肺癌恶性胸腔积液患者外周血中肿瘤标志物Hsp90α 的表达水平及其预后评估

高莹莹 李 锋 孙翠玲

安徽省阜阳市人民医院肿瘤科，安徽阜阳 236012

肺癌属于我国较为常见的一种恶性肿瘤，发病率呈现逐年上涨的趋势，且该病转移快、易复发[1-2]。中晚期肺癌患者多伴随恶性胸腔积液，加之常见的肺癌诊断方法CT 扫描、支气管镜检查均具有检查步骤繁琐、耗费时间较长等缺点，且临床现有的肺癌肿瘤标志物针对性欠佳[3-4]。肿瘤标志物主要指存在于肿瘤组织中含量明显高于正常组织的生化物质，对于肿瘤分类、诊断、预后具有重要参考意义[5-6]。因此，临床亟需发现一种新型有效的肿瘤标志物以提高检测针对性，提高确诊率。热休克蛋白90α（heat shock protein 90α，Hsp 90α）是构成人体细胞的一种关键性伴侣蛋白，主要由732 个氨基酸所构成，能有效地将细胞多种信号传导蛋白维持在一个较为稳定状态，同时辅助蛋白进行折叠，最终促进细胞生长和存活[7-8]。相关研究结果显示，Hsp90α 参与多种恶性肿瘤的发生、进展、转移，其表达水平与肿瘤恶性程度呈正相关，可将其作为新型肿瘤标志物[9-10]。为进一步研究其作为肿瘤标志物与预后生存状况的相关性，本研究选取肺癌合并恶性胸腔积液患者纳入研究，对其外周血中肿瘤标志物Hsp90 α 水平进行检测并随访2 年。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取安徽省阜阳市人民医院2018 年1 月至2021 年1 月收治的80 例肺癌合并恶性胸腔积液患者作为A组，另选取同期安徽省阜阳市人民医院收治的80例良性胸腔积液患者作为B 组及于安徽省阜阳市人民医院体检的80 名健康者作为C 组纳入研究。A 组纳入标准：①经超声支气管镜下淋巴结穿刺活检、肺穿刺活检、支气管镜活检及胸腔积液细胞学检查等确诊；②病历资料完整，且能随访调查。排除标准：①合并肾、肝、心等脏器严重病变；②合并代谢、内分泌紊乱史；③未行肿瘤标志物检测；④接受过靶向、手术等治疗；⑤合并肿瘤病史；⑥病历资料不完整，或中途退出研究。其中男45 例，女35 例；年龄48～78 岁，平均（56.28±2.19）岁；小细胞肺癌45 例，腺癌23 例，鳞癌12 例。B 组纳入标准：①伴随胸痛、咯痰、咳嗽等症状，并急性发热（体温＞39 ℃）；②胸腔超声提示双侧、单侧胸腔积液，肺CT 或胸X 线片提示双侧、单侧肺部发生渗出性病变；③病历资料完整，且能随访调查。排除标准：①因手术、肿瘤、心力衰竭等原因引发的胸腔积液；②合并肾、肝、心等脏器严重病变；③病历资料不完整，或中途退出研究。其中男43 例，女37 例；年龄46～75 岁，平均（55.72±2.16）岁；慢性阻塞性肺疾病21 例，肺炎25 例，支气管炎34 例。C 组男45 名，女35 名；年龄45～76 岁，平均（56.09±2.17）岁。二组一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。经患者及其家属知情同意并签署同意书，本研究经过安徽省阜阳市人民医院伦理委员会批准（FYAH-XXYK-38）。

1.2 研究方法

所有纳入研究者于清晨空腹采集外周静脉血3 ml，加入乙二胺四乙酸二钾2 ml 抗凝血对血浆进行分离，之后进行20 倍稀释；取样本、标准品50 μl 加入Hsp90α固相板，同时加入Hsp90α标志物液50 μl 进行振荡混合均匀，常温培育1 h；固相板每孔加入洗液300 μl，共洗板6 次，然后加入50 μl 显色剂振荡混合均匀，常温培育20 min；完成后加入终止液50 μl后测量；10 min 内于450 nm/620 nm 波长段下对数据进行读取，采用标准曲线计算血浆内Hsp90α含量。

1.3 观察指标

患者检测后，将Hsp90α 表达的中位数作为临界点，分为Hsp90α 高表组和Hsp90α 低表达组。通过QQ、微信、电子邮件、电话等方式随访2 年，了解患者病情以及预后生存情形。总生存期（overall survival，OS）：无肿瘤相关死亡期间；无复发生存期（recurrence free survival，RFS）：肿瘤无转移、复发期间。

1.4 统计学方法

采用SPSS 19.0 统计学软件进行数据分析。符合正态分布的计量资料以均数±标准差（）表示，比较采用t 检验。计数资料以例数或百分比表示，比较采用χ2检验。RFS、OS 生存曲线采用Kaplan-Meier 法分析，组间比较用log-rank 检验法。以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组外周血中肿瘤标志物Hsp90α 表达比较

