饲粮中添加博落回散对泰和乌骨鸡生长性能、血清生化指标、肠道形态和组织残留的影响

李嘉鸣， 刘梦婷， 董 朕， 刘 华， 邹湘霖，杨子辉， 陈 杰， 曾建国 ， 张明军

（1.湖南农业大学动物医学院，湖南 长沙 410128；2.湖南农业大学中兽药湖南省重点实验室，湖南 长沙 410128；3.湖南农业大学动物科学技术学院，湖南 长沙 410128；4.广州市翔丰养殖有限公司，广东 广州 510800）

饲用促生长抗生素（AGPs）的大量使用导致细菌耐药性增加， 动物肠道和组织以及环境中的抗生素残留对细菌交叉耐药、 食品安全和生态环境产生潜在风险（Aarestrup，2012）。由于细菌耐药性、食品安全以及公共健康安全隐患，自2006 年起， 许多国家和地区相继禁止或限制了在饲料中使用AGPs， 我国也于2020 年7 月1 日起实施全面禁用饲用促生长抗生素政策（Coope，2022）。 因此，动物生产领域迫切需要安全、有效的AGPs 替代品。 博落回提取物（MCE）是从博落回果荚中提取的苯并菲啶类生物碱， 其有效成分为血根碱和白屈菜红碱，二者总量不少于60%，血根碱含量不少于40%（Yang，2016）。2011 年，博落回提取物及其制剂博落回散被注册批准为国家二类新兽药，具有抗菌消炎、开胃、促生长功能，可用于促进猪、鸡、肉鸭、淡水鱼类，虾、蟹和龟、鳖生长。 作为我国首个“可在饲料中长期添加的”中兽药，博落回散在猪、鸡、水产等经济动物中表现出良好促生长效果（Wang，2022；Manaa，2022；Chen，2018），并具有改善动物肠道健康、减少氧化应激损伤、增强先天免疫和抗病能力的作用（Dong，2022）。 Huang等（2018）在白羽肉鸡饲粮中添加150 mg/kg 博落回散（血根碱含量1.5%）显著提高了肉鸡采食量，显著降低了肉鸡饲养全期的料重比。 Khadem 等（2014）研究发现，博落回散（血根碱含量1.5%）具有抗炎活性，能够促进肉鸡生长。 Xue 等（2017）报道，150 mg/kg 博落回散（血根碱含量约为1.5%）能够减轻产气荚膜梭菌攻毒肉鸡十二指肠、空肠和回肠的病变。 Lee 等（2015）发现，在饲喂肉鸡的饲粮中添加50 mg/kg 博落回散（血根碱含量1.5%）可以改善雄性肉鸡肠道吸收水分和营养物质的功能，显著提高蛋白质和氨基酸等有机物的消化率。 因此，肉鸡上的研究表明饲粮中添加博落回散可提高肉鸡生长性能，降低肠道炎症，改善肠道健康。

泰和乌骨鸡是我国的特有珍禽，营养价值高，因兼备食药两用、观赏价值而备受关注。目前，博落回散在肉鸡上的研究较多， 鲜有其应用于泰和乌骨鸡的相关报道。 本试验以泰和乌骨鸡为试验动物， 评估饲料添加博落回散对泰和乌骨鸡生长性能、屠宰性能、器官指数、血清生化指标、肠道形态的影响以及血根碱和白屈菜红碱在组织的残留情况， 为博落回散在泰和乌骨鸡健康养殖中的应用提供研究基础。

1 材料与方法

1.1 试验材料 博落回散（规格：100 g：0.375 g），血根碱和白屈菜红碱之和不低于0.225%，其中血根碱≥0.15%。

1.2 试验设计 选取健康状况良好、 体重相近[（30.0±0.1）g]的1 日龄泰和乌骨鸡200 只，随机分为对照组（饲喂不含抗生素的基础饲粮）和博落回散组（添加500 mg/kg 博落回散的饲粮），每组10 个重复，每个重复10 只鸡（公母各半）。 基础饲粮参照鸡饲养标准（NY/T 33-2004）和其他文献设计（曾杰，2019；许兰娇，2014；黎观红，2011）配制，满足泰和乌骨鸡营养需要， 基础饲粮组成及营养水平见表1。

表1 基础饲粮组成及营养水平（风干基础）

1.3 饲养管理 试验在广东省广州市翔丰养殖有限公司花都养殖场进行， 整个饲养试验为期56 d，其中1 ～28 d 为试验前期，29 ～56 d 为试验后期。 采用地面笼养方式饲养，免疫、消毒、光照、通风等均按常规程序进行，试验期间自由采食和饮水。

