急性脑梗死病人血清circ_HECTD1表达与病情严重程度的关系

张微 侯晓强 杨娜 杨秀平张微 侯晓强 杨娜 杨秀平

摘要目的：探讨急性脑梗死（ACI）病人血清环状RNAHECT结构域E3泛素蛋白连接酶1（circ_HECTD1）表达情况，分析circ_HECTD1与病情严重程度的关系。方法：选取2020年9月—2021年11月开滦总医院收治的ACI病人122例为ACI组，另选同期于本院体检的健康志愿者122名为对照组。收集基本临床资料，采用实时荧光定量聚合酶链式反应（qRTPCR）法检测血清circ_HECTD1水平。Pearson法分析ACI病人血清circ_HECTD1水平与临床资料及美国国立卫生研究院卒中量表（NIHSS）评分的相关性；多因素Logistic回归分析ACI严重程度的影响因素。结果：ACI组高血压比例、空腹血糖、白介素（IL）6、IL1β、C反应蛋白（CRP）、白细胞计数（WBC）及circ_HECTD1水平均高于对照组（P＜0.05）；中度组、重度组年龄、IL6、IL1β、空腹血糖、CRP、WBC及circ_HECTD1水平均高于轻度组（P＜0.05）；多因素Logistic回归分析显示，糖尿病、IL6、IL1β及circ_HECTD1均是ACI病人中重度神经缺损的危险因素（P＜0.05）；血清circ_HECTD1水平与空腹血糖、WBC、IL6、IL1β、CRP及NIHSS评分均呈正相关（P＜0.05）。结论：ACI病人血清circ_HECTD1水平升高，且随病情加重而增加，是中重度神经缺损的危险因素。

关键词急性脑梗死；环状RNAHECT结构域E3泛素蛋白连接酶1；病情严重程度；白细胞介素；超敏C反应蛋白

doi：10.12102/j.issn.16721349.2024.06.035

急性脑梗死（ACI）为常见的脑血管疾病，又称为缺血性脑卒中，严重影响病人的生活质量，给家庭和社会带来沉重的负担［1］。ACI是由于脑供血障碍、缺血、缺氧导致局部脑组织缺血坏死或软化所致，占所有脑卒中病例的80%，具有高残疾率和死亡率［23］。目前，尽管在溶栓和神经保护剂等治疗策略方面取得了较大进展，但严重ACI病人的治疗效果仍不理想，且尽早评估ACI病人的病情严重程度对疾病的治疗及预后非常重要［4］。环状RNA（circRNA）代表一组独特的非编码转录物，其形成共价闭合环，不具有5′端帽子和3′端多聚腺苷酸尾结构［5］，circRNA在细胞质中含量丰富，进化上保守且相对稳定，这赋予了circRNA许多潜在功能［6］，事实上，许多circRNAs表达改变与各种脑血管疾病如缺血性脑卒中有着千丝万缕的联系［7］。Wu等［8］研究表明，高表达的circRNATLK1在ACI后的神经元损伤和神经功能缺损中发挥作用。早期研究表明，circRNAHECT结构域E3泛素蛋白连接酶1（circ_HECTD1）已被确定为高度特异性的circRNA，预测急性缺血性卒中复发风险的价值较高［9］。此外，敲低circ_HECTD1被证实可减轻脑缺血中的神经元损伤［10］，提示circ_HECTD1在ACI中具有重要作用。然而，circ_HECTD1在ACI中的表达变化及与ACI病情进展的关系尚未完全阐明。因此，本研究通过测定ACI病人血清circ_HECTD1的相对表达水平，并分析其与ACI病情严重程度的关系。

