血清lncRNA NEAT1在急性心肌梗死患者中的表达及其临床意义

赵 沱 白鹏飞 孙 婧 程 涛

（长安医院心血管内科，陕西 西安 710016）

急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）是常见的心血管疾病，由动脉粥样硬化引起冠状动脉管腔闭塞和斑块破裂导致[1]。AMI起病急、病情危重，对于AMI的早期诊断尤为重要，临床常用心肌酶谱[肌酸激酶（creatine kinase，CK）、肌酸激酶MB同工酶（creatine kinase MB isoenzyme，CK-MB）、乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）、天门冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase，AST）]和心肌肌钙蛋白I（cardiac troponin I，cTnI）诊断AMI[2]。但cTnI和CK-MB升高还与其他原因导致心肌细胞损伤或细胞通透性增加有关，并且上述心肌细胞损伤标志物检测受多种因素的影响[3]。因此，有必要寻找新的AMI分子标志物。长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA）是一种不能编码蛋白质、长度≥200 nt的长链RNA，可在转录后水平调控细胞生物学行为[4]。核富集转录体 1（nuclear paraspeckle assembly transcript 1，NEAT1）是近年来发现的lncRNA，已有研究发现心力衰竭合并肺部感染患者血清lncRNA NEAT1表达显著升高[5]，干扰lncRNA NEAT1表达能减轻缺氧复氧诱导的心肌细胞氧化应激损伤和心肌细胞凋亡[6]，提示lncRNA NEAT1在心肌相关疾病中起重要作用。本研究拟探讨lncRNA NEAT1在AMI诊断中的价值，及其与心肌酶谱的相关性，为临床诊断和治疗AMI提供参考。

1 材料和方法

1.1 研究对象

选取2018年6月—2020年12月长安医院AMI患者77例（AMI组）、不稳定型心绞痛（unstable angina pectoris，UAP）患者70例（疾病对照组）、体检健康者76名（正常对照组）。

AMI纳入标准：1）符合AMI诊断标准[7]；2）入院时发病时间≤24 h；3）入院前未接受过心肌梗死治疗；4）临床资料完整。排除标准：1）合并严重肝、肾、肺功能障碍；2）合并恶性肿瘤；3）近期使用过免疫抑制剂或存在严重免疫功能缺陷；4）合并严重血液传染性疾病；5）合并先天性心脏病或严重心律失常；6）合并精神疾病。UAP患者符合《不稳定型心绞痛中医诊疗专家共识》[8]中的诊断标准。排除标准：1）合并严重的肝、肾功能衰竭；2）合并精神疾病。本研究经长安医院医学伦理委员会批准，所有研究对象均签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 临床资料收集

收集所有研究对象的临床资料，包括年龄、性别、吸烟史、糖尿病史、高血压史、血脂情况等。

1.2.2 lncRNA NEAT1相对表达量检测

采集AMI和UAP患者入院时、正常对照者体检当日空腹静脉血5 mL，3 000×g离心10 min，分离血清。采用TRIzol试剂（美国ThermoFisher Scientific公司）提取血清总RNA，将总RNA溶于10 µL超纯水，测定RNA的浓度和纯度，以1.7

以cDNA为模板，采用ABI 7500实时荧光定量PCR仪（美国ABI公司）和SYBR Green PCR试剂盒[天根生化科技（北京）有限公司]检测lncRNA NEAT1相对表达量，检测方法为实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，RTqPCR），以GAPDH为内参。反应体系：共10 µL，其中SYBR Green Mix 5.0 µL，PCR F Primer 0.2 µL，PCR R Primer 0.2 µL，cDNA模板2 µL，ddH2O 2.6 µL。引物序列：lncRNA NEAT1上游引物为5'-GGATGATGCAAACAATTACTG-3'，下游引物为5'-TCCACCTACACACCCAC-3'；GAPDH上游引物为5'-GATGGCTAGTCGTAGCATCG-3'，下游引物为5'-AGCTGGCATGCCCGATCGATC-3'。引物设计和合成由生工生物工程（上海）股份有限公司完成。反应条件：95 ℃ 5 min；95 ℃ 15 s，60 ℃ 35 s，72 ℃ 30 s，35个循环。实验设置5个复孔。采用2-ΔΔCt计算lncRNA NEAT1相对表达量。

1.2.3 心肌酶谱和cTnI水平检测

采用酶联免疫吸附试验检测cTnI，试剂盒购自武汉菲恩生物科技有限公司。采用DXC600全自动生化分析仪（美国贝克曼公司）和配套试剂检测CK、CK-MB、LDH和AST水平。

