窝儿七的化学成分研究

白红云，赵 晨，孙彦君,3*，弓建红，陈 辉，李 孟，冯卫生,3

1.河南中医药大学 呼吸疾病中医药防治省部共建协同创新中心, 河南 郑州 450046

2.河南中医药大学药学院, 河南 郑州 450046

3.河南省中药开发工程技术中心, 河南 郑州 450046

窝儿七为小檗科（Berberidaceae）多年生草本植物中华山荷叶DiphylleiasinensisLi.的干燥根及根茎[1]。主要分布于湖北、陕西、甘肃、四川和云南等省。味苦、辛，性平，有毒。具有祛风除湿、活血祛瘀、解毒等功效。主要用于治疗风湿痹痛、跌打损伤、月经不调、小腹疼痛、毒蛇咬伤、痈肿疮疔等症状[2]。化学成分研究表明，窝儿七中含有木脂素、黄酮、甾体、有机酸、糖等类型化合物。现代药理活性研究表明，窝儿七具有抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、抗菌、杀虫等[3]重要药理作用。本研究为阐明窝儿七药材的药效物质基础及其开发利用提供理论依据，对其进行了化学成分研究，并测试部分化合物对DPPH 自由基的清除能力。本课题组从窝儿七95%乙醇和50%乙醇提取物中共分离得到21 个化合物，分别鉴定为 [4,5-二羟基-2-(1-羟基乙基)苯基][(4-羟基)苯基]甲酮（[4,5-dihydroxy-2-(1-hydroxyethyl)phenyl][(4-hydroxy)phenyl]methanone，1）、(＋)-7′-甲氧基落叶松树脂醇[（＋）-7′-methoxylariciresinol，2]、7′R-羟基落叶松树脂醇（7′Rhydroxylariciresinol，3）、3-甲氧基槲皮素（3-methoxy-quercetin，4）、二氢槲皮素（dihydroquercetin，5）、二氢山柰酚（dihydrokaempferol，6）、山柰酚（kaempferol，7）、槲皮素（quercetin，8）、podoverine B（9）、大黄酚-1-O-β-D-葡萄糖苷（chrysophanol-1-O-β-D-glucopyranoside，10）、大黄酚-8-O-β-D- 葡萄糖苷（ chrysophanol-8-O-β-Dglucopyranoside，11）、尿嘧啶（uracil，12）、胸腺嘧啶核苷（thymidine，13）、uridine-5′α-hydroxypropanoate（14）、对甲氧基苯甲醛（p-anisaldehyde，15）、对羟基苯甲酸（p-hydroxybenzoic acid，16）、香草醛（vanillin，17）、3,4-二羟基苯甲酸（3,4-dihydroxybenzoic acid，18）、羟基酪醇（hydroxytyrosol，19）、3′,5′-二羟基苯基-4-羟基苯甲酸酯（3′,5′-dihydroxyphenyl-4-hydroxybenzoate，20）、5-羟甲基糠醛（5-hydromethyl furaldehyde，21）。其中化合物1 对DPPH 自由基具有较强的清除能力，半数抑制浓度（median inhibition concentration，IC50）为8.52 μmol/L，且强于阳性药物水溶性维生素E（trolox，14.95 μmol/L）。化合物4 对DPPH 自由基具有一定的清除能力，IC50值为22.69 μmol/L。

1 仪器与材料

Bruker AVANCE Ⅲ 500 型核磁共振仪（德国Bruker 公司）；Bruker maxis HD 型飞行时间质谱（德国Bruker 公司）；Thermo EVO 300 型紫外光谱仪（赛默飞世尔科技有限公司）；Thermo Nicolet IS 10 型红外光谱仪（赛默飞世尔科技有限公司）；制备型高效液相色谱仪（北京赛谱锐思科技有限公司）；N-1000 型旋转蒸发仪（上海爱朗仪器有限公司）；SHB-B95A 型循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；DFZ-3 型真空干燥箱（上海医用恒温设备厂）；大孔吸附树脂AB-8；薄层色谱硅胶GF254、柱色谱硅胶（200～300 目，青岛海洋化工有限公司）；Sephadex LH-20（Pharmacia Biotech 公司）；MCI Gel CHP-20（日本三菱化学）；YMC-Pack ODS-A 色谱柱（日本YMC 有限公司，250 mm×10 mm，5 μm）；甲醇（色谱纯，天津市四友精细化学品有限公司）；其他试剂均为分析级。

