变应性鼻炎患者血清miR-Let-7e、sCD48水平变化及其与病情的关系

栾镐彤，李琦

1 南方医科大学珠江医院（第二临床医学院）耳鼻喉科，广州 510280；2 广州市第一人民医院耳鼻喉科；3 南方医科大学南方医院（第一临床医学院）耳鼻咽喉头颈外科

变应性鼻炎（AR）全球发病率为10%～40%，临床表现为清水样鼻涕、鼻痒及鼻塞等，中重度患者常反复发作，诱发哮喘、中耳炎等疾病，严重影响生活质量［1-2］。微小核糖核酸Let-7e（miR-Let-7e）编码基因位于19q13.41，无蛋白编码功能，能够调节肿瘤坏死因子α（TNF-α）等炎症因子表达，参与机体炎症反应及肿瘤发生等过程［3-4］。近年来研究发现，miRLet-7e能够通过靶向抑制Fas配体表达，维持Ⅰ型和Ⅱ型辅助性T淋巴细胞平衡，在AR发生中发挥抑制效应，是潜在的AR 生物标志物［5］。可溶性CD48（sCD48）是免疫球蛋白样受体CD2 亚家族成员，是膜结合型CD48 的可溶性形式，参与淋巴细胞、树突状细胞和内皮细胞的激活和分化过程［6］。研究发现，间歇性AR 患者血清sCD48 水平升高，是间歇性AR 早期诊断的血清生物学标志物［7］。本研究观察了AR 患者血清miR-Let-7e、sCD48 水平变化，并分析二者与患者病情严重程度的关系，为AR 的诊断及病情判断提供依据。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 纳入标准：①AR 诊断标准符合中华耳鼻咽喉头颈外科杂志编辑委员会鼻科组2015年制定的《中国变应性鼻炎诊断和治疗指南》［8］；②既往未进行AR 相关治疗。排除标准：①合并鼻中隔偏曲、鼻腔鼻窦占位；②处于鼻炎、鼻窦炎急性加重期及哮喘急性加重期。选取2020 年2 月—2023年2月广州市第一人民医院收治并符合上述标准的AR 患者102 例作为观察组，其中男54 例、女48 例，年龄（36.58 ± 5.13）岁，发作时间呈间歇性42例、持续性60 例，变应原呈季节性44 例、常年性58 例，变应性鼻炎评分（SFAR 评分）≥7 分64 例、＜7 分38 例，病情严重程度［8］为轻度36例、中度34例、重度32例，免疫球蛋白E（IgE）阳性69 例。选取同期体检健康志愿者60 例作为对照组，其中男33 例、女27 例，年龄（35.97 ± 6.13）岁。两组性别、年龄均具有可比性（P均＞0.05）。本研究通过医院伦理委员会审核（AF/SQ-01-007），患者及家属均签署知情同意书。

1.2 血清miR-Let-7e检测 采用实时荧光定量PCR法。抽取观察组治疗前及对照组入组后的清晨空腹静脉血5 mL，室温静置1 h，3 000 r/min 离心10 min，取上层血清。采用TRIzol法提取血清总RNA，反转录为cDNA，进行实时荧光定量PCR反应。PCR反应体系10 µL：模板1 µL，2×SYBR Green Premix 5 µL，正反向引物各1 µL，无酶水2 µL。PCR反应过程：95 ℃预变性5 min，95 ℃变性30 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，变性退火延伸共40个循环。miR-Let-7e上游引物：5'-AAAGCAAATCATCGGACGACC-3'，下游引物：5'-GTACAACACATTGTTTCCTCGGA-3'；内参U6上游引物：5'-AGTAAGCCCTTGCTGTCAGTG-3'，下游引物：5'-CCTGGGTCTGATAATGCTGGG-3'。采用2-ΔΔCt法计算血清miR-Let-7e相对表达量。