1.4 测定指标与方法

1.4.1 生长性能和屠宰性能 在试验开始时，称取所有试验鸡的初始重量。试验结束后，所有试验鸡在禁食12 h 后，称取试验鸡的末重、屠体重、全净膛重。 记录试验期间采食量， 计算平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）和料重比（F/G）。

屠体重：放尽血液后拔去全身羽毛后的重量，用湿拔法要沥干全部水分后称重。

全净膛重：半净膛重去心、肝、腺胃、肌胃、脂肪及头、脚的重量。

1.4.2 器官指数 试验结束称重后， 从两组中分别随机选取6 只泰和乌骨鸡颈静脉放血屠宰后剖解，分离出心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏等器官，用滤纸擦去血迹，去除内容物和附着脂肪后称重，计算器官指数。

器官指数=器官重量/活体重。

1.4.3 血清生化 试验结束时，分别从两组中随机选取12 只健康试验鸡，翅下静脉采血，静置2 h后离心获得血清，于-80 ℃保存，以待血清生化指标的测定。采用全自动生化分析仪（迈瑞BS-420，深圳迈瑞生物电子股份有限公司，中国深圳）对总蛋白（TP）、葡萄糖（GLU）、白蛋白（ALB）、尿素氮（BUN）、 尿酸 （UA）、 肌酐 （Crea）、 总胆固醇（TCHO）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDLC）、低密度脂蛋白（LDLC）、谷丙转氨酶（ALT）、乳酸脱氢酶（LDH）、谷草转氨酶（AST）和α-羟丁酸脱氢酶（α-HBDB）进行检测。

1.4.4 肠道形态 取十二指肠、 空肠和回肠段中部约1.5 cm 于10%中性福尔马林溶液中固定，经常规石蜡切片制作，HE 染色后于光学显微镜下观察， 使用图像分析系统测量肠段绒毛高度（VH）、隐窝深度（CD），计算绒毛高度/隐窝深度比值（绒隐比，VH/CD）。

1.4.5 血根碱和白屈菜红碱在组织中的残留 试验结束后1 d， 两组随机选取6 只试验鸡放血屠宰，采集心脏、肝脏、脾脏、肾脏、胸肌、腿肌、皮肤组织、腹部和皮下脂肪，擦去血迹后剪碎，-80 ℃保存，待测。试验鸡组织中血根碱和白屈菜红碱的残留量参照刘梦婷（2022）的方法进行检测。

1.5 统计方法 试验数据先用Excel 进行汇总整理， 再采用SPSS 19.0 统计软件对试验数据进行Shapiro-Wilk 正态性检验， 然后使用独立样本T检验对数据进行分析， 数据均以 “平均值±标准差”表示，P＜0.05 代表差异显著。

2 结果

2.1 饲粮中添加博落回散对泰和乌骨鸡生长性能和屠宰性能的影响 由表2 可知， 相比于对照组， 博落回散组泰和乌骨鸡的末重增加了6.00%（P＜0.05），平均日增重增加了9.72%（P＜0.05），料肉比显著降低5.29%（P＜0.05）。表现出博落回散对泰和乌骨鸡生长性能的积极影响。 博落回散组泰和乌骨鸡的屠宰率和全净膛率高于对照组，但差异均不显著（P＞0.05）。

表2 博落回散对泰和乌骨鸡生长性能和屠宰性能的影响

2.2 饲粮中添加博落回散对泰和乌骨鸡器官指数的影响 由表3 可知， 博落回散组和对照组间泰和乌骨鸡的心脏、肝脏、脾脏、肾脏、肺脏和小肠指数差异不显著， 表明饲粮中添加博落回散对泰和乌骨鸡器官指数无明显影响（P＞0.05）。

表3 博落回散对泰和乌骨鸡器官指数的影响

2.3 饲粮中添加博落回散对泰和乌骨鸡血清生化指标的影响 由表4 可知， 饲粮中添加博落回散后泰和乌骨鸡血清BUN 水平显著降低22.06%（P＜0.05）， 但对ALT、LDH、α-HBDB、TP、ALB、GLU、TG、TCHO、HDLC、LDLC 和Crea 无显著影响（P＞0.05）。

表4 博落回散对泰和乌骨鸡血清生化的影响

2.4 饲粮中添加博落回散对泰和乌骨鸡肠道形态的影响 泰和乌骨鸡十二指肠、空肠、回肠组织切片见图1。 与对照组相比，博落回散组的十二指肠绒毛更加细长，绒毛间距更加明显；对照组和博落回散组的空肠和回肠组织形态没有明显差异。由表5 可知， 博落回散组的十二指肠VH 略高于对照组、CD 略低于对照组，VH/CD 显著增大20.41%（P＜0.05）； 各组空肠和回肠的VH、CD、VH/CD 差异均无统计学意义（P＞0.05）。

