超声弹性成像评分法联合Ki67诊断三阴性乳腺癌的临床研究

吴佳慧,黄雪兰

(佳木斯大学附属第一医院 物理诊断科,黑龙江 佳木斯150000)

我国女性乳腺癌发病率占女性恶性肿瘤的17.1%,位居第一位[1],其病理学特征决定临床治疗方向和预后[2]。三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)约占所有乳腺癌的15%～20%,较其他亚型更容易发生转移,预后更差[3-4]。超声弹性成像技术是近年来广泛使用的用来探测肿块硬度鉴别良性恶性的新技术,Ki67蛋白是一种半衰期短的非组蛋白核蛋白,目前是检测肿瘤细胞增殖活性可靠的指标之一。本研究通过研究TNBC的超声弹性成像评分和Ki67的表达,分析超声弹性评分、Ki67与TNBC临床特征的相关性及联合应用的诊断价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年10月至2021年10月住院的150名乳腺癌患者作为研究对象,年龄23～67岁,平均年龄(45.67±5.95)岁。病灶大小7～37 mm,平均病灶大小为(15.23±2.74)mm。病理分型:浸润性导管癌114例,导管内癌15例,浸润性小叶癌14例,其他7例;组织学分级:1级22例,2级81例,3级47例;腋窝淋巴结转移71例,未发生转移79例;肿瘤直径:≤2 cm 88例,2～5 cm 60例,>5 cm 2例。纳入标准:均经病理学金标准确定为乳腺癌;术前完成超声弹性成像检查;一侧乳腺单发病灶并全身检查无远处转移病灶;女性。排除标准:合并糖尿病、高血压等全身系统性疾病或者有肝肾等大器官衰竭者;分子分型不明确者;术前进行放化疗,靶向治疗及内分泌治疗者;合并其他恶性肿瘤;处于妊娠期、哺乳期或者乳腺内有假体以及病灶紧邻部位有瘢痕者;病理标本或资料不完整者。

分子分型标准:根据《中国抗癌协会乳腺癌诊治指南与规范(2021版)》[5]进行分子分型,具体分为4个类型:Luminal A 型[雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progestogen receptor,PR)阳性且PR高表达,人表皮生长因子受体-2(Human Epidermal GrowthFactor Receptor 2,HER2)阴性,Ki-67增殖指数低]、Luminal B 型(不满足 Luminal A 型条件的Luminal 样肿瘤)、ERBB2+型(HER2 阳性,ER、PR 阴性)、Basal-like型(ER、PR、HER2均是阴性)。其中Basal-like型患者65例纳入TNBC组,其他类型患者纳入非TNBC组。

1.2 研究方法

1.2.1超声弹性成像 采用美国飞利浦产超声诊断仪(飞利浦EPIQ 7),线阵探头,频率为8～13 MHZ。患者暴露双侧乳房及腋窝,仰卧位待检查。先进行常规超声检查,观察并记录乳腺肿块大体位置,形态、大小、边缘、微钙化、毛刺征、腋窝淋巴结等;再行彩色多普勒检查,检测病灶内血流情况;按照Adler半定量分级法评估血供情况;行超声弹性成像检查,选择病灶周围及周围正常组织为感兴趣区(region of interest,ROI),确定ROI区后调整取样框大小为病灶范围的两倍,用探头垂直于患者体表进行加压解压操作,将压力与压放频率的综合指标控制在3～4之间,获得较稳定的弹性图像采用 5分法进行弹性评分。

血流分级标准:病灶内无血流信号为0级,1～2处点状血流为Ⅰ级;可见1条主要血管,长度超过病灶半径或见几条小血管为Ⅱ级;可见4条以上血管或血管相互连通,交织成网状为Ⅲ级。

评分标准:患者病灶及周围呈现均匀的绿色为1分;病灶区蓝绿相间,以绿色为主为2分;病灶区蓝绿相间,以蓝色为主为3分;病灶区完全为蓝色为4分;病灶区完全为蓝色,并且病灶区周围少许组织也为蓝色为5分。病灶表现为红绿蓝三色相间的为0分,一般为囊性病灶。0～3分为良性病灶,4～5分为恶性病灶。

1.2.2Ki67表达检测方法 采用免疫组织化学法检测Ki67表达,检测试剂盒购自德国罗氏公司。所用的抗体购自美国Santa公司;二氨基联苯胺(diaminobenzidine,DAB)显色液购自上海雅吉生物科技公司。所有乳腺癌组织切除后迅速放于福尔马林溶液中浸泡,然后用常规石蜡包埋。石蜡切片脱蜡,室温孵育蒸馏水冲洗、PBS冲洗。用山羊血清封闭后室温孵育10 min。加兔抗Ki67抗体、37℃孵育2小时;PBS冲洗后滴加生物素标记的山羊抗兔IgG工作液后室温孵育;再进行PBS冲洗滴加辣根过氧化物酶标记的链亲和素工作液,室温孵育,PBS再次冲洗。DAB显色。用自来水反复冲洗、复染、脱水、透明、封片。检测乳腺癌组织中的Ki67表达情况。判断标准:Ki67阳性细胞为细胞核着色为棕黄色或棕褐色,阳性细胞采用半定量测定,阳性率=阳性细胞数/癌细胞数×100%。弱阳性(+)为≤14%,阳性(++)为14%～50%,强阳性(+++)为>50%。

