UPLC-MS/MS 法同时测定心脉通胶囊中5 种皂苷的含量

周宇星，肖小武，付辉政，彭常春，易耀江，梁国嫔，潘蕾*

（1.江西省药品检查员中心，江西南昌 330029，2.江西省药品检验检测研究院，江西南昌 330029；3.江西济民可信药业有限公司，江西宜春 336000）

心脉通胶囊具有通脉养心、降压降脂、活血化瘀的功效，临床上主要用于高血压、高脂血症等，处方是由牛膝、当归、丹参、粉葛、钩藤、毛冬青、槐米、决明子、三七、夏枯草十味药组成[1-2]，经国家药品监督管理局官网查询，涉及江西济民可信药业有限公司和贵州益佰制药股份有限公司两家生产企业。心脉通胶囊中三七为原粉入药。三七为五加科植物三七（Panax notoginseng）的干燥根和根茎，在保护心血管系统方面有显著的药理作用[3]，如以三七以及三七总皂苷提取物的三七通舒胶囊、血塞通胶囊和注射液[4-6]等已成为治疗心脑血管疾病等领域一线中药制剂。现代研究表明，三七含有皂苷类、黄酮类、甾醇类、氨基酸等多种化学成分，其中皂苷类化合物是三七的主要药效成分[7]。《中国药典》2020 版也均以皂苷类化合物为主要质控指标对三七药材、三七提取物以及含三七药味的成方制剂进行质量控制[8]。目前对心脉通胶囊的质量控制技术研究报道主要集中在葛根、槐米以及丹参[9-11]等方面，而文献报道采用HPLC-ELSD 法测定3 种皂苷含量的心脉通软胶囊也仅由三七、山楂叶和川芎处方组成，而非当归等十味药材组成的心脉通胶囊[12]。因此，本试验参考相关研究[13-15]采用UPLC-MS/MS 技术建立了同时测定心脉通胶囊中三七皂苷R1以及人参皂苷Re、Rg1、Rb1、Rd 共计5 种皂苷的含量测定方法，此方法可为心脉通胶囊的质量控制和评价提供参考。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

1290 Ⅱ-6470 超高效液相色谱串联质谱联用仪，配备MassHunter 色谱工作站，美国Agilent 公司；BSA 124S-CW 电子天平，德国Sartorius 公司。

人参皂苷Re 对照品，批号：111754-202028，纯度以93.9%计，中国食品药品检定研究院；人参皂苷Rg1对照品，批号：110703-201933，纯度以94.3%计，中国食品药品检定研究院；三七皂苷R1对照品，批号：110745-201921，纯度以100%计，中国食品药品检定研究院；人参皂苷Rd 对照品，批号：111818-202104，纯度以100%计，中国食品药品检定研究院；人参皂苷Rb1对照品，批号：111704-202028，纯度以93.1%计，中国食品药品检定研究院。

市售心脉通胶囊2 个生产厂家16 批样品，样品S1～S13 为江西济民可信药业有限公司产品，批号分别 为210303、210304、210305、210201、210202、210203、210204、210301、210302、210503、210504、210701 和210702，规格0.25 g/ 粒；样品S14～S16 为贵州益佰制药股份有限公司产品，批号分别为200721、200614、200808，规格0.48 g/粒。阴性对照样品为心脉通按处方缺三七同法制成，由江西济民可信药业有限公司提供。

1.2 方法

1.2.1 色谱和质谱条件

色谱柱为Waters Acquity BEH C18（100 mm×2.1 mm，1.7 μm），以0.1%甲酸水溶液为流动相B，甲醇为流动相A，按表1 进行梯度洗脱；进样量3 μL，柱温25 ℃，流速0.3 mL/min；ESI 离子源，采用正离子多反应监测（MRM）监测模式，质谱采集参数见表2[16]。

表1 流动相洗脱程序

表2 离子对和质谱检测参数

1.2.2 溶液的配制

1.2.2.1 对照品储备溶液的制备

分别精密称取R111.96 mg、Re 15.76 mg、Rg112.30 mg、Rb113.56 mg 及Rd 10.72 mg，分别置100 mL、100 mL、100 mL、50 mL 及100 mL 容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀；然后分别精密吸取上述溶液各10 mL，分别置于100 mL 容量瓶中，再用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。

1.2.2.2 供试品溶液的制备

取样品中的内容物约1.0 g，精密称定，转入具塞锥形瓶，加入甲醇50 mL 后盖紧塞子，称量。在60 ℃下回流120 min，冷却至室温，再次称量，用甲醇补足减失的量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液1 mL 置100 mL 容量瓶中加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

