Zhang M， Liu SH， Chua MS， et al. SOCS5 inhibition inducesautophagy to impair metastasis in hepatocellular carcinoma cells viathe PI3K/Akt/mTOR pathway[J]. Cell Death Dis， 2019， 10（8）： 612.

[28]Li H， Zhao SF， Shen LW， et al. E2F2 inhibition induces autophagyvia the PI3K/Akt/mTOR pathway in gastric cancer[J]. Aging， 2021，13（10）： 13626-43.

[29]Zhang JH， Fan JJ， Zeng X， et al. Targeting the autophagy promotedantitumor effect of T-DM1 on HER2-positive gastric cancer[J]. CellDeath Dis， 2021， 12（4）： 288.

[30]Yi H， Wang K， Du BY， et al. Aleuritolic acid impaired autophagicflux and induced apoptosis in hepatocellular carcinoma HepG2 cells[J]. Molecules， 2018， 23（6）： 1338.

[31]Li JK， Zhu PL， Wang Y， et al. Gracillin exerts anti-melanoma effectsin vitro and in vivo： role of DNA damage， apoptosis and autophagy[J]. Phytomedicine， 2023， 108： 154526.

[32]Yu WX， Lu C， Wang B， et al. Effects of rapamycin on osteosarcomacell proliferation and apoptosis by inducing autophagy[J]. Eur RevMed Pharmacol Sci， 2020， 24（2）： 915-21.

[33]Chen WS， Xian GY， Gu MH， et al. Autophagy inhibitors 3-MA andLY294002 repress osteoclastogenesis and titanium particlestimulatedosteolysis[J]. Biomater Sci， 2021， 9（14）： 4922-35.

[34]Ouyang SM， Li HX， Lou LL， et al. Inhibition of STAT3-ferroptosisnegative regulatory axis suppresses tumor growth and alleviateschemoresistance in gastric cancer[J]. Redox Biol， 2022， 52： 102317.

[35]Zeng C， Lin J， Zhang KT， et al. SHARPIN promotes cellproliferation of cholangiocarcinoma and inhibits ferroptosis via p53/SLC7A11/GPX4 signaling[J]. Cancer Sci， 2022， 113（11）： 3766-75.

[36]Dixon SJ， Lemberg KM， Lamprecht MR， et al. Ferroptosis： an irondependentform of nonapoptotic cell death[J]. Cell， 2012， 149（5）：1060-72.

[37]Mou YH， Wang J， Wu JC， et al. Ferroptosis， a new form of cell death：opportunities and challenges in cancer[J]. J Hematol Oncol， 2019，12（1）： 34.

（编辑：经 媛）

基金项目：安徽高校自然科学研究项目（KJ2020ZD54，2022AH051212）；安徽省学科（专业）拔尖人才学术资助项目（gxbjZD2021060）；活性生物大分子研究安徽省重点实验室项目（1306C083008）；国家级大学生创新创业训练计划项目（202310368002）