1.3 统计学方法

采用统计学软件SPSS22.0进行数据分析,先对计量资料行正态分布和方差齐性检验。本组数据均符合正态分布,以均数±标准差表示。两组间比较行独立样本t检验。计数资料用率(%)表示,组间比较用χ2表示。采用ROC曲线分析各个指标对TNBC的诊断学价值,并筛选出有诊断学价值者,采用多因素回归法计算其联合预测概率,分析指标联用的最佳敏感度和特异度,以P<0.05为有差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者临床病理学特征比较

两组患者年龄、绝经状态、肿瘤大小、TNM分期、组织学分级、病理分类比较差异均无统计学意义(P>0.05),见表1。

表1 两组患者临床病理学特征比较

2.2 两组患者常规超声及弹性成像的图像特征

TNBC组边界清晰、形态规则及腋窝淋巴结转移的患者比例大于非TNBC组,微钙化比例小于非TNBC组,差异有统计学意义(P<0.05);TNBC组超声弹性评分高于非TNBC组,差异有统计学意义(P<0.05),见表2。

表2 两组患者超声图像特征比较[例(%)]

2.3 Ki67在两组患者乳腺癌组织中的表达

TNBC组患者Ki67阴性、弱阳性、阳性、强阳性表达为7例、10例、25例、23例;非TNBC组患者Ki67阴性、弱阳性、阳性、强阳性表达为17例、36例、22例、10例,两组比较差异有统计学意义(P<0.05),见表3。

表3 两组患者Ki67表达情况表

2.4 超声弹性成像联合Ki67的鉴别诊断效能

将边界清晰(清晰=1,不清晰=0)、形态规则(形态=1,无形态=0)、微钙化(是=1,否=0)、腋窝淋巴结转移(是=1,否=0)、超声弹性评分及Ki67表达分级作为自变量,是否发生TNBC(是=1,否=0)作为因变量,分析TNBC的因素,结果显示腋窝淋巴结转移、超声弹性评分和Ki67表达分级为发生TNBC的独立危险因素(Exp(B)>1.0,P<0.05)。详见表4。ROC分析结果显示,3项独立危险因素中,对TNBC存在诊断学价值的主要是超声弹性评分和Ki67,两者联合诊断TNBC的最佳敏感度和特异度分别为0.835和0.524,见图1。

图1 淋巴结转移、超声弹性评分和Ki67表达诊断TNBC的ROC曲线分析

表4 TNBC的危险因素分析结果

3 讨论

目前弹性成像评分法应用于临床诊断三阴性乳腺癌,具有无创便捷重复性强的特点[6]。机体内组织的弹性和硬度与机体的病理状态有关,当机体发生病变时,肿块的弹性和硬度与正常组织区别较大,应用弹性成像技术可以对组织的弹性进行分析。外力挤压机体会发生变形,引起回声信号移动幅度发生变化,通过彩色图像中颜色的不同变化反映出来。弹性系数不同,引起的位移幅度不一样,颜色也不一样。弹性成像评分法分为五个等级,1～3分多为良性,4～5分多为恶性,有助于临床更加准确的诊断患者肿块性质。同时观察患者彩色图像血流情况也可以辅助诊断病变程度,病变程度越高,血流越丰富,恶性肿瘤内有大量新生的毛细血管会增加血液循环速度。然而,超声弹性评分的精确度受操作医师个人主观情况影响较大,依靠一种方式来鉴别TNBC容易出现假阳性或假阴性,因此需要综合运用其他不受主观影响的指标来配合诊断,以提高准确度。本研究中,TNBC组边界清晰、形态规则及腋窝淋巴结转移的患者比例大于非TNBC组,弹性评分4-5分的比例也大于非TNBC组,微钙化比例小于非TNBC组,说明TNBC与非TNBC在超声检查时有明显差异,可作为诊断鉴别的一项依据。

乳腺癌发生必定会引起炎性因子改变和基因表达异常,进一步促进癌细胞增殖[7-9]。Ki67是反映癌细胞表达和增殖的恶性程度的指标,具有较高灵敏度,可准确反映增殖状态[10]。癌细胞增殖使肿瘤组织不断向周围组织扩散侵袭,并且会导致肿瘤组织硬度增加[11]。白玲娇[12]等研究发现乳腺组织中 Ki67抗原表达与超声弹性成像评分有关,也侧面证实了可以将两种诊断方法配合应用。Ki67表达越高,肿瘤恶化程度越高,病情越凶险。本研究中,TNBC组阳性表达率为89.23%,大于非TNBC组的70.59%,与陈莉杰[13]阐述的Ki67表达越高生存率越低的研究相符。本研究对TNBC和非TNBC患者的分析结果显示,腋窝淋巴结转移、超声弹性评分和Ki67表达分级为发生TNBC的独立危险因素,其中超声弹性评分和Ki67具有明显诊断学价值,两者诊断TNBC的最佳敏感度和特异度分别为0.776和0.705。

综上所述,超声弹性成像评分联合Ki67能够较为准确的对TNBC进行诊断,可以用其作为评价三阴性乳腺癌的发生发展的重要参考指标。