阳性对照药物trolox（货号238813，质量分数为98%，Sigma 公司）。窝儿七药材于2019 年7 月采集于四川省，经河南中医药大学药学院董诚明教授鉴定为山荷叶属植物中华山荷叶D.sinensisLi.的干燥根茎。凭证样品（DS 20190728）存放于河南中医药大学药学院标本室。

2 提取与分离

干燥的窝儿七根茎（40 kg），用95%乙醇、50%乙醇各回流提取3 次，每次2 h，浓缩得到浸膏（5.2 kg）。总提物用甲醇溶解，按1∶2 的比例分散在硅藻土中，经不同极性的有机溶剂洗脱，得二氯甲烷部位（1 942 g）、醋酸乙酯部位（690 g）、甲醇部位（1 808 g）。

甲醇部位（1 808 g）经硅胶柱色谱分离，依次用二氯甲烷-甲醇（100∶0、100∶1、100∶3、100∶5、100∶7、100∶10、100∶30、100∶50、0∶100）洗脱，得到Fr.M1～M7。Fr.M2（1.2 g）经Sephadex LH-20 柱色谱分离，甲醇洗脱，得到化合物7（50.6 mg）与8（60.3 mg）。Fr.M4（117.5 g）经Sephadex LH-20 柱色谱分离，甲醇洗脱，得到Fr.M4-1～M4-3。Fr.M4-2（39.2 g）经硅胶柱色谱分离，依次用二氯甲烷-甲醇（100∶1、50∶1、30∶1、20∶1、10∶1、3∶1）洗脱，得到Fr.M4-2-1～M4-2-3。Fr.M4-2-2（4.6 g）经半制备高效液相色谱，甲醇-水（53∶47，6 mL/min）洗脱，得到Fr.M4-2-2-1（1.8 g，tR＝8.8～10.3 min），再经半制备高效液相色谱，甲醇-水（15∶85，6 mL/min）洗脱，得到化合物21（6.5 mg，tR＝22.0 min）、14（5 mg，tR＝30.7 min）。Fr.M5（120.6 g）经AB-8 大孔吸附树脂，乙醇-水（0%、10%、30%、50%、60%、70%、90%）洗脱，得到Fr.M5-1～M5-4。Fr.M5-2（32.8 g）经MCI 柱色谱，甲醇-水（10%、30%、50%、70%）洗脱，得到Fr.M5-2-1～M5-2-3，Fr.M5-2-2（3.5 g）经半制备高效液相色谱，甲醇-水（50∶50，6 mL/min）洗脱，得到化合物2（30.0 mg，tR＝22.0 min）、3（5.0 mg，tR＝10.8 min）。Fr.M5-3（27.1 g）经Sephadex LH-20 柱色谱分离，甲醇洗脱，得到Fr.M5-3-1～M5-3-3。Fr.M5-3-2（3.9 g）经半制备高效液相色谱，甲醇-水（58∶42，6 mL/min）洗脱，得到化合物15（4.4 mg，tR＝19.9 min）。

