CD25基因多态性与EV71感染手足口病患儿易感性及严重性的关系

崔云会

河南省商丘市第一人民医院分子生物实验室 476000

手足口病(HFMD)是一种由肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇A组16型(CVA16)等肠道病毒感染诱发的出疹性传染病,该疾病在人群中普遍易感,其中多见于5岁以下儿童[1]。不同肠道病毒感染引起的HFMD病情存在显著差异,其中重症HFMD多由EV71感染引起,可并发病毒性脑炎、心肌炎、肺水肿等,严重者甚至会死亡[2]。相关研究发现,个体之间的EV71易感风险和感染程度悬殊较大,可能与基因突变、病毒毒性、免疫功能等多种因素有关[3]。目前已鉴定出多种与EV71易感风险相关的基因[4-5]。CD25又被称为白介素-2受体α(IL2RA),是调节性T细胞(Treg)表面的特异性标记分子,在白介素-2(IL-2)信号传导过程中发挥重要的调节作用,且与CD4+CD25+Treg存活密切相关[6]。既往研究发现,外周血中CD4+CD25+Treg表达减少与EV71感染HFMD的病情发展有关[7]。故推测CD25与EV71感染HFMD之间存在某种关系,但是目前尚未有研究对这一推论进行验证。鉴于此,本次研究主要探讨CD25基因rs7072793位点多态性与EV71感染HFMD患儿易感性及严重性的关系,旨在为临床诊疗提供指导。

1 对象与方法

1.1 研究对象 将2020年11月—2022年11月我院收治的122例EV71感染HFMD患儿作为本次研究对象(HFMD组),根据疾病严重程度分为轻症组(n=79)和重症组(n=43)2个亚组。HFMD组男69例,女53例;年龄1～12岁,平均年龄(3.37±0.65)岁;体质量(13.85±2.74)kg;有70例体温<39℃,52例体温≥39℃;皮疹部位:单个部位33例;多个部位89例;脑电图:正常95例;异常27例。纳入标准:(1)HFMD诊断标准参考《手足口病诊疗指南(2018年版)》[8];(2)年龄1～10岁;(3)首次患病,EV71检测结果呈阳性;(4)患儿的监护人知情同意。排除标准:(1)合并先天性疾病、恶性肿瘤、脏器功能不全者;(2)由其他肠道病毒感染引起的HFMD;(3)病历资料不完整者;(4)配合度差及谢绝参与本研究者。

另外将同时期在我院进行健康检查的150例健康儿童纳入对照组。其中男86例,女64例;年龄1～12岁,平均年龄(3.32±0.61)岁;体质量(13.82±2.72)kg。HFMD组性别、年龄、体质量与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。我院医学伦理委员已对本研究进行审核批准。

1.2 方法

1.2.1 标本采集和血清DNA提取。采集HFMD患儿入院次日的空腹静脉血样4mL,使用高速离心机(湖南凯达科学仪器有限公司)进行离心处理,离心速度3 500r/min,离心时间10min,分离上层血清,采用DNA提取试剂盒(上海源叶生物科技有限公司)提取血清中单核细胞DNA,检测其浓度和光密度,并存储于冰箱内待检。

1.2.2 CD25基因rs7072793位点基因分型检测。采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)技术鉴定CD25基因rs7072793位点基因分型,检测流程如下:取2μL稀释后的DNA溶液作为模板与CD25基因rs7072793位点的特异性引物(上海研尊生物科技有限公司)进行聚合酶链反应(PCR)扩增(上游引物:5’-ACGTTGGATGTCTTCTCACATCCCTGCATC -3’下游引物:5’-ACGTTGGATGTTACGCATGAACGCTCTGTC -3’),然后加入2%琼脂糖凝胶上分离片段,并在紫外光下进行溴化乙锭染色。采用荧光原位杂交技术进行图像扫描,并利用TL998系统分析图像中各通道的信号值,根据信号值评估CD25基因rs7072793位点基因分型。反应条件:94℃预变性3min,94℃变性30s,50℃退火30s、72℃延伸30s,共35个循环。试剂盒与仪器使用方法参考说明书。

2 结果

2.1 Hardy-Weinberg遗传平衡度检验 对照组和HFMD组CD25基因rs7072793位点基因型符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律,样本具有代表性(P>0.05),见表1。

表1 CD25基因rs7072793位点基因型的Hardy-Weinberg遗传平衡度检验

2.2 两组CD25基因rs7072793位点基因型和等位基因分布情况比较 对照组CD25基因rs7072793位点CC、CT、TT基因型频率和C、T等位基因频率与HFMD组比较,差异有统计学意义(P<0.05),见表2。

