麻芩清热止咳合剂对靶动物鸡的安全性试验

张正达,王苹苹,胡龙飞,陈 静,刘 佳,郭 莉,张 娜,郝智慧*

(1.新疆农业大学动物医学学院,新疆乌鲁木齐 830052;2.中国农业大学动物医学院,北京 100193;3.保定冀中药业有限公司,河北保定 071000)

鸡肺热咳喘病证在临床上以发热、伸颈张口呼吸、甩鼻、喘鸣、咳嗽、咽喉肿胀等症为特征[1]。感染此病后,雏鸡生长缓慢或停滞,蛋鸡产蛋量大幅度下降,导致较大经济损失[2-3]。 其致病机理是由于热毒入侵肺经所致,肺气不宣,则呼吸不畅导致咳喘,肺气清肃,肺失肃降,肺气则会上逆,同样造成咳喘,从而导致脾运化受阻,肝肾气血不足,最终咳喘加重[4-5]。由麻黄、炒苦杏仁、石膏、甘草、黄芩、板蓝根、北豆根多种中药组成的麻芩清热止咳合剂,其在麻杏石甘口服液的基础上加入了黄芩力助麻黄、石膏清肺热,同时加入板蓝根主清上呼吸道热邪,北豆根清咽利喉,增强清热、解毒之功,并助平喘、利咽之效,用于治疗鸡肺热咳喘。本试验参照《兽用中药、天然药物临床试验技术指导原则》(农业部公告第 1596号)[6]与《畜禽用药物靶动物安全性试验指导原则》(农业农村部第 326 号)[7],以麻芩清热止咳合剂推荐剂量(0.36 g/kg·bw)的1倍、3倍、5倍给试验鸡,以评价麻芩清热止咳合剂应用于肉鸡的安全性,为其临床安全用药提供理论参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验用动物 120只雌雄各半的平均17日龄体重相近的健康爱拔益加肉鸡(AA肉鸡)。

1.1.2 药品 麻芩清热止咳合剂(批号:202004002),保定冀中药业有限公司生产。

1.1.3 主要试剂 全血稀释液(CELLPACK DCL),日本SYSMES公司产品。丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒(ALTL)、天冬氨酸氨基转移酶检测试剂盒(ASTL)、葡萄糖检测试剂盒(GLUC3)、尿素/尿素氮检测试剂盒(UREAL)、肌酐检测试剂盒(CREJ2)、甘油三酯检测试剂盒(TRIGL)、胆固醇检测试剂盒(CHOL2),上海罗氏制药有限公司产品。

1.1.4 主要仪器 高速冷冻离心机(Centrifuge 5920R),德国Eppendorf公司产品;全自动生化分析仪(Cobas 6000),瑞士Roche公司产品;全自动模块式血液体液分析仪(Sysmex XN-1000),日本SYSMES公司产品;立式压力灭菌器(SX-500),日本TOMY公司产品;生物显微镜(CX23),日本OLYMPUS公司产品;轮转式切片机(YD-315)、全自动生物组织冷冻包埋机(YD-6L)、生物组织全自动脱水机(YD-12P)、生物组织摊烘烤一体机(YD-AB3)、全自动生物组织染色机(YD-700),均为浙江金华市益迪医疗设备有限公司产品。

1.2 方法

1.2.1 试验动物分组与处理 选取120只雌雄各半、平均17日龄、体重相近的健康爱拔益加肉鸡。在试验开展前,对各组鸡称重,以体重为主要指标用随机数字法将试验鸡随机分配到4个组,分别是1倍剂量组、3倍剂量组、5倍剂量组、空白对照组,每组30只。各组试验鸡以脚标编号。空白对照组正常饲养,不给药;试验组按照麻芩清热止咳合剂1倍、3倍、5倍的推荐剂量进行混饮给药,即0.36 g/kg·bw、1.08 g/kg·bw、1.80 g/kg·bw。自18日龄开始给药,每天1次,连用10 d。用药结束后连续观察10 d。

1.2.2 临床症状观察 每天上午、下午逐只观察并记录试验鸡的临床表现,包括精神状态、采食、饮水、粪便等,据实记录。如有异常,详细记录异常情况表现和死亡鸡数,及时对死亡动物或临床表现明显异常的动物进行剖检确定死亡或异常原因。

1.2.3 血常规指标测定 分别于给药前、给药结束后采集各组试验鸡翅下静脉血,用EDTA(乙二胺四乙酸)抗凝采血管采血1 mL,进行血液常规检测,主要包括血红蛋白、白细胞、红细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、血小板。

1.2.4 血液生化指标测定 分别于给药前、给药结束后采集各组试验鸡翅下静脉血,用促凝采血管采血1 mL,进行血液生化检测,主要包括总蛋白、血清白蛋白、血糖、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶、总胆固醇、肌酐、尿素、总胆红素、甘油三酯。