醋酸乙酯部位（690 g），经硅胶柱色谱分离，依次用二氯甲烷-甲醇（100∶0、100∶1、100∶3、100∶5、100∶7、100∶10、100∶30、100∶50、100∶100）洗脱，得到Fr.E1～E5。Fr.E2（55.7 g）析出白色粉末，经反复重结晶，得到化合物17（10.0 mg）。Fr.E3（100.6 g）经ODS 柱色谱，甲醇-水（10%、30%、50%、70%）洗脱，得到 Fr.E3-1～E3-3。Fr.E3-1（42.9 g）经Sephadex LH-20 柱色谱分离，甲醇洗脱，得到Fr.E3-1-1～E3-1-3。Fr.E3-1-1（25.3 g）经硅胶柱色谱分离，依次石油醚-醋酸乙酯（100∶3、100∶5、100∶7、100∶10、100∶30、100∶50、100∶100、0∶100）洗脱，得到Fr.E3-1-1-1～E3-1-1-5。Fr.E3-1-1-3（4.9 g）经硅胶柱色谱分离，依次石油醚-醋酸乙酯（100∶3、100∶5、100∶7、100∶10、100∶30、100∶50、100∶100、0∶100）洗脱，得到 Fr.E3-1-1-3-1～E3-1-1-3-8，Fr.E3-1-1-3-2（1.2 g）经半制备高效液相色谱，甲醇-水（40∶60，6 mL/min）洗脱，得到化合物18（8 mg，tR＝12.9 min）、19（3 mg，tR＝12.4 min）；Fr.E3-1-1-3-5（0.5 g）中沉淀与母液分离，沉淀用甲醇反复洗涤，得到化合物12（5 mg）；Fr.E3-1-1-3-7（0.7 g）经半制备高效液相色谱，甲醇-水（10∶90，6 mL/min）洗脱，得到化合物13（5 mg，tR＝38.3 min）。Fr.E3-1-1-3-4（0.7 g）经半制备高效液相色谱，甲醇-水（30∶70，6 mL/min）洗脱，得到化合物1（5 mg，tR＝39.9 min）。Fr.E3-1-2（8.6 g）经硅胶柱色谱分离，依次用石油醚-醋酸乙酯（100∶3、100∶5、100∶7、100∶10、100∶30、100∶50、100∶100、0∶100）洗脱，得到Fr.E3-1-2-1～E3-1-2-6，Fr.E3-1-2-3（1.2 g）经半制备高效液相色谱，甲醇-水（66∶34，3 mL/min）洗脱，得到化合物5（3 mg，tR＝10.7 min）、20（3 mg，tR＝11.2 min）、6（2.8 mg，tR＝12.1 min）。组分Fr.E3-2（25.3 g）经Sephadex LH-20 柱分离，甲醇洗脱，得到Fr.E3-2-1～E3-2-3，Fr.E3-2-2（1.8 g）经半制备高效液相色谱，甲醇-水（45∶55，3 mL/min）洗脱，得到化合物16（10 mg，tR＝15.8 min）。组分Fr.E3-3（24.0 g）经硅胶柱色谱分离，依次用石油醚-醋酸乙酯（100∶3、100∶5、100∶7、100∶10、100∶30、100∶50、100∶100），得到Fr.E3-3-1～E3-3-7。Fr.E3-3-4（5.5 g）经Sephadex LH-20 柱色谱分离，甲醇洗脱，得到Fr.E3-3-4-1～E3-3-4-6。Fr.E3-3-4-2（1.7 g）经半制备高效液相色谱，甲醇-水（70∶30，6 mL/min）洗脱，得到化合物9（6 mg，tR＝21.8 min）。Fr.E3-3-4-6（0.8 g）经半制备高效液相色谱，甲醇-水（70∶30，6 mL/min）洗脱，得到化合物4（3.5 mg，tR＝28.7 min）。Fr.E3-3-5（2.8 g）经Sephadex LH-20 柱色谱分离，甲醇洗脱，得到Fr.E3-3-5-1～E3-3-5-7。Fr.E3-3-5-3（95.8 mg）经半制备高效液相色谱，甲醇-水（62∶38，3 mL/min）洗脱，得到化合物10（3.0 mg，tR＝16.4 min）、11（3.2 mg，tR＝17.5 min）。

