非季节性肉羊冷冻胚胎移植效果观测

尔润清,张元强,柴引雄

1.渭源县锹峪镇畜牧兽医站,甘肃 渭源 748206 2.陇西县畜牧兽医技术服务中心,甘肃 陇西 748100

0 引言

胚胎移植是指将一个良种母畜配种后的早期胚胎移植到另一个相同生理状态的同种母畜体内继续发育成新个体[1]。随着畜牧业的高质量发展,胚胎移植技术越来越受人们重视,促进了胚胎移植技术的发展,近年来已经有大批量的胚胎牛、羊出生,胚胎移植技术已相对成熟,并应用于畜牧业生产实践中。胚胎移植技术是一项快速有效的制种技术,能够建立起一定数量的良种肉羊种群,不仅能满足当地肉羊发展的种质需求,还能够带动当地及周边区域肉羊产业的转型升级,最终实现由常规肉羊生产转为种羊生产。在常规条件下,冷冻后的胚胎移植成功率为20%～30%,而鲜胚的移植成功率可达45%～60%。

目前定西市示范推广的肉羊胚胎移植仅限于肉羊发情季节进行移植生产,时间短、数量少,普及面小,本试验通过在绵羊非发情季节进行肉羊冷冻胚胎移植并观测其移植效果,大力推广肉羊胚胎移植技术,以解决当地专用型肉羊种群规模小、扩繁能力有限、肉羊活体引进成本高、推广面小、周期长等问题,缩短品种改良周期,提高良种覆盖率,推进现代肉羊产业化进程。

1 材料与方法

1.1 材料

材料包括:进口肉羊冷冻胚胎、受体母羊、试情公羊、同期发情药品(前列腺素孕马血清、CIDR硅胶栓、亚硒酸钠VE)、腹腔镜、体视显微镜、全数字B型超声诊断仪。

1.2 试验动物与试验设计

在同一养殖场的不同季节挑选健康的经产母羊,进行布病筛查后组建受体母羊群4个。在基础日粮配方、同期发情处理程序完全相同的情况下,分别在春、夏、秋、冬季利用同品种同批次冷冻胚胎进行移植,移植结束后60 d利用全数字B型超声诊断仪检测其受孕情况进行数据记录,150 d后对其产羔情况做好数据记录并分析。

1.3 试验场地及时间

试验选择在定西市陇西县福星瑞鑫养殖场(依托定西市良种肉羊冷冻胚胎移植制种技术推广与应用项目)进行。试验于2021年5月开始,2023年5月结束,为期2年。

1.4 技术路线

1.4.1 受体母羊群组建

技术组成员与符合条件的养殖主体签订合作协议,明确各主体的初步移植规模,各协议主体按照1：1.2的比例,筛选繁殖性能良好、发情周期正常、无繁殖机能疾病、生产胎次3胎以内、膘情中等以上、母性和泌乳性能良好的母羊组成受体母羊群。

1.4.2 受体母羊饲养管理

加强对受体母羊的饲养管理,须保证蛋白质、矿物质、全价混合饲料的供给,日喂混合饲料0.65～1 kg,同时保证每天补饲胡萝卜、青贮、紫花苜蓿等饲料,并做到定时、定量,同时加强羊只运动。

1.4.3 受体母羊健康筛查与重大传染病免疫

胚胎移植前45 d,由技术组人员对受体母羊群进行群体健康筛查,剔除体弱、体小、体老、繁殖性能差的羊只后,全部采血由兽医实验室进行布氏杆菌病病原学检测,确保受体母羊均无布氏杆菌病阳性羊只后,对筛查留用的全部羊只进行口蹄疫、小反刍兽疫等重点传染病的疫苗接种。

1.4.4 查孕

健康筛查完成后,借助全数字B型超声诊断仪对所有羊只进行妊娠检查,剔除怀孕母羊,为移植做好准备。

1.4.5 同期发情

待受体母羊确定好后,利用“前列腺素(PG)+CIDR硅胶栓”法进行同期发情处理,即处理第1天(首次处理为第1天)进行肌内注射PG 0.1 mg/只,第5天在母羊阴道内埋置CIDR硅胶栓1个/只,第16天上午注射孕马血清(PMSG)330 IU/只,下午注射PG 0.1 mg/只并撤栓。第17～19天早晚利用试情公羊试情,试情公羊系好试情布,放入母羊群中试情,每30只受体母羊放1只试情公羊,以母羊站立接受试情公羊爬跨作为发情的标准,发情的做好记录并分圈,未发情则继续注射PG 0.1 mg/只等待发情。

1.4.6 黄体检查

在胚胎移植时,采取腹腔镜检查,借助光源观察卵巢上的黄体发育情况,选择黄体发育良好的母羊确定为可移植受体羊,进行冻胚移植。

1.4.7 胚胎解冻

从液氮罐中取出装有胚胎的细管在空气中停留10 s,拔掉细管口的活塞后放入32 ℃水中20 s,剪开细管口,推出胚胎,放入I液:糖、Holding液、乙二醇(1：1：1)6 min,放入Ⅱ液:乙二醇、Holding 液(1：1)6 min,在显微镜下检查其数量和级别待用。