图1 博落回散对泰和乌骨鸡肠道形态结构的影响

表5 博落回散对泰和乌骨鸡肠道形态指数的影响

2.5 博落回散效用成分血根碱和白屈菜红碱在泰和乌骨鸡组织中的残留 泰和乌骨鸡的心脏、肝脏、肾脏、胸肌、腿肌、皮肤、脂肪（腹部及皮下）组织样品经UPLC-MS/MS 检测，对照组和博落回散组的中血根碱和白屈菜红碱均未检测到或残留量低于定量限2 μg/L 和0.5 μg/L。

3 讨论与分析

3.1 博落回散对泰和乌骨鸡生长性能和屠宰性能的影响 生长性能是衡量动物生长状况最直观的指标，提高乌骨鸡生长性能可以增加行业经济效益。 研究表明，博落回散对多种经济动物具有促生长作用（Wang，2022；Manaa，2022；Liu，2020；Chen，2018）。 Liu 等（2020）研究发现，饲粮中添加0.7 mg/kg 血根碱（相当于450 mg/kg 博落回散）可以显著提高黄羽肉鸡的平均日增重。 李鹏等（2022）在雪峰乌骨鸡上的研究结果显示，饲粮中添加166 mg/kg 博落回提取物 （血根碱质量含量0.375%）显著提高了肉鸡的日增重和末重。 此外，博落回散作为可长期添加的中兽药， 可缓解热应激对动物的不利影响，Wang 等（2022）验证发现，在饲粮中添加1000 mg/kg 博落回散（血根碱含量为0.015%）显著提高了热应激肉鸡的日增重和日采食量，改善了热应激肉鸡的生长性能。本试验结果发现， 饲粮中添加博落回散显著提高了泰和乌骨鸡的平均日增重，并显著降低了料重比。研究显示，肠道微生物，如粪肠球菌、乳酸杆菌等，可通过芳香族氨基酸脱羧酶 （AADC） 将芳香族氨基酸（AAC）催化成芳香族胺。 而血根碱是一种AADC抑制剂， 可以抑制肠道内AADC 活性（Drsata，1996），这种抑制作用是因为血根碱的分子结构与芳香氨基酸分子结构相似， 可竞争性地与AADC结合，防止AAC 的降解，增加AAC 的利用率，从而改善生长性能（Bavarsadi，2021）。

屠宰性能是衡量畜禽屠体品质以及经济价值的重要指标，一般认为屠宰率在80%以上，全净膛率在60%以上，肉鸡的产肉性能良好（邹剑敏，2017）。 侯振东（2015）在乳鸽上的研究发现，30 ～50 mg/kg 博落回散（血根碱含量为1.5%）对屠宰率、全净膛率影响均差异不明显。关于博落回对畜禽屠宰性能的研究鲜少报道。本试验中，饲粮补充博落回散对泰和乌骨鸡的屠宰率和全净膛率均无显著影响， 说明博落回散对泰和乌骨鸡的的屠宰性能影响不大。

3.2 博落回散对泰和乌骨鸡器官指数和血清生化的影响 器官指数为动物器官重量与屠宰前的活体体重的比值， 健康及生长良好的内脏器官是畜禽生长的基础。本试验结果发现，饲粮添加博落回散对泰和乌骨鸡的心脏、肝脏、肾脏、脾脏、肺脏指数及小肠指数无明显影响。 反映了饲粮长期添加博落回散对泰和乌骨鸡的内脏不会造成肿胀或萎缩， 说明500 mg/kg 博落回散对泰和乌骨鸡脏器无不良影响。

血清生化指标是反映机体生理状态的重要指标， 与机体营养物质消化代谢密切相关（Xie，2020）。 本试验中，饲粮添加博落回散降低了泰和乌骨鸡血清BUN 含量，但是禽类的泌尿系统以尿酸的形式排出氮（计成，2006），尽管BUN 结果差异显著，但是意义不大。另外，本试验结果显示，饲粮添加博落回散对泰和乌骨鸡血清ALT 和AST指标无明显影响，血清ALT 和AST 在肝脏细胞内储存较多，若肝脏细胞受损，细胞膜通透性增加导致ALT 和AST 释放进入血液循环，因此常用作肝脏健康评价的指标（Perrone，1992），表明长期添加博落回散对泰和乌骨鸡的肝脏无负面影响。