3 结构鉴定

化合物1：棕红色粉末。UV 显示最大吸收波长为194、202、286 nm。IR 光谱显示有羟基（3 264 cm−1）、羰基（1 639 cm−1）和苯环（1 589, 1 513 cm−1）的吸收。HR-ESI-MS 谱给出准分子离子峰m/z275.091 8 [M＋H]+,（计算值为275.091 9），确定化合物1 的分子式为C15H14O5。1H-NMR 谱中（表1），显示6 个芳氢信号 [δH7.57 (2H, d,J= 8.8 Hz, H-2′,H-6′), 6.84 (2H, d,J= 8.8 Hz, H-3′, H-5′), 6.72 (1H, s,H-6), 6.63 (1H, s, H-3)]，2 个亚甲基（包括1 个氧代亚甲基）[δH2.60 (2H, t,J= 7.3 Hz, H-7), 3.41 (2H, t,J= 7.3 Hz, H-8)]。13C-NMR 和HSQC 谱显示15 个碳信号，包括1 个酮羰基δC195.5 (C-7′)，12 个芳香碳，2 个亚甲基碳信号（包括1 个氧代亚甲基）[δC35.9 (C-7), 62.5 (C-8)]。1H-1H COSY 谱中（图1），显示δH2.60 (H-7) 和δH3.41 (H-8) 相关，说明H-7与H-8 相连。δH7.57 (H-2′, 6′) 和δH6.84 (H-3′, 5′)相关，说明化合物1 的结构中存在对二取代苯环。HMBC 谱中（图1），由亚甲基δH2.60 (H-7) 与δC129.7 (C-1), 129.8 (C-2), 118.0 (C-6) 的远程相关，结合芳氢信号δH6.72 (H-6), 6.63 (H-3) 与C-1、C-2 以及与2 个邻位含氧芳香碳δC142.4 (C-4), 147.0 (C-5)的远程相关，表明化合物1 含有4,5-二羟基-2-(1-羟基乙基)苯基结构片段。由对二取代苯环上氢信号δH7.57 (H-2′, 6′)，4,5-二羟基-2-(1-羟基乙基)苯基上芳香氢信号6.63 (H-3) 均与羰基碳信号δC195.5 (C-7′)的HMBC 相关，由此提示2 个结构片段通过酮羰基(C-7′) 连接。因此，化合物1 鉴定为 [4,5-二羟基-2-(1-羟基乙基)苯基][(4-羟基)苯基]甲酮，为1 个新化合物，命名为山荷叶甲酮A（diphymethanone A）。结构见图2。

图1 化合物1 和20 的关键1H-1H COSY () 和HMBC () 相关Fig.1 Key 1H-1H COSY () and HMBC ()correlations of compounds 1 and 20

图2 化合物1 和20 的结构Fig.2 Structures of compounds 1 and 20

表1 化合物1 和20 的核磁数据 (500/125 MHz)Table 1 NMR Spectroscopic data of compounds 1 and 20 (500/125 MHz)