1.3 血清sCD48 检测 采用ELISA 法。取“1.2”剩余血清，严格按照ELISA 试剂盒说明书进行具体实验操作，检测血清sCD48水平。

1.4 统计学方法 采用SPSS27.0统计软件。计量资料采用K-S正态性检验，呈正态分布以表示，结果比较采用方差分析或t检验，重复测量数据采用重复测量的方差分析；非正态分布以M（P25，P75）表示，结果比较采用秩和检验。两变量间的相关性检验采用Spearman相关分析法。以AR患者病情程度为因变量（中重度 = 1、轻度 = 0），以血清miR-Let-7e、sCD48为自变量，进行影响中重度AR发生的多因素Logistic回归分析。绘制血清miR-Let-7e、sCD48单独及联合检测预测中重度AR的受试者工作特征（ROC）曲线，分析其预测价值。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组血清miR-Let-7e、sCD48 水平比较 观察组血清miR-Let-7e、sCD48 水平分别为2.32 ± 0.57、（4.52 ± 0.68）µg/L，对照组分别为4.69 ± 0.64、（0.42 ± 0.16）µg/L，两组比较P均＜0.05。

2.2 不同临床特征的AR 患者血清miR-Let-7e、sCD48水平比较 见表1。

表1 不同临床特征的AR患者血清miR-Let-7e、sCD48水平比较（）

表1 不同临床特征的AR患者血清miR-Let-7e、sCD48水平比较（）

注：不同临床特征比较，*P＜0.05。

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2.3 AR患者血清miR-Let-7e、sCD48与病情严重程度、SFAR 评分、IgE 阳性的关系 AR 患者血清miRLet-7e 与病情严重程度、SFAR 评分、IgE 阳性均呈负相关关系（r分别为-0.612、-0.589、-0.710，P均＜0.05），血清sCD48 与病情严重程度、SFAR 评分、IgE 阳性均呈正相关关系（r分别为0.540、0.657、0.721，P均＜0.05）。

2.4 血清miR-Let-7e、sCD48 与中重度AR 发生的关系 多因素Logistic回归分析结果显示，血清miRLet-7e 升高是影响中重度AR 发生的独立保护因素，血清sCD48 升高是影响中重度AR 发生的独立危险因素（β分别为-0.456、0.581，OR值分别为0.634、1.788，95%CI分别为0.469～0.857、1.289～2.480，P均＜0.05）。见表2。

表2 血清miR-Let-7e、sCD48影响中重度AR发生的多因素Logistic回归分析结果

2.5 血清miR-Let-7e、sCD48对中重度AR发生的预测价值 血清miR-Let-7e、sCD48单独与联合预测中重度AR发生的曲线下面积及95%CI分别为0.798（0.740～0.869）、0.823（0.753～0.879）、0.884（0.813～0.934），敏感度分别为59.3%、62.8%、90.8%，特异度分别为78.3%、80.2%、.75.3%。见表3、OSID码图1。

表3 血清miR-Let-7e、sCD48预测中重度AR发生的ROC曲线分析结果

3 讨论

AR 是一种由空气中的过敏原引起，并由IgE 介导的鼻腔过敏性炎症疾病。我国成人AR 发病率达17.6%，并且呈逐渐上升趋势［9］。中重度AR 发生时，可能导致患者睡眠障碍、焦虑抑郁等，严重影响患者的生活质量及工作学习效率。AR 早期病理特征主要为过敏原特异性IgE 结合肥大细胞受体，从而引起组胺释放，而在AR 晚期以大量炎症细胞如嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞的活化及大量炎症因子释放为主［10］。深入研究AR 的发病机制，寻找能够评估AR 病情程度的血清标志物，对于AR 的早期诊治具有重要临床意义。

