大柴胡汤加味方对急性水肿型胰腺炎大鼠的治疗作用及炎症因子指标的影响※

贾晶晶，陈战，郭亚丽，陈玉珍

(1.山西省中医院，山西太原 030012；2.山西省中西医结合医院，山西太原 030012)

急性胰腺炎是常见的腹部急症之一，具有发病急、病情进展快及治疗费用高的特点，部分患者反复发作，给患者造成很大的困扰。根据其病理发展分为急性水肿型胰腺炎和出血坏死型胰腺炎，其中急性水肿型胰腺炎比较常见，其特点为胰腺出现肿胀、充血，胰腺周围积液，伴有局限性脂肪坏死，临床以上腹部疼痛、恶心呕吐、排气少、便秘等症状，实验室检查示血、尿淀粉酶水平升高等。随着人们生活水平的提高，不规律饮食情况普遍，如过食酒浆、肉食等，导致急性胰腺炎发病率逐年升高，高三酰甘油及酒精也成为急性胰腺炎发病的主要诱因。目前，临床治疗该病主要采用禁饮食、胃肠减压、抑制胰酶分泌、抗感染等常规疗法。中医特色疗法(中药灌肠、芒硝外敷等)对急性胰腺炎也有突出的治疗作用[1]。本研究观察大柴胡汤加味方治疗急性胰腺炎的作用机制，为该方的临床应用提供依据。

1 材料与仪器

1.1 动物 SD 雄性大鼠21只，体质量200～240g，购自中国食品药品检定研究院实验动物资源研究所(批号111251210100417652)。动物在温度(20±2)℃、湿度(43±5)%的环境下喂养，饲养于山西省中医院中心实验室动物房。

1.2 主要试剂及药物 雨蛙素购自索莱宝；二甲基亚砜购自北京博奥拓达科技有限公司；白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)试剂盒均购自伊莱瑞特生物试剂公司；大柴胡汤加味方组成药物[大黄10g(后下)，黄芩9g，清半夏9g，白芍12g，牡丹皮10g，柴胡12g，丹参9g，枳实9g，厚朴15g，败酱草9g，生姜6g]由山西省中医院提供，先将10味中药用300mL清水浸泡1h，加水300 mL 继续煎煮30 min后加入生大黄再煎5 min，将药液倒出，加水没过药渣约1cm继续煎煮30min，再次将药液倒出，将2次药液混匀，浓缩至110mL，制成1000g/L的药液。

1.3 主要仪器 万能显微镜荧光成像系统(OLYMPUS BX51，门季生物科技有限公司)；SpectraMax M2e多功能酶标仪[美谷分子仪器(上海)有限公司]；电热恒温鼓风干燥箱(上海跃进医疗器械厂)；摊片机(湖北泰康医疗设备有限公司)；染色机(赛默飞有限公司)。

2 方法

2.1 急性水肿型胰腺炎大鼠模型制备及分组 取雄性SD 大鼠21只，随机分为对照组、模型组及治疗组，每组7只。各组大鼠自由饮水条件下禁食12h后接受实验。用雨蛙素腹腔注射复制急性水肿型胰腺炎大鼠模型[2]。具体操作方法如下:将1 mg 雨蛙素用1mL二甲基亚砜溶解，于-20 ℃环境下保存，实验前取上述溶液用0.9%氯化钠溶液稀释成浓度2μg/mL溶液，操作时需放置于冰上保持温度，按20μg/kg给模型组及治疗组大鼠腹腔注射，每小时注射1次，连续注射4次。对照组腹腔注射同等剂量0.9%氯化钠溶液。治疗组及模型组在第1次注射前1h、注射后4h及处死前1h按10g/kg分别给予大柴胡汤加味方、0.9%氯化钠溶液灌胃，对照组大鼠按照上述时间给予同等次数和剂量的0.9%氯化钠溶液灌胃。于末次注射后3h用10%水合氯醛(按0.3mL/100g给药)麻醉大鼠，腹腔动脉穿刺取血4～5 mL，处死大鼠，取胰腺组织，血清标本放置1h，用离心机离心(转速3000r/min，离心半径200px)10min，取血清，并于-80 ℃低温冻存待测。