化合物20：黄色油状物。UV 显示最大吸收波长为202、217、262 nm。IR 光谱显示有羟基（3 377 cm−1）、羰基（1 712 cm−1）和苯环（1 607, 1 514 cm−1）的吸收。HR-ESI-MS 谱给出准分子离子峰m/z269.041 8 [M＋Na]+,（计算值为269.042 6），确定化合物20 的分子式为C13H10O5。1H-NMR 谱中（表1），显示1 个二取代苯环 [δH7.99 (2H, d,J= 8.7 Hz,H-2, 6), 6.88 (2H, d,J= 8.7 Hz, H-3, 5)]，1 个三取代苯环 [δH6.12 (2H, d,J= 2.1 Hz, H-2′, 6′), 6.18 (1H,dd,J= 2.1, 2.1 Hz, H-4′)]。13C-NMR 和HSQC 谱显示13 个碳信号，包括1 个酯羰基δC166.6 (C-7)，12个芳香碳。1H-1H COSY 谱中（图1），显示δH7.99(H-2, H-6) 和δH6.88 (H-3, H-5) 相关，说明化合物20 的结构中存在对二取代苯环。HMBC 谱中（图1），由H-2, H-6 与C-7 的远程相关，以及H-3, H-5与δC164.2 (C-4) 的远程相关，与文献报道[4]中对羟基苯甲酸核磁数据对比基本一致，表明化合物20 含有对羟基苯甲酸结构片段。H-2′, H-4′以及H-6′的核磁数据与文献报道[5]中的间苯三酚5.67 (3H, s, H-2,4, 6) 比对，发现其化学位移明显增大，且δC101.6(C-2′, 6′) 为1 组化学等价芳环碳信号，证明δC154.0(C-1′) 上的OH 被取代。由此表明化合物含有3,5-二羟基-1-苯基结构片段，且2 个结构片段通过酯羰基 (C-7) 连接。故鉴定化合物 20 为 3′,5′-dihydroxyphenyl-4-hydroxybenzoate，为新天然产物。经查阅文献无核磁数据，首次对化合物20 的氢谱和碳谱数据进行归属。

化合物4：黄色油状物。ESI-MSm/z: 339 [M＋Na]+。1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ: 7.54 (1H, d,J= 2.2 Hz, H-2′), 7.44 (1H, dd,J= 8.5, 2.2 Hz, H-6′),6.90 (1H, d,J= 8.5 Hz, H-5′), 6.41 (1H, d,J= 2.0 Hz,H-8), 6.19 (1H, d,J= 2.0 Hz, H-6), 3.78 (3H, s, -OCH3)；13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6)δ: 177.9 (C-4), 164.1 (C-7), 161.3 (C-5), 156.3 (C-9), 155.6 (C-2),148.7 (C-4′), 145.2 (C-3′), 137.7 (C-3), 120.8 (C-1′),120.6 (C-6′), 115.7 (C-5′), 115.4 (C-2′), 104.2 (C-10),98.5 (C-6), 93.6 (C-8), 59.7 (-OCH3)。以上数据与文献报道一致[8]，故鉴定化合物4 为3-甲氧基槲皮素。

化合物5：淡黄色粉末。ESI-MSm/z: 327 [M＋Na]+。1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ: 6.96 (1H, d,J= 1.8 Hz, H-2′), 6.84 (1H, dd,J= 8.1, 1.8 Hz, H-6′),6.80 (1H, d,J= 8.1 Hz, H-5′), 5.92 (1H, d,J= 2.0 Hz,H-8), 5.88 (1H, d,J= 1.8 Hz, H-6), 4.91 (1H, d,J= 11.4 Hz, H-2), 4.49 (1H, d,J= 11.4 Hz, H-3)。以上数据与文献报道一致[9]，故鉴定化合物5 为二氢槲皮素。

化合物6：淡黄色粉末。ESI-MSm/z: 311 [M＋Na]+。1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ: 12.56 (1H, s,-OH), 7.31 (2H, d,J= 8.6 Hz, H-2′, 6′), 6.78 (2H, d,J= 8.6 Hz, H-3′, 5′), 5.91 (1H, d,J= 2.0 Hz, H-8), 5.85(1H, d,J= 2.0 Hz, H-6), 5.04 (1H, d,J= 11.4 Hz, H-2), 4.58 (1H, d,J= 11.4 Hz, H-3)。以上数据与文献报道一致[10]，故鉴定化合物6 为二氢山柰酚。

化合物7：黄色粉末。ESI-MSm/z: 309 [M＋Na]+。1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ: 8.03 (2H, d,J= 8.9 Hz, H-2′, 6′), 6.85 (2H, d,J= 8.9 Hz, H-3′, 5′),6.41 (1H, d,J= 2.0 Hz, H-8), 6.19 (1H, d,J= 2.0 Hz,H-6)。以上数据与文献报道一致[11]，故鉴定化合物7 为山柰酚。