1.3 统计学方法

采用SPSS 23.0和Origin 9.1软件进行统计分析。采用K-S检验评估计量资料的正态性。呈正态分布的计量资料以±s表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用SNK-q检验。呈非正态分布的计量资料以中位数（M）[四分位数（P25，P75）]表示，多组间比较采用Mann-Whitney秩和检验。计数资料采用例或率表示，组间比较采用χ2检验。采用受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线评估lncRNA NEAT1相对表达量诊断AMI的效能。采用Pearson或Spearman相关分析评估lncRNA NEAT1相对表达量与血清心肌酶谱和cTnI的相关性。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3组之间临床资料比较

3组之间年龄、性别、吸烟史、糖尿病史、高血压史、高血脂等临床资料差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。

表1 3组之间临床资料比较

2.2 正常对照组、疾病对照组和AMI组lncRNA NEAT1相对表达量比较

正常对照组、疾病对照组和AMI组血清lncRNA NEAT1相对表达量分别为1.04±0.23、1.76±0.35、2.54±0.47。3组之间血清lncRNA NEAT1相对表达量差异有统计学意义（F=17.461，P<0.001）。见图1。

图1 3组lncRNA NEAT1相对表达量比较

2.3 正常对照组、疾病对照组和AMI组血清心肌酶谱和cTnI水平比较

与正常对照组和疾病对照组比较，AMI组cTnI、CK、CK-MB、LDH、AST水平升高（P<0.05）。与正常对照组比较，疾病对照组cTnI、CK、CK-MB、LDH、AST水平升高（P<0.05）。见表2。

表2 正常对照组、疾病对照组和AMI组血清心肌酶谱和cTnI水平比较

2.4 lncRNA NEAT1相对表达量诊断AMI的效能

ROC曲线分析结果显示，lncRNA NEAT1诊断AMI的曲线下面积（95%可信区间）为0.825（0.754～0.895），最佳临界值为1.595，Youden指数为0.582，敏感性为77.9%，特异性为80.3%；鉴别诊断AMI和UAP的曲线下面积（95%可信区间）为0.759（0.680～0.838），最佳临界值为1.385，Youden指数为0.478，敏感性为67.5%，特异性为78.3%。见图2、图3。

图2 lncRNA NEAT1相对表达量诊断AMI的ROC曲线

2.5 lncRNA NEAT1相对表达量与心肌酶谱和cTnI水平的相关性

Spearman相关分析和Pearson相关分析结果显示，lncRNA NEAT1相对表达量与CK、CKMB、LDH、AST和cTnI水平均呈正相关（r值分别为3.081、3.772、2.915、3.004、4.021，P<0.05）。

3 讨论

近年来，越来越多的证据表明lncRNA在心肌损伤中具有重要作用。动物实验结果显示，在心肌缺血再灌注损伤小鼠模型中，lncRNA NEAT1呈高表达，高水平的lncRNA NEAT1会促进心肌损伤，敲低lncRNA NEAT1可减轻心肌缺血再灌注损伤[10]。有研究结果显示，lncRNA NEAT1下调可显著抑制LDH、丙二醛、活性氧和内质网应激调节的心肌细胞凋亡[11-12]。由此可见，高表达的lncRNA NEATI与心肌损伤密切相关。郭俊等[13]的研究结果显示，老年AMI患者外周血lncRNA NEAT1表达显著上调，对AMI的早期诊断有一定的价值。CHEN等[14]的研究结果显示，血清外泌体lncRNA NEAT1是诊断急性ST段抬高型心肌梗死的有效生物标志物，与本研究结果一致。本研究结果显示，AMI患者血清lncRNA NEATI相对表达量显著高于疾病对照组和正常对照组（P<0.05）；ROC曲线分析结果显示，lncRNA NEAT1诊断AMI的曲线下面积为0.825，可作为诊断AMI潜在的分子标志物。

心肌酶谱和cTnI是常用的AMI诊断指标，AMI患者心肌酶谱和cTnI水平显著升高[15-16]。本研究Spearman相关分析和Pearson相关分析结果显示，lncRNA NEAT1相对表达量与CK、CK-MB、LDH、AST和cTnI均呈正相关（r值分别为3.081、3.772、2.915、3.004、4.021，P<0.05）。cTnI和CK-MB等生物标志物的定量检测可能会受抗凝剂使用等多种因素的影响，导致检测结果出现偏差，且cTnI一般是在AMI发生6 h后才出现升高，可能会导致漏诊等情况发生，降低了临床诊断效率[17]。因此，多种血清生物标志物的联合检测或可提高AMI早期诊断的准确性。

综上所述，AMI患者血清lncRNA NEAT1相对表达量显著升高，且与心肌酶谱和cTnI水平呈正相关，或可作为AMI潜在的生物标志物。