miR-23a-3p、ZNF395水平与妊娠期高血压病人胎儿生长受限的关系

朱丽 刘丽芳

基金项目 深圳市宝安区科技计划基础研究项目（No.20200514112429001）

作者单位 1.深圳市中西医结合医院（广东深圳  518000），E-mail：a13712296366@126.com；2.赣南医学院附属第一医院

引用信息 朱丽，刘丽芳.miR-23a-3p、ZNF395水平与妊娠期高血压病人胎儿生长受限的关系［J］.中西医结合心脑血管病杂志，2024，22（7）：1306-1309.

摘要 目的：探讨妊娠期高血压病人胎盘组织微小RNA-23a-3p（miR-23a-3p）、锌指蛋白395（ZNF395）水平与胎儿生长受限的关系。方法：选取120例妊娠期高血压病人作为研究对象，根据孕期胎儿生长状况将其分为正常对照组（95例）和胎儿生长受限组（25例）。采用实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）法检测胎盘组织中miR-23a-3p表达水平，免疫组化法检测ZNF395蛋白表达水平，收集新生儿体重、胎盘重量等一般资料；采用Pearson法及Spearman法分析胎儿生长受限病人胎盘组织miR-23a-3p、ZNF395水平与新生儿体重、胎盘重量的相关性；采用单因素及多因素Logistic回归分析胎儿生长受限的影响因素。结果：胎儿生长受限组胎盘组织ZNF395蛋白阳性率、新生儿体重、胎盘重量低于正常对照组，miR-23a-3p水平高于正常对照组（P＜0.05）。胎儿生长受限病人胎盘组织miR-23a-3p与ZNF395水平呈负相关（P＜0.05）；新生儿体重、胎盘重量与miR-23a-3p呈负相关（P＜0.05），与ZNF395呈正相关（P＜0.05）。miR-23a-3p是胎儿生长受限的独立危险因素（P＜0.05），ZNF395是胎儿生长受限的保护因素（P＜0.05）。结论：胎儿生长受限病人胎盘组织中miR-23a-3p高表达，ZNF395低表达，miR-23a-3p可能通过下调ZNF395表达影响胎儿生长发育。

关键词 妊娠期高血压；胎盘组织；胎儿生长受限；微小RNA-23a-3p；锌指蛋白395

doi：10.12102/j.issn.1672-1349.2024.07.027

胎儿生长受限是产科常见妊娠合并症之一，指胎儿在母体内因各种因素导致其生长受到限制而未能到达其应表现出的生长速率，从而使胎儿致残率和病死率增高，甚至会增加胎儿成年后的患病率［1］。妊娠期高血压孕产妇易合并胎儿生长受限，故近年来已引起高度关注［2］。滋养细胞侵入异常、胎盘血供异常均是影响胎儿生长发育的因素［3］。微小RNA-23a-3p（miR-23a-3p）参与细胞发育的各个阶段，其中包括增殖、侵袭、迁移、凋亡［4］。锌指蛋白395（zinc finger protein 395，ZNF395）可参与肿瘤进展，且有研究表明ZNF395与胎儿生长发育有关［5-6］。本研究前期通过生物信息学预测网站miRDB（http：//mirdb.org/cgi-bin/search.cgi）预测发现，miR-23a-3p与ZNF395存在靶向结合位点。推测miR-23a-3p可能通过靶向ZNF395调控胎儿生长发育。因此，本研究主要探讨妊娠期高血压病人胎盘组织miR-23a-3p、ZNF395水平与胎儿生长受限的关系，以期为胎儿生长受限提供基因修饰靶点。

1 对象与方法

1.1 一般资料

选取我院2020年6月—2022年6月收治的120例妊娠期高血压病人作为研究对象，年龄25～33（29.06±3.46）岁。根据胎儿生长状况将孕妇分为正常对照组（95例）和胎儿生长受限组（25例）。纳入标准：1）符合妊娠期高血压诊断标准［7］，胎儿生长受限组符合胎儿生长受限诊断标准（新生兒体重不足同期新生儿体重平均值的90%或足月分娩新生儿体重低于2.5 kg）［8］，正常对照组以《妇产科学》相关标准为参考（足月新生儿体重＞2.5 kg且＜4.0 kg）；2）孕周≥37周；3）病历资料齐全；4）均为单胎头位妊娠。排除标准：1）胎儿伴有宫内感染性疾病或先天性心脏病等疾病；2）孕妇妊娠期间存在饮酒及吸烟史，或依从性较差者；3）孕妇妊娠期间合并前置胎盘、胆汁淤积等其他妊娠内科合并症。本研究经我院临床研究伦理委员会批准，符合伦理学标准，病人知情同意并签署知情同意书。