表2 两组CD25基因rs7072793位点基因型和等位基因分布情况比较[n(%)]

2.3 轻症组和重症组CD25基因rs7072793位点基因型和等位基因分布情况比较 轻症组CD25基因rs7072793位点CC、CT、TT基因型频率和C、T等位基因频率与重症组比较,差异有统计学意义(P<0.05),见表3。

表3 轻症组和重症组CD25基因rs7072793位点基因型和等位基因分布情况比较[n(%)]

2.4 EV71感染重症HFMD发病的多因素Logistic回归分析 本研究将是否发生EV71感染重症HFMD作为因变量(否=0,是=1),将临床资料、CD25基因rs7072793位点基因型和等位基因作为自变量进行多因素Logistic回归分析,结果显示,脑电图结果异常、CD25基因rs7072793位点TT基因型、CD25基因rs7072793位点T等位基因是EV71感染重症HFMD发病的独立危险因素(P<0.05),见表4。

表4 EV71感染重症HFMD发病的多因素Logistic回归分析

3 讨论

在新冠疫情的背景下,2020年我国HFMD的新发病例数明显减少,但是随着疫情管控的逐步开放,人们的自我防护意识减弱,HFMD的发病率已逐渐恢复至疫情前水平,防控形势仍然非常严峻[9]。HFMD是一种自限性疾病,主要通过接触和呼吸道进行传播,具有较强的传染性。大部分HFMD患儿在接受对症支持治疗后1周内即可痊愈,但是少数重症患儿因病情发展迅速,容易累及神经系统,严重者甚至会出现呼吸循环功能障碍,预后较差[10]。其中EV71是引起重症HFMD的主要病原体[11],但是发病机制尚未完全阐明。因此,深入研究EV71感染所致重症HFMD的发病机制,寻找潜在的治疗靶点是现阶段临床研究的热点。

Treg是一群具有免疫调节作用的T细胞亚群,包括自然Treg、适应性Treg、CD8+Treg等,在维持免疫微环境稳态中发挥重要的作用,与多种疾病8的发生、发展相关[12-13]。CD25是CD4+、CD25+Treg表面的特异性标记分子,能够与效应T细胞竞争性结合IL-2,并激活相关信号传导通路,调控Treg的增殖、分化、成熟等过程[14]。既往研究已证实,CD25基因多态性与肿瘤免疫逃逸、免疫炎症、慢性感染等有关[15-16]。Li等[17]研究发现,CD25与急性髓系白血病预后生存有关,其表达上调与低生存率有关。王微等[18]研究发现,CD25基因rs7072793位点 TT 基因型是肺癌发生的危险因素,可通过增加CD25表达水平,从而提高肿瘤细胞免疫逃逸能力。Tang等[19]研究发现,CD25基因rs2104286位点多态性与EB病毒相关性噬血细胞综合征的易感风险有关,且携带AA基因型患儿的易感风险更高。

本研究发现,HFMD组CD25基因rs7072793位点TT、CT基因型频率和T等位基因频率高于对照组,CC基因型频率和C等位基因频率低于对照组(P<0.05)。提示CD25基因rs7072793位点多态性与EV71感染HFMD患儿的易感风险有关。本研究还发现,轻症组CD25基因rs7072793位点CC、CT、TT基因型频率和C、T等位基因频率与重症组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。提示CD25基因rs7072793位点多态性与EV71感染HFMD患儿的病情严重程度有关。分析原因:外周诱导获得的Treg与白介素-10(IL-10)、转化生长因子-β(TGF-β)等细胞因子相互作用后,可刺激CD4+、CD25+Treg活化,促使CD25表达增加,发挥免疫抑制作用[20]。而CD25基因多态性会阻断IL-2信号转导通路,影响Treg的生长发育过程,进而造成机体的免疫功能紊乱,增加EV71感染的风险。故推测CD25基因rs7072793位点多态性可参与EV71感染HFMD的发生、发展过程。本研究影响因素分析发现,脑电图结果异常、CD25基因rs7072793位点TT基因型、CD25基因rs7072793位点T等位基因是EV71感染重症HFMD发病的独立危险因素(P<0.05)。提示CD25基因rs7072793位点多态性与EV71感染HFMD患儿的重症化有关,且携带TT基因型、T等位基因患儿的重症化风险更高。

综上所述,CD25基因rs7072793位点多态性与EV71感染HFMD患儿的易感风险和病情严重程度存在关联,且携带TT基因型、T等位基因患儿进展为重症的风险更高。但是本研究纳入病例数较少,且来自同一单位,存选择偏倚,今后可设计大样本、多中心研究,进一步探讨CD25基因其他位点多态性与EV71感染HFMD的关系。