1资料与方法

1.1一般资料

选取2020年9月—2021年11月我院收治的ACI病人，根据纳入与排除标准筛选出122例作为ACI组，其中，男68例，女54例。另选同期122名于本院体检的健康志愿者作为对照组，其中，男65名，女57名。ACI组纳入标准：1）符合《中国急性缺血性脑卒中诊治指南2018》［11］中ACI诊断标准；2）首次发病，发病至入院时间＜24h；3）临床资料完整；4）病人或家属知情同意。排除标准：1）合并恶性肿瘤或其他血液疾病者；2）肝肾功能严重不全者；3）精神疾病病人；4）不能配合研究者；5）有近期手术、感染史者。

1.2方法

1.2.1临床资料收集

收集ACI病人及健康志愿者性别、年龄、高血压、糖尿病、吸烟、饮酒、白细胞介素（IL）6、IL1β、空腹血糖、三酰甘油（TG）、同型半胱氨酸（Hcy）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDLC）、C反应蛋白（CRP）、高密度脂蛋白胆固醇（HDLC）及白细胞计数（WBC）等资料。

1.2.2circ_HECTD1指标检测

采集病人（入院翌日清晨）及健康者（体检当日）空腹静脉血5mL，于室温下静置15min，置于离心机中以3000r/min速率离心15min，取离心后上清液于无菌管，分为两份，置于－80℃冰箱中保存待测。取一份血清样本，室温解冻，依据Trizol试剂（北京索莱宝科技有限公司提供）说明提取血清总RNA；测定总RNA纯度及浓度，按照逆转录试剂盒（易锦生物提供）步骤逆转录，合成cDNA；采用ABI7500型实时荧光定量聚合酶链式反应（qRTPCR）仪（美国ABI公司）检测血清中circ_HECTD1表达水平。以甘油醛3磷酸脱氢酶（GAPDH）为内参，引物序列：circ_HECTD1正向引物为5′CACGTGTTATCAGGGGCCT3′，反向引物为5′CGCCACCCTTGCTTTTCAT3′；GAPDH正向引物为5′GCACCACCAACTGCTTA3′，反向引物为5′GCCATCCACAGTCTTCT3′。各样品重复3次，减小实验误差，2－△△Ct法（Ct为循环阈值）计算circ_HECTD1表达。

1.2.3IL6、IL1β、CRP检测

另一份血清样本用酶联免疫吸附法（ELISA）检测IL6、IL1β、CRP。各步操作均遵照试剂盒（上海哈灵生物科技有限公司）说明书进行。

1.2.4分组

ACI组48h内依据美国国立卫生研究院卒中量表（NIHSS）进行评分，以评估病人神经功能缺损程度。根据NIHSS评分，分为轻度组（NIHSS评分＜4分，54例）、中度组（NIHSS评分4～15分，56例）、重度组（NIHSS评分＞15分，12例）。

1.3统计学处理

采用SPSS25.0软件包进行统计学处理。定性资料采用χ2检验；符合正态分布的定量资料以均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验；多组间比较采用单因素方差分析，两组间进一步比较采用SNKq检验；相关性分析采用Pearson法；采用多因素Logistic回归分析ACI严重程度的影响因素。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1ACI组与对照组一般资料比较

ACI组高血压比例、空腹血糖、IL6、IL1β、CRP、WBC及circ_HECTD1水平均高于对照组（P＜0.05）。详见表1。

2.2不同病情严重程度ACI病人一般资料比较

中度组、重度组年龄、IL6、IL1β、空腹血糖、CRP、WBC及circ_HECTD1水平均高于轻度组（P＜0.05）。详见表2。

2.3多因素Logistic回归分析

以ACI病人神经功能缺损程度为因变量（轻度＝0，中重度＝1），将单因素分析中差异有统计学意义的指标作为自变量［年龄、空腹血糖、IL6、IL1β、CRP、WBC及circ_HECTD1以实测值输入，糖尿病（否＝0，是＝1）、吸烟（否＝0，是＝1）］，纳入多因素Logistic回归分析，结果显示，糖尿病、IL6、IL1β及circ_HECTD1均是ACI病人中重度功能缺损的危险因素（P＜0.05）。详见表3。