3 观察指标及统计学方法

3.1 观察指标 ①处死大鼠前观察模型组及治疗组大鼠的精神状态。②组织病理学改变。取3组大鼠胰腺组织，浸泡于10%中性甲醛液中固定，并进行脱水、包埋、切片、苏木精-伊红(HE)染色。光学显微镜下观察胰腺组织的病理改变，采用盲法由2位病理专业人员在光镜下阅片。③处死大鼠后取血清，采用酶联免疫吸附法检测血清淀粉酶(AMY)、脂肪酶(LPS)，采用半导体激光流式细胞技术检测全血白细胞(WBC)水平。以上指标均由山西省中医院检验科测定。④血清IL-6、TNF-α水平。采用酶联免疫吸附试验法检测。

3.2 统计学方法 采用SPSS26.0统计软件分析数据。计量资料以均数±标准差(±s)表示，多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD法。P＜0.05为差异有统计学意义。

3.3 结果

(1)大鼠精神状态 与对照组和治疗组比较，模型组大鼠外观观察可见精神萎靡、少动、蜷缩、呼吸急促，对外界反应迟钝。与模型组相比，治疗组大鼠精神状态好，自主活动正常，对外界反应灵敏，小便次数增多、色黄，未见排稀便。

(2)组织病理学结果 对照组大鼠胰腺组织结构清晰，胰腺腺泡细胞内无脂肪坏死、间质无水肿、无炎症细胞浸润，胰岛多为椭圆形，且形态完整。模型组大鼠胰腺叶、小叶间隔增宽，间质水肿明显，胰岛数量减少，可见少许脂肪坏死、少量炎症细胞。治疗组大鼠胰腺叶、小叶间隔扩张及间质水肿较模型组减轻，炎症细胞浸润不明显。见图1(见正文第125页)。

图1 3组大鼠胰腺组织显微镜组织病理学结果(×200)

(3)血清AMY、LPS及全血WBC 水平比较 模型组血清AMY、LPS 及全血WBC 水平均高于对照组，差异均有统计学意义(P＜0.05)。治疗组血清AMY、LPS及全血WBC水平均低于模型组、对照组，差异均有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

表1 3组大鼠血清淀粉酶、脂肪酶及全血白细胞水平比较(±s)

表1 3组大鼠血清淀粉酶、脂肪酶及全血白细胞水平比较(±s)

注:1.AMY，淀粉酶；LPS，脂肪酶；WBC，白细胞。2.与对照组比较，△P＜0.05；与模型组比较，▲P＜0.05。3.模型组、治疗组为急性水肿型胰腺炎大鼠。

组别 只数 AMY(U/L) LPS(U/L) WBC(×109/L)对照组 71377.5±56.45 9.11±3.38 7.49±0.85模型组 7 14098.24±525.09△13.07±0.51△治疗组 7 11121.44±987.98△▲723.70±43.73△629.50±22.71△▲10.99±0.62△▲

(4)血清IL-6、TNF-α水平比较 模型组血清IL-6、TNF-α水平均高于正常组，差异均有统计学意义(P＜0.05)。治疗组血清IL-6、TNF-α水平均低于模型组、对照组，差异均有统计学意义(P＜0.05)。见表2。

表2 3组大鼠血清白细胞介素-6、肿瘤坏死因子α水平比较(pg/mL,±s)

表2 3组大鼠血清白细胞介素-6、肿瘤坏死因子α水平比较(pg/mL,±s)

注:1.IL-6，白细胞介素-6；TNF-α，肿瘤坏死因子α。2.与对照组比较，△P＜0.05；与模型组比较，▲P＜0.05。3.模型组、治疗组为急性水肿型胰腺炎大鼠。

组别只数IL-6TNF-α对照组737.57±1.3060.78±4.20模型组751.73±2.60△88.14±2.98△治疗组742.88±1.18△▲74.8±5.23△▲