1.2.5 剖检及病理组织学观察 在给药结束时和试验结束时对5倍剂量组和空白对照组中各选取15只试验鸡处死,详细检查心、肝、脾、肺、肾等器官有无异常。每组选取6只鸡进行脏器采样,并保存至10%的福尔马林固定。常规方法制备病理切片,苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin,HE)后镜检。

2 结果

2.1 体重

各组试验鸡的体重变化见表1。麻芩清热止咳合剂1倍、3倍、5倍剂量组给药期和观察期试验鸡的日均体重增长和空白对照组无统计学差异(P>0.05)。

表1 体重测定结果

2.2 临床观察

给药期间以及观察期间各组试验鸡的采食、饮水、粪便、精神状态等亦均未见异常,且无试验鸡出现死亡。

2.3 耗料量与料重比

试验期间每天记录各试验组鸡的耗料量,计算各组试验鸡在试验期间料重比,详见表2。在给药期麻芩清热止咳合剂1倍、5倍剂量组料重比略高于空白对照组,3倍剂量组料重比略低于空白对照组,在观察期间麻芩清热止咳合剂1倍、3倍、5倍剂量组料重比略低于空白对照组,均无明显差异,且未显示出剂量相关性,说明麻芩清热止咳合剂基本不会影响试验鸡的正常生长。

表2 耗料量和料重比结果

2.4 血常规测定结果

各组试验鸡血常规测定结果见表3。血常规测定结果显示:给药后麻芩清热止咳合剂5倍剂量组红细胞数目显著高于对照组红细胞数目,推断麻芩清热止咳合剂高剂量可能有促进红细胞增多的功效,但需要进一步试验验证;其他指标(淋巴细胞百分比、血小板数量)升高或者降低虽然具有显著性差异(P<0.05),但无明显的规律性以及剂量相关性,且指标数值均在鸡正常指标的参考范围内[8-9]。

表3 血常规测定结果

2.5 血液生化相关指标

各组试验鸡的血液生化相关指标检测结果见表4。血液生化相关指标检测显示,试验各组指标升高或者降低虽具有显著性差异(P<0.05),但无明显的规律性以及剂量相关性。可以认为是试验鸡生长过程中血液指标的正常波动[10-12]。

表4 血液生化指标检测结果

2.6 剖检及病理切片观察

给药结束后和观察期结束后分别取空白对照组和麻芩清热止咳合剂5倍剂量组试验鸡进行剖检,肉眼观察心、肝、脾、肺、肾等脏器,均未发现明显病变。对其心、肝、脾、肺、肾进行病理组织学观察(图1至4)。5倍剂量组与空白对照组相比,脾脏细胞清晰无病变组织,肝细胞无肿大坏死等异常情况,肾结构和肾小球形态正常,心肌细胞轮廓清晰,无异常情况,肺结构完整,肺泡清晰可见。说明连续10 d混饮5倍推荐剂量的麻芩清热止咳合剂对鸡的主要脏器不会产生毒性作用及病理性损伤。

1.心脏;2.肝脏;3.脾脏;4.肺脏;5.肾脏1.Heart; 2.Liver; 3.Spleen; 4.Lung; 5.Kidney

1.心脏;2.肝脏;3.脾脏;4.肺脏;5.肾脏1.Heart; 2.Liver; 3.Spleen; 4.Lung; 5.Kidney

1.心脏;2.肝脏;3.脾脏;4.肺脏;5.肾脏1.Heart; 2.Liver; 3.Spleen; 4.Lung; 5.Kidney

1.心脏;2.肝脏;3.脾脏;4.肺脏;5.肾脏1.Heart; 2.Liver; 3.Spleen; 4.Lung; 5.Kidney

3 讨论

在治疗鸡肺热咳喘病证上,麻杏石甘口服液应用范围较广,具有一定的疗效,但同时也发现其平喘效果显著,但清热解毒作用较弱,而治疗鸡肺热咳喘主要方法是清热解毒,宣肺平喘。在此基础上,为适应市场需求,研发麻芩清热止咳合剂具有重要意义。本试验以1倍、3倍、5倍的临床推荐剂量给试验鸡混饮给药,从受试鸡的临床反应、组织病理学和生理生化指标变化的特征等方面进行安全性评价和评估。其中鸡的临床反应可以直接反应鸡的生长状况,血常规指标与血液生化指标是衡量机体生理及代谢状况和重要器官功能状态的重要依据,也是疾病诊断和检测的指标之一[13-14]。结果显示麻芩清热止咳合剂按照每0.36 g/kg·bw、1.08 g/kg·bw、1.80 g/kg·bw饮水给药,连用10 d,未引起试验鸡中毒或死亡;各组试验鸡的临床表现、采食和饮水、血常规指标、血液生化指标、脏器观察和组织切片均未见异常,说明1倍、3倍、5倍剂量的麻芩清热止咳合剂不会影响机体的内脏健康以及正常功能和代谢。综上所述,麻芩清热止咳合剂按1倍、3倍、5倍推荐剂量给药对鸡体无明显毒副作用,临床用药安全可靠。