2.4血清circ_HECTD1水平与部分临床资料及NIHSS评分的相关性

血清circ_HECTD1水平与空腹血糖、WBC、IL6、IL1β、CRP及NIHSS评分均呈正相关（r值分别为0.311，0.330，0.401，0.541，0.473，0.579，P均＜0.05）。详见表4。

3讨论

ACI发病率极高［2］，尤其近年来随着老龄化的加剧和生活水平的提高，脑血管、糖尿病、高血压等疾病的发病率逐步提升，脑血管疾病发病率及致残率、致死率随之增高［3，12］。因此，对于ACI严重程度的评估非常重要，可以给予相应治疗，降低ACI的残疾率和死亡率。

本研究显示，ACI组高血压比例及空腹血糖、IL6、IL1β、CRP、WBC水平均高于对照组，说明高血压、空腹血糖、IL6、IL1β、CRP、WBC可能与ACI的发病有关。高血压负调节血管功能，动脉粥样硬化与高血压有关，而脂质代谢紊乱又与高血糖紧密相关，二者均可引起和加重脑梗死，导致脑组织损伤［13］。CRP、WBC、IL6、IL1β是炎症反应的重要指标，其水平升高是造成神经元损伤的重要原因，参与ACI发病过程［14］。由于基因表达的调节效力和分子结构的特异性，circRNA已被证实是人类疾病中有前景的生物标志物［15］。相关研究证实circRNAs的失调可能参与脑梗死过程［1617］。本研究发现，ACI组血清circ_HECTD1水平高于对照组，与相关研究结果［12］具有一致性，说明circ_HECTD1与ACI的发生有关，circ_HECTD1高表达与脑梗死过程中不可逆的神经元损伤有关［18］，具体机制仍待进一步研究。

本研究分析不同ACI严重程度病人血清circ_HECTD1水平发现，病情越严重血清circ_HECTD1水平越高，提示circ_HECTD1与ACI疾病严重程度密切相关，且是ACI中度、重度神经功能缺损的危险因素，提示circ_HECTD1可能参与ACI的发展。Zhang等［18］研究表明，敲低circ_HECTD1可以改善氧葡萄糖剥夺/再灌注诱导的神经细胞损伤，推测circ_HECTD1可能通过调节神经细胞损伤参与ACI发展。ACI病人发病时，脑组织血氧严重不足，持续释放大量氧自由基，神经细胞损失和凋亡严重［19］。本研究中，中重度组年龄、IL6、IL1β、空腹血糖、CRP、WBC及circ_HECTD1水平均高于轻度组。多因素Logistic回归分析显示，糖尿病、IL6、IL1β、circ_HECTD1均是中重度神经缺损的危险因素。其可能原因：糖尿病病人空腹血糖水平升高，可加剧ACI病人脑组织缺氧缺血程度，导致病情进一步恶化［20］。另外，炎性因子IL6、IL1β也会加重ACI病人的脑组织血管内皮损伤，破坏血脑屏障平衡，造成梗死区水肿，进一步压迫正常脑组织，加剧神经缺损，导致ACI病情恶化［21］。相关性分析结果表明，血清circ_HECTD1水平与空腹血糖、WBC、IL6、IL1β、CRP及NIHSS评分均呈正相关，提示circ_HECTD1可能通过间接调控血糖、炎症等影响ACI的病情严重程度。

综上所述，ACI病人血清circ_HECTD1水平升高，且随病情加重呈增高趋势，是中重度神经缺损的危险因素。但本研究纳入样本量较少，且集中监测某一时段问诊病人，可能受环境条件影响，关于circ_HECTD1参与ACI病情进展的具体机制仍需进一步研究。

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（收稿日期：20220824）

（本文编辑郭怀印）

作者单位开滦总医院（河北唐山063000）

通讯作者侯晓强，Email：pqmqh39@163.com

引用信息张微，侯晓强，杨娜，等.急性脑梗死病人血清circ_HECTD1表达与病情严重程度的关系［J］.中西医结合心脑血管病杂志，2024，22（6）：11391142.