慢性萎缩性胃炎患者血清ADAM17和CXCL16表达水平与临床价值研究

张鹏飞，杨小飞，许怀利，张 萌（陕西中医药大学附属西电集团医院消化内科，西安 710077）

慢性萎缩性胃炎(chronic atrophic gastritis，CAG)是胃癌的癌前病变，可逐渐发展为胃癌，临床上约80%的胃癌患者伴有CAG[1]。早期诊断和治疗CAG 对于胃癌的防治具有重要意义。胃镜下活检是临床上确诊CAG 的金标准，但由于胃镜操作的侵入性，给患者造成一定的痛苦，且难以对患者病情进行动态监测[2]。深入研究CAG 的致病机制，寻找能够早期诊断CAG 的血清标志物，具有重要意义。解整合素样金属蛋白酶17(adisintegrin and metalloproteases 17，ADAM17)是一种膜锚定蛋白，参与细胞-细胞和细胞-基质相互作用，在受精、肌肉发育和神经发生等多种生物学过程中发挥重要作用[3]。研究发现，ADAM17 能够通过激活表皮生长因子受体，促进胃黏膜过度增殖及炎症性改变，导致肠上皮化生及胃黏膜萎缩[4]。C-X-C趋化因子配体16（C-X-C chemokine ligand 16，CXCL16）是一种CXC 型趋化因子，参与调节细胞增殖、γ 干扰素应答等多种生物学过程[5-6]。研究表明，CXCL16 能够结合淋巴细胞、自然杀伤细胞等免疫细胞表面的相应受体，促进免疫细胞趋化至炎症部位，加重炎症反应[7]。目前CAG 患者血清ADAM17，CXCL16 表达及临床意义尚不清楚。本研究旨在研究CAG 患者血清ADAM17 和CXCL16表达水平及对CAG 的诊断价值。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选取2018年1月～2020年1月陕西中医药大学附属西电集团医院因腹部不适等症状收治的174 例患者，根据病理活检结果分为CAG组（n=94）和非CAG 组（n=80）。纳入标准：①CAG 经胃镜下活检确诊，同时符合《慢性萎缩性胃炎中西医结合诊疗共识意见（2017年）》[1]；②临床资料完整；③患者对本研究知情同意，并签署同意书。排除标准：①有胃部手术史；②近一个月接受益生菌、抗幽门螺旋杆菌（Helicobacter pylori，Hp）、抗生素、抑酸药及胃黏膜保护剂等药物治疗；③并发凝血功能障碍；④并发肝肾等重要脏器功能障碍；⑤并发胃癌或其它恶性肿瘤；⑥妊娠期或哺乳期妇女。CAG 组男性50 例，女性44例；年龄35～73（42.41±3.91）岁；体质量指数（body mass index,BMI）17.87～23.15（20.45±1.21）kg/m2。 非CAG 组男性45 例， 女性35 例；年龄37～76（43.11±4.21） 岁； BMI 18.17～23.64（20.35±1.17）kg/m2。选取同期在我院健康体检的50 例健康人为对照组，男性26 例，女性24 例；年龄35～77（43.09±4.26）岁；BMI 18.50～23.68（20.23±1.14）kg/m2。三组在性别、年龄及BMI之间比较，差异无统计学意义（F/χ2=0.268，0.820，0.704，均P＞0.05）。本研究经本院医学伦理委员会审批同意。

1.2 仪器与试剂 ADAM17 ELISA 试剂盒（上海抚生实业公司，货号A102358），CXCL16 ELISA试剂盒（上海臻科生物公司，货号ZK-1787），ST-36W 型酶标仪（上海科华生物公司）。

1.3 方法

1.3.1 CAG 病情程度评估：所有CAG 患者均于胃镜直视下，在胃窦处采集组织标本，常规HE 染色，显微镜下观察并对CAG病情程度进行评估[1]。其中，轻度CAG：慢性炎细胞局限于黏膜浅层，不超过黏膜层1/3；胃固有腺体减少不超过1/3；肠上皮化生区不超过腺体和表面上皮的1/3。中度CAG：慢性炎细胞较为密集，未超过黏膜层2/3；胃固有腺体减少在1/3 至2/3 之间；肠上皮化生区面积介于1/3 至2/3 之间。重度CAG：慢性炎细胞占据黏膜全层；胃固有腺体减少超过2/3 甚至完全消失；肠上皮化生区超过腺体和表面上皮的2/3。根据胃萎缩分期分级标准分为轻度组（n=27），中度组（n=30）和重度组（n=37）。

1.3.2 血清ADAM17，CXCL16 检测：所有研究对象入院24h 内，抽取空腹静脉血5ml，3 500 r/min离心10min，取上层血清。采用酶联免疫吸附法检测血清ADAM17，CXCL16 水平，实验步骤按说明书进行。