1.2 主要试剂与仪器

免疫组化试剂盒（货号：YDDEF001）购自上海羽哚生物科技有限公司；ZNF395抗体（货号：340163.000）购自艾美捷科技有限公司；RNA提取试剂盒（货号：R1200-100）购自北京索莱宝科技有限公司；qPCR SYBR Green Master Mix（货号：YB11201ES03）购自上海钰博生物科技有限公司；反转录试剂盒（货号：YT9036）购自北京伊塔生物科技有限公司；实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）仪（型号：CFX384）购自美国Bio-Rad公司。

1.3 研究方法

1.3.1 样品采集及保存

采集受试者新鲜胎盘，无菌操作取胎盘滋养层组织1 cm×1 cm×1 cm（脐带附着处至胎盘另一面中央区1/2处），放入经焦炭酸二乙酯处理的冷冻管中，保存待测。

1.3.2 miR-23a-3p表达水平测定

采用RNA提取试剂盒及反转录试剂盒提取胎盘组织总RNA后反转录为cDNA，具体操作步骤严格按照试剂盒说明书进行。采用qRT-PCR仪对miR-23a-3p及其内参进行扩增，引物由上海生工生物工程有限公司合成，引物序列见表1。反应条件：95 ℃预变性5 min，95 ℃ 30 s，60 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，40个循环。qRT-PCR反应体系：cDNA（50 ng/μL）2 μL，正反向引物（10 μmol/L）各0.8 μL，qPCR SYBR Green Master Mix 10 μL，双蒸水（ddH2O）6.4 μL。每份样品均设3个重复孔，采用2－△△CT法计算胎盘组织miR-23a-3p相对表达量。

1.3.3 ZNF395蛋白水平测定

将胎盘组织标本采用4%多聚甲醛固定、石蜡包埋、连续切片，采用免疫组织化学法检测胎盘组织ZNF395蛋白表达水平，具体染色方法按照通用免疫组化试剂盒说明书进行操作。随机选5个高倍镜视野观察（计数200个细胞），由2名高年资的病理医师采用半定量法进行评分，按阳性细胞比例计分，阳性细胞比例0～＜26%计1分，26%～＜51%计2分，51%～75%计3分，＞75%计4分；按染色强度计分：棕褐色计3分，棕黄色计2分，浅黄色计1分，无色计0分。2次评分乘积≤2分为阴性表达，＞2分为阳性表达。

1.4 统计学处理

采用SPSS 25.0统计软件分析数据。定量资料符合正态分布，用均数±标准差（x±s）表示，两组间比较行t检验；定性资料采用例数、百分比（%）表示，组间比较行χ2检验；采用Pearson法及Spearman法分析胎儿生长受限病人胎盘组织miR-23a-3p、ZNF395水平与新生儿体重、胎盘重量的相关性；采用单因素及多因素Logistic回归分析法分析胎儿生长受限的影响因素。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 两组临床资料比较

两组孕妇年龄、孕前体质指数（BMI）、孕中期BMI增加、孕周、分娩史、新生儿性别、孕期羊水量异常情况比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。详见表2。

2.2 两组新生儿体重及胎盘重量比较

胎儿生长受限组新生儿体重、胎盘重量低于正常对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。详见表3。

2.3 两组胎盘组织miR-23a-3p、ZNF395蛋白水平比较

胎儿生长受限组胎盘组织miR-23a-3p水平高于正常对照组，ZNF395蛋白阳性率低于正常对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。详见表4。

2.4 胎儿生长受限病人胎盘组织中miR-23a-3p、ZNF395水平与新生儿体重、胎盘重量的相关性

相关分析结果显示，胎儿生长受限病人胎盘组织miR-23a-3p与ZNF395水平呈负相关（r＝－0.582，P＜0.05）；新生儿体重、胎盘重量与miR-23a-3p呈负相关（r值分别为－0.504，－0.527，P均＜0.05），与ZNF395 呈正相关（r值分别为0.489，0.513，P均＜0.05）。

