硝酸钠和氯化铵对蠕形康纤虫的毒性影响

石雪，吕湘琳，齐红莉，刘家乐

（天津农学院 水产学院 天津市水产生态及养殖重点实验室，天津300392）

盾纤类纤毛虫是海水养殖过程中常见且多发的危害性纤毛虫原生动物，尤其在富营养化水体中常见，可以寄生到软体动物、甲壳类、鱼类等寄主身上进行生长繁殖，引起寄主体表溃烂[1-4]，蠕形康纤虫（Cohnilembus verminus）隶属盾纤目（Scuticocilliatida），康纤虫属（Cohnilembus），一般自由生活或栖息在海湾扇贝外套腔[1]。鉴于盾纤类纤毛虫在水产养殖中的危害，研究相关的毒理学试验对其病害防治有重要意义[5-9]。

近年来，现代工农业和人类活动以及水产养殖中的废水会导致氨氮排入水环境中，使氨氮成为水体中的重要环境因子之一[10-13]。氨氮是密集型水产养殖水域中的常见污染物，以非电离和电离形式存在[14-15]。未电离的氨氮可通过细胞膜，由于其具有脂溶性，对细胞有害。许多学者研究发现高浓度氨氮会对纤细裸藻（Euglena gracilis）和亚洲苦草（Vallisneria asiatica）产生氧化胁迫，导致其细胞中叶绿素含量和蛋白质含量下降，加重细胞的DNA 损伤程度，还会抑制幼鱼生长，对幼鱼的鳃和肝脏组织造成损伤，影响幼鱼非特异性免疫以及营养代谢[16-19]。因此，高浓度氨氮会对水生生物生长和活动产生有害影响，严重时会导致死亡，在水产养殖中需严格控制水体中氨氮的浓度，有效防止由于水质管理不当引发的危害。

本试验以蠕形康纤虫为研究对象，探究了硝酸钠及氯化铵两种氮源药物对蠕形康纤虫的毒性效应，为蠕形康纤虫对氨氮的耐受性研究提供试验依据，以期为盾纤类纤毛虫的病害防治研究提供基础资料。

关于HCC预后，大会报告使用阿司匹林能够降低肝癌的发生；DAAs治疗与肝癌复发率降低有关；脂溶性他汀类药物使用与较低的肝癌发生及全因死亡率下降有关。另一项研究基于10个参数创建了丙型肝炎抗病毒治疗后预测肝癌发生的模型（可在网络获取www.hccrisk.com），将人群分为HCC高、中、低危三组，从而制定更好的筛选策略。解放军总医院第五医学中心的纪冬等报告了另一预后模型仅使用年龄、AFP及肝脏硬度值来预测乙型肝炎肝硬化发生肝癌的风险。详见会议摘要 91、92、93 和 94。

1 试验材料与方法

1.1 试验材料

蠕形康纤虫（C. Verminus）采集于天津北大港湿地，经活体观察和蛋白银染色确定为蠕形康纤虫，后进行单克隆纯种培养。纤毛虫培养水体为盐度30 的人工海水，放入米粒以富集作为纤毛虫食物来源的天然细菌，从而保证蠕形康纤虫的正常增长培养。

慢性毒性试验在六孔培养板中进行，蠕形康纤虫的接种密度为3 ind/mL，每24 h 观察并记录蠕形康纤虫的种群密度，当纤毛虫数目达到衰退期时结束试验。慢性毒性试验浓度依据急性试验结果设置，硝酸钠为0.000、0.425、0.850、1.700和3.400 mg/L，氯化铵为0.000、45.350、90.700、181.400 和362.700 mg/L。每个处理组重复3 次。由于氯化铵易挥发，故氯化铵慢性试验过程中每24 h 用吸管口细度小于虫子体积的吸管，从六孔板每孔吸出一半测试液，并重新配置氯化铵溶液和海水加至原测试液量，以保证氯化铵的有效性。

1.2 试验方法

刘佳头发的味道香香的，飘到我嘴里，真好闻啊，那天晚上，我就追着我妈去买洗发水，我把小店里所有的洗发水瓶子都打开闻了一遍，还是没找到那个味道，我妈不耐烦地随便买了一瓶，我不肯，赖在地上打滚，她眼睛一瞪巴掌就甩了过来——我妈说，自从生了我，她才知道自己还蛮有甩巴掌天分的，你看五个手指印一个不少地印在脸上，整齐得像朵花。

根据周永欣等[20]测定水生生物毒性试验的方法，计算每种纤毛虫的半数致死浓度。所有测定均在六孔培养板中进行，蠕形康纤虫的接种密度为10 ind/mL，每隔24 h 计数。药物浓度根据预试验结果设置，硝酸钠为26、27、28、29 mg/L、氯化铵为2 600、2 800、3 000、3 200 mg/L，为排除其他因素对试验的影响，添加不含硝酸钠和氯化铵的处理组作为对照组，每个处理组重复3 次。

1.2.2 慢性毒性试验

试验所用硝酸钠购自天津风船化学试剂科技有限公司（20151108），氯化铵购自天津大学科威公司（20140511）。

1.3 数据处理

原生动物纤毛虫种群生长率[21]计算公式为：

式中：Nt为时间t时的种群密度，N0为初始种群密度，t为试验时间。

纤毛虫是通过二分裂的方式进行种群生长的[22]，因此世代时间与种群生长率（r）之间的关系为：

不同浓度硝酸钠作用下蠕形康纤虫种群生长曲线变化如图2 所示。高浓度组硝酸钠作用下蠕形康纤虫的种群增长曲线符合Logistic 种群生长曲线，存在停滞期、指数期、稳定期、衰退期四个时期。对照组无明显停滞期，进入9 d 指数增长期，第10 天达到种群密度峰值，之后种群密度逐渐开始衰退。0.425 mg/L 组硝酸钠作用下的蠕形康纤虫在经历9 d 的指数增长期后达到峰值，但不存在明显的稳定期。1.700 mg/L 组作用下的蠕形康纤虫达到峰值的时间最早（8 d），随后进入稳定期，4 d 后种群密度开始衰退。3.400 mg/L 组作用下的蠕形康纤虫在第9 天达到种群密度峰值，随后进入衰退期。

式中：r为原生动物纤毛虫的种群生长率。

2 结果与分析

2.1 硝酸钠和氯化铵对蠕形康纤虫急性毒性试验