1.4 统计学分析 采用软件SPSS 23.0 分析数据。计数资料以率(%)描述，组间比较用卡方检验。计量资料以均数±标准差（±s）描述，两组间比较用两独立样本t检验。三组间比较用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。多因素Logistic 回归分析CAG 发生的影响因素。各指标对CAG 的预测价值采用受试者工作特征曲线（receiver operating curve，ROC）。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组Hp 感染率及血清ADAM17，CXCL16 水平比较 见表1。CAG 组Hp 感染率高于非CAG组及对照组，差异有统计学意义（χ2=10.157，7.122，P=0.001，0.008）。CAG 组血清ADAM17，CXCL16 水平高于非CAG 组及对照组，差异有统计学意义（t=5.794，24.854；11.053，55.497，均P=0.000）。

表1 三组Hp 感染率及血清ADAM17，CXCL16 水平比较[±s，n(%)]

表1 三组Hp 感染率及血清ADAM17，CXCL16 水平比较[±s，n(%)]

项 目对照组（n=50）非CAG 组（n=80）CAG 组（n=94）F 或χ2P Hp 感染25（50.00）39(48.75)68（72.34）12.0580.002 ADAM17（ng/L）53.04±7.2073.94±8.2679.25±9.34159.5210.000 CXCL16（μg/L）1.02±0.354.03±0.54.66±0.58818.3320.000

2.2 不同病情程度CAG 患者血清ADAM17，CXCL16 水平比较 见表2。重度组CAG 患者血清ADAM17，CXCL16 水平高于轻、中度组CAG 患者，差异均有统计学意义（t=11.574，5.152；11.065，4.987，均P=0.000）。

表2 不同病情程度CAG 患者血清ADAM17，CXCL16 水平比较（±s）

表2 不同病情程度CAG 患者血清ADAM17，CXCL16 水平比较（±s）

项 目轻度组（n=27）中度组（n=30）重度组（n=37）FP ADAM17（ng/L）68.54±7.8979.12±9.5287.17±9.3033.4950.002 CXCL16（μg/L）4.02±0.634.65±0.575.14±0.51159.5210.000

2.3 影响CAG 发生的因素 见表3。以是否发生CAG 为因变量(否=0，是=1)，以Hp 感染、血清ADAM17，CXCL16 为自变量，多因素Logistic 回归分析显示，Hp 感染、血清ADAM17 及CXCL16是CAG 发生的独立危险因素。

表3 影响CAG 发生的多因素Logistic 回归分析

2.4 血清ADAM17，CXCL16 水平对CAG 诊断价值 见表4，图1。血清ADAM17，CXCL16联合诊断CAG 的曲线下面积（area under curve，AUC）大于单独诊断，差异有统计学意义(Z= 9.357，12.894，均P=0.000)。

图1 血清ADAM17，CXCL16 及联合检测对CAG 的诊断效能

表4 血清ADAM17，CXCL16 水平对CAG 诊断价值

3 讨论

慢性萎缩性胃炎（CAG）病程长，容易反复，难以彻底治愈且容易恶变，是消化系统疑难病症之一。CAG 的发病机制尚不清楚，目前认为Hp 感染是引起CAG 的主要原因[8]。Hp 感染定植于胃黏膜并产生毒素，宿主环境及细菌之间相互作用导致大量炎细胞浸润聚集，同时产生大量炎症介质，损伤胃黏膜，导致胃黏膜腺体破坏、萎缩，甚至癌变的发生[9]。本研究中，CAG 组患者Hp 感染的阳性率较高，这与杨小乔等[10]研究报道一致。CAG 的临床诊断需要通过胃镜及病理组织学检查确诊，但受到经济及侵入性操作等原因的限制，不能广泛用于CAG 的体检筛查。传统血清肿瘤标志物如癌胚抗原、糖类抗原19-9 等在CAG 诊断中的价值有限[11]。因此，寻找一种新的无创、准确、重复性好的非侵入性诊断CAG 的方法，并能够在治疗和预后评估中能够动态监测的血清生物标志物，具有重要临床意义。