化合物8：黄色粉末。ESI-MSm/z: 325 [M＋Na]+。1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ: 12.50 (1H, s,-OH), 7.65 (1H, s, H-2′), 7.50 (1H, d,J= 8.9 Hz, H-6′),6.83 (1H, d,J= 8.9 Hz, H-5′), 6.41 (1H, s, H-8), 6.20(1H, s, H-6)；13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6)δ: 176.2(C-4), 164.4 (C-7), 161.4 (C-5), 157.1 (C-9), 147.4 (C-4′), 146.8 (C-2), 144.9 (C-3′), 136.0 (C-3), 122.9 (C-1′),120.4 (C-6′), 114.9 (C-5′), 114.6 (C-2′), 103.3 (C-10),98.0 (C-6), 93.1 (C-8)。以上数据与文献报道一致[11]，故鉴定化合物8 为槲皮素。

化合物10：黄色粉末。ESI-MSm/z: 439 [M＋Na]+。1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ: 12.94 (1H, s,-OH), 7.75 (1H, t,J= 7.5 Hz, H-6), 7.72 (1H, s, H-4),7.66 (1H, dd,J= 7.5, 1.0 Hz, H-5), 7.54 (1H, s, H-2),7.36 (1H, dd,J= 7.5, 1.0 Hz, H-7), 5.17 (1H, d,J= 7.5 Hz, H-1′), 4.58～3.24 (6H, m, sugar-H), 2.48 (3H, s,-CH3)。13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6)δ: 187.7 (C-9), 182.2 (C-10), 161.4 (C-8), 158.4 (C-1), 147.4 (C-3),136.2 (C-6), 134.5 (C-4a), 132.5 (C-10a), 124.3 (C-7),122.7 (C-2), 121.3 (C-4), 118.3 (C-5, 9a), 116.8 (C-8a),100.5 (C-1′), 77.3 (C-5′), 76.6 (C-3′), 73.4 (C-2′), 69.6(C-4′), 60.6 (C-6′), 21.8 (-CH3)。以上数据与文献报道一致[13]，故鉴定化合物10 为大黄酚-1-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物11：黄色粉末。ESI-MSm/z: 439 [M＋Na]+。1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ: 12.88 (1H, s,-OH), 7.88 (1H, dd,J= 7.6, 2.6 Hz, H-5), 7.86 (1H, dd,J= 8.1, 7.6 Hz, H-6), 7.71 (1H, dd,J= 8.1, 2.6 Hz, H-7), 7.51 (1H, s, H-4), 7.21 (1H, s, H-2), 5.16 (1H, d,J= 7.6 Hz, H-1′), 3.72～3.22 (6H, m, sugar-H), 2.43(3H, s, -CH3)；13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6)δ:187.6 (C-9), 182.1 (C-10), 161.6 (C-1), 158.2 (C-8),147.7 (C-3), 136.0 (C-6), 134.8 (C-10a), 132.2 (C-4a),124.1 (C-2), 122.5 (C-7, 8a), 120.6 (C-5), 119.4 (C-4),114.8 (C-9a), 100.5 (C-1′), 77.3 (C-5′), 76.6 (C-3′), 73.3(C-2′), 69.5 (C-4′), 60.6 (C-6′), 21.5 (-CH3)。以上数据与文献报道一致[14]，故鉴定化合物11 为大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物12：黄色粉末。ESI-MSm/z: 135 [M＋Na]+。1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ: 11.0 (1H, s,H-3), 10.8 (1H, s, H-1), 7.38 (1H, d,J= 7.6 Hz, H-6),5.44 (1H, d,J= 7.6 Hz, H-5)；13C-NMR (125 MHz,DMSO-d6)δ: 164.4 (C-4), 151.6 (C-2), 142.2 (C-6),100.3 (C-5)。以上数据与文献报道一致[15]，故鉴定化合物12 为尿嘧啶。