1.4.8 胚胎检查

将解冻的胚胎利用体视显微镜将胚胎检出,并进行必要的净化处理,然后根据其形态进行质量鉴定。在全部操作过程中,须做到胚胎不受到任何不良因素(物理的、化学的、微生物的)影响。

1.4.9 手术移植

准备好手术台、剃毛刀、剪毛剪、手术刀柄、止血钳、巾帕钳、持针器、手术刀片、缝合针、缝合线、创布、纱布、16号针头(尖端钝)、35 mm培养皿、移植器、针头式细菌滤器、5 mL一次性注器注射器、酒精、碘酊、新洁尔灭、生理盐水和青霉素等器械和药品。待移植羊从第22天开始禁食禁水,在禁食24 h以上、保证空腹情况下进行手术,手术室要严格进行消毒和无菌操作(利用紫外线灯照射消毒),做好照明取暖等工作,温度保持在20～25 ℃,过高或过低均会影响到胚胎质量。第23天进行移植,移植前颈静脉全身麻醉,待移植羊安全仰卧保定于手术架上,手术部位进行剃毛、消毒和覆盖创布,用穿刺针在乳房基部8 cm左右各打1个孔,一侧插入肠钳,另一侧插入腹腔镜找到子宫后利用肠钳将子宫角拉出体外移入胚胎后再送入腹腔。在切口处缝合1针,用碘酊消毒伤口,最后肌注青霉素80万IU 。每只受体羊移植1个胚胎。移植7 d后拆线,处理伤口。

1.4.10 移植后饲养管理

妊娠前期要满足肉羊对热量的摄取,防止胚胎因营养不良导致胚胎早期死亡。在妊娠后期要保证肉羊的营养的全面需要,尤其是蛋白质的需要,以满足胎儿的充分发育。胚胎移植后对早期受孕羊的饲养管理尤为重要,应保持环境相对稳定,避免应激反应。

1.4.11 确定怀孕与否

移植34 d后用试情公羊进行早期妊娠诊断,连续试情17 d,发情羊只确定为未受胎羊,不发情羊只确定为受胎羊,移植60 d后应用全数字B型超声诊断仪进行妊娠检查。

1.4.12 同期发情处理程序及移植日程安排

根据绵羊的生理学及繁殖特性,在春、夏、秋、冬各季节确定本季节内较好的气候环境来选择最佳的同期发情及移植时间段,具体日程安排如表1所示。

表1 胚胎移植日程安排

2 结果与分析

2.1 同期发情处理结果分析

从表2和图1来看,在同期发情过程中,秋季和春季同期发情效果较好,这2个季节均为绵羊发情季节,平均同期发情率为90.7%,而秋季同期发情率高于春季同期发情率3.2%;夏季和冬季为绵羊的非发情季节,平均同期发情率为76.1%,而冬季同期发情率较夏季同期发情率较高1.6%,试验结果与张一玲 等[2]、张寿 等[3]试验结果相近,高于杨永林 等[4]试验结果。综合分析来看,绵羊在非发情季节做同期发情处理后效果较为理想,同期发情率较季节同期发情率平均低了14.6%。

图1 同期发情率统计

表2 同期发情处理数据记录

2.2 移植结果分析

从表3和图2可以看出,一年中在秋季做肉羊冻胚移植时,移植成功率最高,为51.5%;春季次之,移植成功率为43.6%;夏季和冬季较低,移植成功率分别为31%和33.7%。

图2 不同季节移植成功率统计

表3 不同季节移植及妊娠检查记录

从表4和图3综合分析来看,肉羊冷冻胚胎移植在非发情季节的平均成功率为32.6%,在发情季节的平均成功率为48.1%;非发情季节移植成功率较发情季节移植成功率降低了15.5%,降幅为32.2%。

图3 发情季节和非发情季节平均移植成功率统计

表4 发情和非发情季节移植及妊娠检查记录表

3 讨论

羊属于季节性发情动物,一般在春、秋季节发情配种。在非季节性肉羊冷冻胚胎移植效果的观测来看,肉羊冷冻胚胎移植在陇中地区的非季节时间段完全可以开展生产,只是同期发情和移植成功率较季节发情时间段相对较低,需要在受体母羊的选择、营养的调配、圈舍温湿度环境的控制、移植手术室无菌操作等方面达到更高的要求。继续开展良种肉羊胚胎移植制种技术大面积推广应用,达到快速制种扩群目的,可有效解决纯种肉羊繁育受发情季节的影响而产生的肉羊种质匮乏、种群繁育时间过长、投资费用过高等制约性因素。从国外引入良种羊胚胎,代替直接购进活羊,降低活羊引种的繁琐程序,降低引种周期,在保证引入良种质量的同时,又能避免部分疾病的传播,节省了引种成本,有利于提高养殖效益。

4 结论

由本文试验可知,一年中秋季肉羊冻胚移植时成功率最高,在发情季节的移植平均成功率最于非发情季节。由此,建议陇中地区的肉羊胚胎移植工作,可在秋季或动物发情期进行,成功率较高。