解整合素样金属蛋白酶17(ADAM17)又称为肿瘤坏死因子α 转化酶，具有去整合素和金属蛋白酶的活性。研究发现，在胃癌等多种恶性肿瘤中表达升高，其能够通过降解细胞与细胞间及细胞与细胞外基质之间的连接，促进肿瘤细胞的侵袭和转移，导致肿瘤进展[12-13]。本研究中，CAG 组血清ADAM17 明显升高，提示ADAM17 参与促进CAG 疾病的发生。CAG 患者血清ADAM17 表达升高与Hp 感染有关，Hp 感染能够促进胃黏膜上皮细胞IL-8 的分泌产生，进而促进ADAM17 的表达，ADAM17 能够促进胃黏膜上皮细胞的顶端表面黏蛋白1 的N 端胞外结构域释放，促进胃黏膜炎症的发生[14]。此外，有研究表明，Hp 能够促进ADAM17 蛋白C 端T375 和S791 位点处的磷酸化，诱导胃黏膜上皮细胞中ADAM17 的表达及活化，诱导肝素结合表皮生长因子反式激活EGFR，促进CAG 的发生[15]。本研究中，CAG 组血清ADAM17水平与CAG 严重程度有关，提示ADAM17 参与促进CAG 疾病的发展过程。研究表明，胃黏膜上皮细胞分泌产生的ADAM17 能够诱导巨噬细胞向促炎表型极化（M1 型），分泌产生大量IL-6 和肿瘤坏死因子α，促进胃黏膜组织炎症及肠上皮化生的发生，加重CAG 的严重程度[16]。尚有研究发现，ADAM17 能够促进胃黏膜上皮细胞中转化生长因子α 的产生，通过结合表皮生长因子受体，激活磷脂酰肌醇3 激酶通路，加重胃黏膜组织炎症[4]。本研究中，血清ADAM17 升高是影响CAG 发生的独立危险因素，提示ADAM17 升高参与促进CAG 的发生，可能是潜在的CAG 治疗靶点。有学者利用帕尔马汀对CAG 进行治疗，发现其能够通过抑制ADAM17 及肝素结合表皮生长因子样生长因子的表达，抑制促炎细胞因子IL-8 及趋化因子CXCL-16的分泌，减轻CD8+T细胞的胃黏膜组织炎症浸润，增强宿主防御能力，抑制CAG 的疾病进展[4]。因此，ADAM17 表达升高参与促进CAG 疾病的发生发展，是潜在的CAG 治疗靶点，值得临床关注。

C-X-C 趋化因子配体16（CXCL16）基因定位于17 号染色体，包括跨膜型和分泌型两种类型，跨模型CXCL16 能够被膜整合素基质金属蛋白酶10 和ADAM17 降解为分泌型CXCL16，从而分泌到血清中被检测到[5,17]。研究表明，CXCL16 能够与CD4+T 淋巴细胞及浆细胞表面的受体CXCR6 结合，促进干扰素γ 等促炎细胞因子的分泌，导致组织中大量中性粒细胞浸润[18]。本研究中，CAG组血清CXCL16 水平升高，且CXCL16 水平与CAG 严重程度有关，提示CXCL16 参与促进CAG疾病的发生发展。分析其原因，CAG 中CXCL16的表达上调与Hp 感染有关。研究发现，Hp 能够诱导的胃黏膜上皮细胞通过细胞外信号调节激酶的活化，促进基质金属蛋白酶10 及CXCL16 的表达，CXCL16 通过招募并促进CD8+T 细胞侵袭和浸润，导致宿主防御能力受损和Hp 黏膜定植增加，加重CAG 的疾病严重程度[19]。此外，有学者报道胃黏膜肠上皮化生组织中B 细胞Aim2 缺乏，导致CXCL16 表达水平增加，胃黏膜中CD8+T 细胞的浸润和驻留增加，进一步加重肠上皮化生[20]。本研究中，血清CXCL16 升高是CAG 发生的独立危险因素，提示CXCL16 升高参与促进CAG 的发生，是潜在的评估CAG 发生的血清生物标志物。研究表明，胃黏膜组织中CXCL16 的表达升高促进CD8+T淋巴细胞的局部浸润，导致组织中CD4+T 细胞/CD8+T 淋巴细胞比值降低，加重胃黏膜局部组织炎症反应，促进CAG 的发生[20]。另外，CXCL16 还能够促进内皮细胞和巨噬细胞表达干扰素γ 等促炎细胞因子，加重胃黏膜组织炎症，局部免疫调节失衡，增加胃癌发生的风险[21]。

本研究中，血清ADAM17，CXCL16 联合检测对CAG 的发生具有较高的预测价值，预测的敏感度和特异度分别为0.902，0.755，提示血清ADAM17，CXCL16 联合可以有效评估CAG 的发生。临床医生可利用血清ADAM17，CXCL16 联合模型对患者CAG 的发生风险初步评估，对于高危患者予以积极治疗随访，以降低胃癌的发生，改善患者预后。本研究中，Hp 感染是影响CAG 发生的独立危险因素。分析其原因，Hp 作为一种定植于人胃黏膜上皮中的革兰氏阴性菌，其能够刺激机体产生多种炎性细胞因子，损伤胃黏膜和腺体，导致CAG 及胃癌的发生。

综上所述，CAG 患者血清ADAM17，CXCL16水平升高，血清ADAM17，CXCL16 水平与CAG疾病严重程度有关，是影响CAG 发生的独立危险因素。血清ADAM17，CXCL16 联合检测对CAG的发生具有较高的预测价值，可能有助于临床医生对CAG 进行早期诊断。但本研究也存在不足，目前ADAM17，CXCL16 表达对CAG 疾病的具体作用机制尚不清楚，有待今后进行深入的机制研究，为CAG 及胃癌防治提供理论依据。本研究为回顾性研究，样本量有限，有待今后设计多中心前瞻性大样本临床实验，进一步研究血清ADAM17，CXCL16 在预测CAG 发生中的临床价值。