1.2.3 线性关系的考察

用移液管分别取“1.2.2.1”项下的对照品储备液0.05 mL、0.25 mL、0.25 mL、0.50 mL、2.50 mL，分别置100 mL、100 mL、50 mL、50 mL、100 mL 容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，按“1.2.1”项下色谱、质谱条件测定峰面积，绘制标准曲线。

1.2.4 专属性实验

精密量取“1.2.2.1”项下的对照品储备液0.25 mL置50 mL 容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；取阴性样品按“1.2.2.2”项下供试品溶液的制备方法制备阴性样品溶液；分别取供试品溶液（S1）、对照品溶液、阴性对照溶液，按“1.2.1”项下条件进行测定。

1.2.5 精密度试验

分别取“2.4”项下的对照品溶液、阴性样品溶液及供试品溶液按“1.2.1”项下的色谱、质谱条件，重复实验6 次。

1.2.6 准确度

采用加样回收试验，精密称取已知含量的本品（S1）0.5 g，按相对于本品80%、100%、120%的含量比例精密添加R1、Re、Rg1、Rb1及Rd 混合对照品溶液，按“1.2.2.2”项下制备溶液，并照“1.2.1”项下条件测定，计算回收率。

1.2.7 稳定性试验

取样品（S1），按“1.2.2.2”项下供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，室温下放置，分别在0 h、4 h、8 h、12 h、16 h、24 h 取样，按“1.2.1”项下的色谱质谱条件测定。

2 结果与分析

2.1 线性

各成分在各自浓度范围内呈良好的线性关系，见表3。

表3 回归方程与线性范围

2.2 专属性

比较供试品溶液色谱及对照品色谱，阴性对照样品中其他成分对目标物质峰无干扰，见图1 和图2。

图1 5 种人参皂苷的MRM TIC 图

图2 5 种皂苷的MRM 图

2.3 精密度

三七皂苷R1的峰面积RSD为2.3%、人参皂苷Re 的峰面积RSD为1.9%、Rg1的峰面积RSD为2.1%、Rb1的峰面积RSD为1.7%、Rd 的峰面积RSD为1.9%，表明仪器精密度良好。

2.4 准确度

如表4 所示，R1平均回收率为96.34%、Re 平均回收率为98.05%、Rg1平均回收率为97.29%、Rb1平均回收率95.94%、Rd 的回收率为97.82%，RSD分别为2.97%、2.67%、2.76%、2.26%及2.54%，方法准确度良好。

表4 样品5 种皂苷加样回收率

2.5 稳定性

样品配制24 h 内，R1的峰面积RSD为1.6%、Re 的峰面积RSD为0.9%、Rg1的峰面积RSD为1.1%、Rb1的峰面积RSD为1.7%、Rd 的峰面积RSD为1.2%，表明样品在24 h 内稳定性良好。

2.6 实际样品测定

按上述拟定的方法，对收集的样品中5 个皂苷含量进行测定，结果见表5。

表5 心脉通胶囊中5 个皂苷成分的含量测定结果（n=4）

3 结论与讨论

3.1 检测方法的选择

本试验最先考察了HPLC 的203 nm 低波长检测方法，但因心脉通胶囊中基质复杂，加之三七占比很低、低波长处检测基线背景灯存在较大的干扰，故本试验采用灵敏度高、专属性强的LC-MS/MS 测定方法。

3.2 测定组分的选择

《中国药典》2020 版一部对三七以人参皂苷Rg1、Rb1及三七皂苷R1三个组分来控制，三七总皂苷以三七皂苷R1及人参皂苷Re、Rg1、Rb1、Rd 五个组分来控制，且皂苷为三七的主要功效成分，故本试验以三七皂苷R1和人参皂苷Re、Rg1、Rb1、Rd 五个组分为测定组分。

3.3 样品结果分析

《中国药典》2020 版一部规定三七中含人参皂苷Rg1、Rb1以及三七皂苷R1总量不得少于5.0%。心脉通胶囊中三七以原粉入药，心脉通胶囊中三七的处方量仅以人参皂苷转移率70%计算，暂拟定限度为本品含三七以人参皂苷Rb1、Rg1及三七皂苷R1总量计，每l g 不得少于186.0 μg。从样品检测结果上看，样品均高于此限度，但不同批次间的含量存在差异，可能是三七投料或者生产工艺不同。

3.4 小结

本文考察了市场中两个生产企业不同批次心脉通胶囊中三七皂苷R1和人参皂苷Re、Rg1、Rb1、Rd等5 个皂苷的含量，且通过设置拟定限度对收集的样品进行质量评价。建立的超高效液相-串联质谱联用法同时测定心脉通胶囊中三七皂苷R1和人参皂苷Re、Rg1、Rb1、Rd 等5 个皂苷的方法，操作简单、重现性高、结果准确、专属性强，可考虑用于心脉通胶囊的质量控制和评价。