2.5 胎儿生长受限影响因素的单因素及多因素Logistic回归分析

以是否存在胎儿生长受限为因变量，以miR-23a-3p、ZNF395、年龄、孕前BMI、孕中期BMI增加、孕周、分娩史、新生儿性别、孕期羊水量异常为自变量，进行单因素Logistic回归分析，以单因素分析结果中差异有统计学意义的指标miR-23a-3p、ZNF395、孕期羊水量异常为自变量，进行多因素Logistic回归分析，结果显示，miR-23a-3p是影响胎儿生长受限的独立危险因素（P＜0.05），ZNF395是影响胎儿生长受限的保护因素（P＜0.05）。详见表5、表6。

3 讨 论

妊娠期高血压是妇产科常见病和多发病，其病因尚未完全阐明，但重度妊娠期高血压病人体内小动脉存在痉挛的情况，会导致胎盘血流灌注不足进而致使胎儿宫内生长受限［9-10］。胎儿生长受限不仅对新生儿生长发育造成影响，还可能会对心血管及大脑等系统发育产生不利影响，增加孕产妇痛苦，严重影响优生优育，同时给家庭和社会带来严重的医疗负担［11-12］。因此，寻找相关基因修饰靶点，进而及时采取个体化治疗措施，可能是改善胎儿生长受限、降低疾病发生率的有效措施。

miRNA主要通過与靶基因特异性配对结合，在转录后水平负性调控靶基因表达［13］。miR-23表达参与骨骼肌的发育［14］。miR-23a是miR-23的一种亚型，也是肿瘤研究中的明星分子，一般作为致癌基因促进癌细胞生长、侵袭转移［15-16］。ZNF395是锌指蛋白家族的成员，是一个核质穿梭转录因子，最初被鉴定为调控人乳头状瘤病毒的转录因子，参与细胞生长和凋亡［17-18］。根据胎儿生长受限诊断标准将本研究中120例妊娠期高血压孕妇分为胎儿生长受限组和正常对照组，结果显示，胎儿生长受限组胎盘组织miR-23a-3p水平高于正常对照组，ZNF395蛋白阳性率水平低于正常对照组，且miR-23a-3p是胎儿生长受限的独立危险因素，ZNF395是胎儿生长受限的保护因素。ZNF395表达趋势与曹文红等［6］研究结果一致。提示胎盘组织中miR-23a-3p、ZNF395的表达差异可能与胎儿生长受限的发生具有一定的相关性，其机制可能为部分妊娠期高血压病人血流高阻低排导致子宫有效灌注压降低，内皮细胞受损，miR-23a-3p表达量升高，miR-23a-3p在转录后水平负性调控靶基因ZNF395使其低表达，进而影响滋养细胞的正常侵入和迁移，造成胚胎发育异常，最终影响胎儿生长发育，导致胎儿生长受限；亦或是miR-23a-3p通过抑制ZNF395表达，影响子宫血流动力学，影响胎盘血供，进而影响胎儿生长。此外，相关性分析结果显示，胎儿生长受限病人胎盘组织miR-23a-3p与ZNF395水平呈负相关，且二者与新生儿体重、胎盘重量均有相关性。进一步提示miR-23a-3p可能是通过抑制ZNF395表达，抑制胎盘尤其是滋养细胞的发育，进而造成胎儿发育受限。提示临床研究中应密切监测妊娠期高血压孕妇胎儿的宫内情况及miR-23a-3p、ZNF395水平。

综上所述，胎儿生长受限病人胎盘组织中miR-23a-3p表达水平升高，ZNF395表达水平降低，二者均与新生儿体重、胎盘重量相关，且是胎儿生长受限的影响因素。miR-23a-3p可能通过负向调控ZNF395表达参与胎儿生长受限过程，miR-23a-3p、ZNF395可能是改善胎儿生长受限的基因修饰靶点。但仍需进一步加大样本量来验证miR-23a-3p、ZNF395基因的临床应用价值及其影响胎儿生长受限的分子基础。

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（收稿日期：2022-07-21）

（本文編辑王丽）