3.3 博落回散对泰和乌骨鸡肠道形态的影响动物生产的本质是以动物为“生物反应器”将劣质原料转换成优质蛋白质食品的过程， 其中肠道是主要营养转换器官， 承载着饲粮中养分消化吸收转运代谢的重要功能，因此，肠道健康是饲料转换效率和动物生产性能的保障。 小肠是机体分泌消化酶与吸收营养物质的主要部位， 是衡量动物肠道健康的重要标志， 而小肠黏膜形态结构与肠道的消化吸收功能或机体的生长性能密切相关（Huycke，2018）。 小肠发育程度与营养物质的消化吸收呈正相关， 小肠的VH 和CD 是衡量肠道消化吸收功能的重要指标（郭航，2008）。 VH 指数升高，表示吸收养分的肠道表面积增大；CD 指数越低， 代表成熟的上皮细胞越多， 分泌功能越强（戴必胜，2007）。 VH/CD 指数综合反映小肠肠道黏膜结构情况， 数值增大， 消化吸收功能增强（Ewtushik，2000）。 本试验结果显示，博落回散组的十二指肠VH/CD 显著提高。 试验表明，博落回对肠道健康具有积极影响（Yakhkeshi，2011）。Guo等（2021）研究表明，饲粮中添加200 mg/kg 博落回提取物（血根碱含量40%）提高了雪峰乌骨鸡的VH/CD。Liu 等（2020）研究表明，饲粮中添加血根碱 （0.7 mg/kg 饲料） 提高了肉鸡的十二指肠VH/CD。 表明博落回可以提高动物肠道VH/CD，饲粮中添加博落回散对泰和乌骨鸡的小肠形态有积极的影响，可以改善十二指肠黏膜形态结构，有效促进肠道营养物质的消化吸收，促进肠道健康，从而提高其生产性能。 博落回散改善动物肠道健康的机制可能是：（1）血根碱和白屈菜红碱可以作用于肠道组织黏膜，修复、改善黏膜屏障功能（Liu，2016）；（2）调控肠道微生物菌群，抑制大肠杆菌繁殖（Chen，2018）；（3）促进肠上皮细胞的增殖、分化和更新（杨凡，2023）；（4）提高饲粮养分消化率（Goodarzi Boroojeni，2018），从而增强小肠消化吸收来提高机体对营养物质的吸收。

3.4 博落回散活性成分血根碱和白屈菜红碱在泰和乌骨鸡各组织中的残留 基于药物使用规范和食品安全保障的考量， 长期添加的中兽药产品应该提供动物源食品组织的残留数据， 为食品源动物的安全性制定指导原则提供科学支撑。 本试验中， 饲粮添加500 mg/kg 博落回散饲喂泰和乌骨鸡56 d 后，心脏、腿肌、皮肤等食用组织未检测到血根碱和白屈菜红碱残留， 说明博落回散具有很好的食品安全性，适用于经济动物长期添加。岳龙（2015）等测定不同添加剂量（40 mg/kg 和80 mg/kg）血根碱（含量为1.5%）在三黄鸡和攸县麻鸭中残留量，肾脏、肌肉及肝脏均低于5 ng/g。 杨娟（2015）对1 周龄肉鸡饲喂添加了30 mg/kg 博落回散（血根碱和白屈菜红碱含量为2.25%，其中血根碱1.5%）饲料100 d，停药5 d 后，心脏、脾脏、肾脏检测到血根碱，其中肾脏中残留量最大值为（1.34±0.16）ng/g，7 d 后无残留量。 血根碱和白屈菜红碱主要保留在胃肠道中， 从胃肠道吸收的一部分在肝脏中代谢并在粪便和尿液中消除。 本试验评估博落回散在泰和乌骨鸡组织中的残留，试验结果与之前在其他动物（Lu，2017；Ray，2014）残留结果一致，即饲粮长期添加500 mg/kg博落回散在泰和乌骨鸡各器官和组织中无血根碱和白屈菜红碱的残留。因此，饲粮中长期添加博落回散饲喂泰和乌骨鸡在肌肉和内脏等组织无残留，不会构成食品安全问题。

4 结论

在基础饲粮中添加500 mg/kg 博落回散对泰和乌骨鸡的屠宰率和器官指数没有显著影响，但可以提高泰和乌骨鸡的平均日增重和十二指肠的绒隐比以及降低料重比和血清尿素氮的浓度。 此外，博落回散在鸡肉和内脏等组织中无残留，不具有食品安全风险。