化合物13：白色粉末。ESI-MSm/z: 265 [M＋Na]+。1H-NMR (500 MHz, CD3OD)δ: 7.82 (1H, s, H-4), 6.28 (1H, t,J= 6.8 Hz, H-1′), 4.40 (1H, m, H-3′),3.90 (1H, d,J= 3.3 Hz, H-4′), 3.80 (1H, dd,J=12.0,3.7 Hz, H-5′b), 3.73 (1H, dd,J=12.0, 3.7 Hz, H-5′a),2.22 (2H, m, H-2′), 1.94 (3H, s, -CH3)；13C-NMR (125 MHz, CD3OD)δ: 166.4 (C-2), 152.4 (C-6), 138.2 (C-4), 111.5 (C-3), 88.8 (C-4′), 86.2 (C-1′), 72.2 (C-3′),62.8 (C-5′), 41.2 (C-2′), 12.4 (-CH3)。以上数据与文献报道一致[16]，故鉴定化合物13 为胸腺嘧啶核苷。

化合物15：白色粉末。ESI-MSm/z: 159 [M＋Na]+。1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ: 9.76 (1H, s,CHO), 7.72 (2H, d,J= 8.7 Hz, H-3, 5), 6.82 (2H, d,J= 8.7 Hz, H-2, 6′), 2.62 (3H, s, -OCH3)；13C-NMR(125 MHz, DMSO-d6)δ: 191.2 (C-7), 166.9 (C-1),133.0 (C-3, 5), 129.9 (C-4), 114.9 (C-6, 2), 55.6 (-OCH3)。以上数据与文献报道一致[18]，故鉴定化合物15 为对甲氧基苯甲醛。

化合物16：白色晶体（甲醇）。mp 213.4～215.2 ℃，ESI-MSm/z: 161 [M＋Na]+。1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ: 7.88 (2H, d,J= 8.8 Hz, H-2, 6),6.82 (2H, d,J= 8.8 Hz, H-3, 5)；13C-NMR (125 MHz,DMSO-d6)δ: 167.7 (COOH), 161.4 (C-4), 131.6 (C-2,6), 122.1 (C-1), 115.0 (C-3, 5)。以上数据与文献报道一致[19]，故鉴定化合物16 为对羟基苯甲酸。

化合物17：白色晶体（甲醇）。mp 79.8～81.2 ℃，ESI-MSm/z: 175 [M＋Na]+。1H-NMR (500 MHz, CD3OD)δ: 9.70 (1H, s, -CHO), 7.37 (1H, dd,J= 8.7, 1.9 Hz, H-2), 7.26 (1H, d,J= 1.9 Hz, H-6), 6.84(1H, d,J= 8.7 Hz, H-5), 3.80 (3H, s, -OCH3)；13CNMR (125 MHz, CD3OD)δ: 192.5 (C-7), 154.9 (C-4),149.6 (C-3), 130.1 (C-1), 127.9 (C-6), 116.1 (C-5),111.0 (C-2), 56.0 (-OCH3)。以上数据与文献报道一致[20]，故鉴定化合物17 为香草醛。

化合物18：灰黑色晶体（甲醇）。mp 200.2～201.1 ℃，ESI-MSm/z: 177 [M＋Na]+。1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ: 7.37 (1H, s, H-6), 7.34 (1H, d,J=8.3 Hz, H-2), 6.81 (1H, d,J= 8.3 Hz, H-5)；13C-NMR(125 MHz, DMSO-d6)δ: 168.2 (COOH), 150.8 (C-4),145.8 (C-3), 122.5 (C-1, 6), 117.3 (C-2), 115.8 (C-5)。以上数据与文献报道一致[21]，故鉴定化合物18 为3,4-二羟基苯甲酸。