4 讨论

急性胰腺炎指因胰酶异常激活对胰腺自身及周围器官产生消化作用而引起的以胰腺局部炎性反应为主要特征，甚至可导致器官功能障碍的急腹症。本病的发病机制主要有胰酶激活、炎症介质活化、胰腺血液循环紊乱、肠道屏障、细胞凋亡等[3]。其中炎症介质在急性胰腺炎发生、发展中起到很大的作用，IL-6 主要是由单核巨噬细胞分泌的一种炎症介质，是参与炎症和免疫反应的一个非常重要的促炎因子，对调节急性胰腺炎的炎性反应起着重要的作用；TNF-α主要由单核巨噬细胞激活后分泌，可调节炎症、免疫反应，升高TNF浓度，引起胰腺腺泡细胞坏死，还可刺激其他细胞因子释放，引起炎症级联反应[4-5]。有报道称，IL-6、TNF-α在急性胰腺炎早期就明显升高，且与胰腺炎的严重程度相关[6-7]。促炎因子升高，会使血管壁受损、通透性增加，进而损伤机体的重要器官，导致全身炎性反应[8]。故TNF-α、IL-6水平对急性胰腺炎的早期诊断及预后评估均有重要价值。现代医学治疗急性胰腺炎以内科常规疗法为主，主要采用胃肠减压、灌肠、抑制胰液分泌、抑制胰酶活性、营养支持、抗感染、镇痛、防治并发症等综合对症支持治疗[9]。基于本病治疗的复杂性，临床仍有待继续寻找治疗急性胰腺炎有效的治疗方法。

急性胰腺炎归属中医“胃心痛”“结胸”“脾心痛”“腹痛”等范畴。对于本病的病因，不同学者各抒己见，多有胆石、暴饮暴食、虫积、创伤和情志不舒等病史，多辨为里实热证[10]。病机演变是各种病因引起中焦气机不畅，脾胃升降失常，痰湿内停，郁久化热，湿热内结，久则血瘀，湿、热、浊、瘀胶结，阻滞胃肠，从而导致“腑气不通，不通则痛”[11-13]。其中，腑气不通为发病的关键。临床医家多采取通里攻下法治疗急性胰腺炎，常用方剂有大承气汤、大柴胡汤、大陷胸汤、清胰汤等，除了口服汤药外，还有中药灌肠、针刺、外敷等外治法[14]。本课题组在大柴胡汤基础上加牡丹皮、丹参、厚朴、败酱草，增加通腑泄热、化瘀解毒的功效。大柴胡汤出自《伤寒杂病论》，是治疗少阳阳明合病的方剂，原方组成为柴胡半斤，半夏半斤，大黄2两，黄芩、芍药各3两，枳实4枚，生姜5两，大枣12枚。方中，柴胡合黄芩可疏肝泻胆，清少阳经郁热；大黄、枳实、厚朴配伍，取小承气汤之意，可行气通腑，泻阳明里实；生姜伍半夏可和胃止呕，且生姜辛散上行，可牵制大黄峻下之力，进而和胃护胃。考虑热实内结，血脉不通，故加丹参、牡丹皮增强活血清热作用，且白芍合丹参、大枣可缓急止痛，配大黄以平胆逆之火。诸药合用，既可解肝胆之郁，又能通阳明之实。笔者在临床上多用该方治疗肝胆郁热、胃肠壅滞、气血运行不利所致急性、实性病证。研究表明，大柴胡汤能够抑制胃酸分泌，松弛Oddi括约肌张力，降低血脂水平，改善毛细血管渗透性，还能促进胃蠕动，减轻肠麻痹，减少IL-6、TNF-α的释放[15-17]。柴胡、败酱草、黄芩、大黄具有明显的抗菌、抗炎作用[18]。

本研究结果表明，大柴胡汤加味方能明显降低急性水肿型胰腺炎大鼠血清TNF-α、IL-6 及全血WBC水平，从而减少胰腺局部炎性反应，降低血清AMY、LPS水平。通过光镜下观察大鼠胰腺组织病理，也证实大柴胡汤加味方对急性水肿型胰腺炎大鼠具有明显的治疗作用，其作用机制主要与减少早期炎症介质释放、促进细菌和毒物排泄有关。段会强等[19]认为大柴胡汤能够改善急性胰腺炎患者的凝血状态，减少肠道细菌移位，降低炎症因子的表达。

本课题组从炎症介质着手，论证大柴胡汤加味方治疗急性水肿型胰腺炎的作用机制，为临床应用大柴胡汤加味方提供了基础支持。在用药方面，在大柴胡汤基础上增加行气活血的药物，加强通腑活血的力度，使气行瘀通，可见大鼠胰腺相关指标及镜下组织病理学结果得到改善。本研究样本量小，大柴胡汤加味方的剂量为临床常用剂量换算所得，尚未进行大柴胡汤加味方更大剂量的实验研究，后续研究将进一步完善实验方案，以明确大柴胡汤加味方治疗急性水肿型胰腺炎的最佳剂量。