三组外周血中肿瘤标志物Hsp90α 表达比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。其中A 组、B 组外周血中肿瘤标志物Hsp90α 表达高于C 组，A 组高于B 组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 三组外周血中肿瘤标志物Hsp90α 表达比较（ng/ml）

表1 三组外周血中肿瘤标志物Hsp90α 表达比较（ng/ml）

注 与C 组比较，aP＜0.05；与B 组比较，bP＜0.05。

2.2 肺癌恶性胸腔积液患者外周血中肿瘤标志物Hsp90α表达与病理特征的关系

不同年龄、性别、肿瘤直径、临床分期、淋巴结转移、病理分级及吸烟的肺癌恶性胸腔积液患者外周血中Hsp90α 表达水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

表2 肺癌恶性胸腔积液患者外周血中肿瘤标志物Hsp90α 表达与病理特征的关系（ng/ml，）

表2 肺癌恶性胸腔积液患者外周血中肿瘤标志物Hsp90α 表达与病理特征的关系（ng/ml，）

2.3 Hsp90α表达水平与肺癌合并恶性胸腔积液患者预后的关系

以Hsp90α 表达水平中位数为临界点将患者分为高表达组和低表达组，各40 例。Hsp90α 低表达组的中位RFS 为6.6 个月（95%CI：6.2～7.0），Hsp90α高表达组的中位RFS 为4.7 个月（95%CI：4.4～5.0），两组RFS 曲线比较，差异有统计学意义（log-rank χ2=8.963，P=0.003）。见图1A。Hsp90α低表达组的中位OS为15.5 个月（95%CI：13.0～18.0），Hsp90α高表达组的中位OS 为10.4 个月（95%CI：6.6～12.2），两组OS 曲线比较，差异有统计学意义（log-rank χ2=10.300，P=0.001）。见图1B。

图1 Hsp90α 表达水平与肺癌合并恶性胸腔积液患者预后的关系

3 讨论

近年来，我国肺癌的发生率和死亡率已经稳居恶性肿瘤榜首，有统计学研究显示，中国肺癌人数预计至2025 年将破百万[12-13]。由于肺癌早期临床症状不具有特异性而易与肺良性疾病相混淆出现误诊、漏诊，晚期肺癌患者5 年生存率一直在20%左右，严重影响患者生活质量，威胁患者生命安全[14]。然而，对于早期确诊并进行有效治疗的患者，其5 年生存率可达80%。因此，临床发现一种具有特异性且有效的诊断肺癌的方式对于改善预后、延长生存期具有重要意义。

血清癌胚抗原、糖类抗原153、糖类抗原125 等作为常用于辅助诊断肺癌的肿瘤检测标志物，其在早期检测肺癌时特异度和灵敏度均不甚理想[15]。Hsp90α是一种可存在于多种生物细胞中的具有分子伴侣功能的蛋白质，可参与相关蛋白的细胞内运输、装配、蛋白质降解、折叠等过程，其表达水平在机体受到缺氧、感染、分子损伤、辐射、癌变等应激时明显升高[16]。有研究结果指出，Hsp90α在乳腺癌、肝癌、胃癌等恶性肿瘤中均存在高表达，并且与肿瘤分期、分级及预后具有一定相关性[17-19]。也有研究结果表明，Hsp90α表达水平明显升高时提示患者肿瘤大小、病理分期、良恶性及是否发生远处转移[20-21]。

本研究中，通过对肺癌恶性胸腔积液患者外周血中肿瘤标志物Hsp90α表达水平检测发现，其水平与良性胸腔积液患者及健康体检者水平相比明显升高，提示其在肺癌恶性胸腔积液患者中表达水平显著升高，这可能是因为Hsp90α参与肿瘤多种蛋白的合成，与各信号蛋白结合，对肿瘤细胞生长进行保护和调控，最终促进肿瘤迅速发育、进展[22-23]。然而，本研究结果显示，Hsp90α表达水平与年龄、性别、肿瘤直径、临床分期、淋巴结转移、病理分级均无相关性，与上述研究结果存在一定差异性，分析原因可能是因为本研究纳入研究样本量较小。

同时，本研究通过分析Hsp90α表达水平与预后之间关系发现，Hsp90α高表达组的OS 和RFS 低于低表达组，这与相关研究结果一致[24-25]。提示Hsp90α 表达水平可影响患者生存时间，当高表达时有缩短生存时间的风险，因此，对Hsp90α表达水平的检测不仅可以作为诊断肺癌的有效肿瘤检测标志物，还能作为后续预测预后生存情况的重要指标。

综上所述，肺癌恶性胸腔积液患者外周血中肿瘤标志物Hsp90α 表达水平明显升高，且其水平与预后生存状况具有紧密相关性，可将其作为肺癌恶性胸腔积液患者诊断、预后的重要指标。

利益冲突声明：本文所有作者均声明不存在利益冲突。