化合物19：灰黑色晶体（甲醇）。mp 171.3～175.1 ℃，ESI-MSm/z: 177 [M＋Na]+。1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ: 6.58 (1H, d,J= 8.0 Hz, H-7), 6.55(1H, d,J= 1.9 Hz, H-4), 6.42 (1H, dd,J= 8.0, 1.9 Hz,H-8), 3.57 (2H, t,J= 7.2 Hz, H-1), 2.56 (2H, t,J= 7.2 Hz, H-2)；13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6)δ: 145.0 (C-5), 143.7 (C-6), 130.5 (C-3), 119.8 (C-8), 116.7 (C-4),115.8 (C-7), 62.9 (C-1), 38.6 (C-2)。以上数据与文献报道一致[22]，故鉴定化合物19 为羟基酪醇。

化合物21：黄色油状物。ESI-MSm/z: 149 [M＋Na]+。1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ: 9.55 (1H, s,-CHO), 7.50 (1H, d,J= 3.5 Hz, H-2), 6.61 (1H, d,J=3.5 Hz, H-3), 4.51 (2H, d,J= 5.2 Hz, H-5)。以上数据与文献报道一致[23]，故鉴定化合物21 为5-羟甲基糠醛。

4 DPPH 自由基清除活性

通过DPPH 自由基清除实验[24]，对化合物1、4、10、11、20 的抗氧化活性进行评价。将不同浓度样品与DPPH（终浓度为100 μmol/L）混合反应，设定3 个重复孔，同时设置不含药物的空白对照与阳性对照（trolox），30 ℃、1 h，酶标仪测定吸光度（A）值，检测波长为515 nm。待测化合物对DPPH自由基清除活性的IC50值采用Reed-Muench 方法计算。结果显示，化合物1 对DPPH 自由基具有较强的清除能力且强于阳性药 trolox（IC5014.95 μmol/L），IC50值为8.52 μmol/L，化合物4 对DPPH自由基具有一定的清除能力，IC50值为 22.69 μmol/L，其余化合物IC50值均大于50 μmol/L。

5 讨论

本研究从窝儿七甲醇和醋酸乙酯部位中分离鉴定了21 个化合物，包括2 个木脂素类成分（2、3）、6 个黄酮类（4～9）、2 个蒽醌类（10、11）、3 个生物碱类（12～14）、7 个酚酸类（15～21）。其中化合物1 为新化合物，命名为山荷叶甲酮A。化合物20为新天然产物，其氢谱和碳谱数据为首次报道。化合物2、3、5、6、9～11、13、14、17 和19～21 为首次从山荷叶属植物中分离得到。首次从该属植物中发现了生物碱类和蒽醌类化合物的存在，证实了窝儿七药材化学成分类型的多样性。采用DPPH 自由基清除实验，测试化合物1、4、10、11、20 的抗氧化活性。结果显示，化合物1 对DPPH 自由基具有较强的清除能力，化合物4 对DPPH 自由基具有一定的清除能力。综上，本研究结果丰富了窝儿七的化学成分，也为窝儿七的抗氧化活性研究提供了参考和依据。

窝儿七常被用作民间草药，疗效确切，药理作用广泛，其中抗肿瘤研究已经引起国内外学者的关注。前期文献研究发现，窝儿七含有的木脂素类化合物和双黄酮类化合物可能是发挥抗肿瘤作用的药效物质基础，以鬼臼毒素为代表的芳基萘内酯型木脂素对多种肿瘤细胞具有较强的抑制作用[25]，四氢呋喃型木脂素 (＋)-7′-甲氧基落叶松树脂醇（2）对宫颈癌HeLa 细胞具有一定的细胞毒活性[6]，IC50值为32.2 μmol/L，含有的异戊烯基化双黄酮类化合物podoverine B（9）对前列腺癌PC-3 细胞具有细胞毒活性[26]，IC50值为26.5 μmol/L。截至目前，窝儿七抗肿瘤活性物质的研究主要集中于芳基萘内酯型木脂素类化合物，而其中的双黄酮类化合物结构新颖独特，是否与木脂素类化合物协同发挥抗肿瘤作用，有待进一步深入研究。

利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突