miRNA 是一类长度较小的非编码RNA，在转录后水平调节细胞分化、增殖及先天和后天的适应性免疫。miR-Let-7e 是近年来发现的微小RNA 之一，参与调节CD4+T 淋巴细胞浸润和Th2 型细胞因子释放，与哮喘等过敏性疾病密切相关［11］。本研究结果显示，AR患者血清miR-Let-7e水平降低，这与既往学者报道的AR患者及AR小鼠鼻黏膜组织中miR-Let-7e降低的结果一致［12］。本研究结果显示，AR患者血清miR-Let-7e与病情严重程度、SFAR 评分、IgE 均呈负相关关系，提示miR-Let-7e表达下调参与了AR的发生发展。分析其原因，miR-Let-7e表达下调导致抗原提呈细胞中信号转导子和转录激活子3的激活，诱导单核巨噬细胞及淋巴细胞的过度激活，粒单集落刺激因子及白细胞介素4等促炎因子大量释放，从而参与加重炎症反应，促进AR的发生发展［13］。一项关于AR 动物模型的研究发现，AR 发生时miR-Let-7e表达下调，其靶基因Janus 激酶1 和细胞因子信号传导抑制因子4 mRNA稳定性增加，二者共同作用促进嗜酸性粒细胞、B淋巴细胞等免疫细胞释放组胺、IgE和TNF-α，从而加重AR病情，而过表达miR-Let-7e能够抑制AR 小鼠的炎症水平，抑制AR 疾病进展［12］。本研究结果显示，血清miR-Let-7e升高是影响中重度AR 发生的独立保护因素，提示miR-Let-7e 能够抑制中重度AR 的发生。有研究发现，给予miR-Let-7e mimics能够抑制过敏性气道炎症动物模型气道黏膜上皮细胞中白细胞介素13的产生，减少过敏原诱导的气道黏液产生，抑制气道的过敏性炎症［14］。因此，miR-Let-7e 表达下调参与了AR 的发生发展，是评估AR病情严重程度的血清学标志物。

CD48是一种糖基磷脂酰肌醇蛋白，包括膜受体及分泌型sCD48两种形式，不仅存在于造血细胞、单核细胞、中性粒细胞表面，还能够作为黏附分子结合中性粒细胞、肥大细胞、嗜酸性粒细胞等，发挥共刺激效应［15］。近年来研究发现，过敏性哮喘、鼻炎患者血清sCD48 水平升高，提示sCD48 可能是疾病早期诊断的新型血清生物标志物［16-17］。本研究结果显示，AR 患者血清sCD48 升高，并与病情严重程度、SFAR评分、IgE阳性呈正相关关系，提示sCD48参与了AR的发生发展。AR患者血清sCD48水平上调可能与嗜酸性粒细胞激活有关。也有研究证实，特应性皮炎患者皮肤病损组织中sCD48 表达升高，并且体外细胞实验显示应用金黄色葡萄球菌外毒素激活嗜酸性粒细胞后，嗜酸性粒细胞分泌sCD48 水平也升高［18］。sCD48 作为一种共刺激分子，参与促进免疫细胞激活。研究表明，sCD48能够与肥大细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞表面的CD244 受体结合，促进TNF-α、白细胞介素1 及白细胞介素4 等促炎细胞因子的释放，加重鼻黏膜炎症反应［19］。此外，血清sCD48 水平能够反映AR 患者CD48 的表达水平，而CD48 作为肥大细胞和嗜碱性粒细胞的表面活化受体，能够激活磷脂酰肌醇3-激酶通路，促进白三烯、血管内皮生长因子表达和分泌，从而加重AR患者喷嚏和鼻塞症状［20］。本研究结果显示，血清miR-Let-7e、sCD48 联合预测中重度AR 的曲线下面积及敏感度均高于单独预测，提示二者联合对于AR患者的病情预测具有重要价值。

综上所述，AR 患者血清miR-Let-7e 水平降低、sCD48水平升高，二者与患者病情严重程度有关，联合检测有助于判断患者病情。但本研究未对miRLet-7e、sCD48 在AR 发生发展中的具体作用机制进行研究，有待今后设计细胞实验和动物实验进一步验证，以期为AR的临床治疗提供新的靶点。