TIPE2 Ki67在子宫内膜癌组织中的表达及对预后的评估价值

周丽媛 施喆 刘悦君 李静霞 崔志利 安欣

子宫内膜癌是影响女性最重要的恶性肿瘤之一，占女性生殖系统疾病的37.7%［1］。近年来，子宫内膜癌的发病率逐年上升，且呈年轻化趋势［2］。虽然子宫内膜癌预后相对较好，67%的患者发现时处于早期，其5年总生存率可达81%，但IVA、IVB期患者的5年生存率仅为 17% 和 15%［3］，并且一旦复发，治疗困难、死亡率高。因此，准确判断子宫内膜癌的生物学行为特征及临床预后，为患者选择个体化的手术治疗方案，降低复发风险尤为重要。

肿瘤坏死因子诱导蛋白8样蛋白2（tumor necrosis factor α induced protein-8 like-2，TIPE 2）为先天免疫和适应性免疫的负调控因子，可抑制抗肿瘤免疫反应，维持免疫稳态［4-5］。肿瘤增殖抗原Ki-67（marker of proliferation Ki-67，Ki-67）是一种由MKI67基因编码的核蛋白，其表达与细胞的增殖活性正相关，可用作肿瘤标志物和判断肿瘤侵袭性的良好指标［6-7］。TIPE2、Ki67在子宫内膜癌组织中的表达差异对患者预后的影响尚未完全探明。鉴于此，本研究纳入子宫内膜癌患者120例、非子宫内膜癌患者130例，分析子宫内膜组织中TIPE2、Ki67的表达差异及对患者生存的影响，旨在评估TIPE2、Ki67在子宫内膜癌组织中的表达情况及其对患者预后的评估价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2018年1月至2020年1月河北工程大学附属医院妇科收治的子宫内膜癌患者120例作为观察组，另择同期收治的子宫肌瘤107例和子宫脱垂患者23例作为对照组，所有患者均接受手术治疗。回顾性收集患者临床及病理资料。研究对象均为女性，对照组年龄33～71岁，平均（57.05±6.95）岁；身体质量指数（body mass index，BMI）18～29 kg∕m2，平均（23.89±2.21）kg∕m2。观察组年龄34～73岁，平均（56.36±6.60）岁；BMI 18～28 kg∕m2，平均（23.48±2.57）kg∕m2。两组年龄、BMI等一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

纳入标准：①子宫内膜癌符合《子宫内膜癌诊断与治疗指南（第四版）》［8］中相关诊断标准者；②子宫肌瘤符合《子宫肌瘤的诊治中国专家共识》［9］中相关诊断标准者；③子宫脱垂符合《妇产科学》第9版［10］中相关诊断标准者；④近期未参与过其他临床研究者；⑤临床资料完整者。

排除标准：①有恶性肿瘤家族史、合并其他恶性肿瘤、甲亢者；②合并肝肾功能不全者；③术前接受放化疗、免疫治疗者；④合并子宫手术史者；⑤合并自身免疫性疾病、严重贫血者；⑥妊娠期或哺乳期者等。本研究获我院医学伦理委员会批准（批件号：2021［K］078）。

1.2 方法

1.2.1 实验室检查 子宫内膜组织标本固定、石蜡包埋、切片及免疫组化SP方法详见文献［11］。采用过氧化物酶标记的链霉卵白素试剂盒（B&D公司）检测石蜡切片中TIPE2、Ki67表达情况，鼠抗人TIPE2、Ki67单克隆抗体购自DAKO公司。结果判定：TIPE2阳性表达表现为细胞核或细胞浆见棕黄色颗粒，Ki67 阳性表达表现为细胞核被染成棕黄色。所有载玻片均采用双盲法进行半定量评分。从每个标本中随机抽取10个高倍视野，分别观察并记录肿瘤细胞中TIPE2、Ki67阳性染色细胞的百分比（0∶0%；1∶1%～25%；2∶26%～50%；3∶51%～75%；4∶76%～100%）和相应的染色强度（0：无染色；1：浅黄色；2.中等棕褐色；3：深棕褐色）。表达得分由上述两个分数的结果相乘得到，分数≤3分定义为阴性（-），＞3分者为阳性［11-12］。典型病理图片见图1。

图1 子宫内膜癌组织TIPE2、Ki67免疫组化阳性结果

1.2.2 临床资料收集 通过本院电子病历系统收集研究对象临床资料，包括年龄（＜60岁，≥60岁）、BMI（＜24 kg∕m2，≥24 kg∕m2）、国际妇产科联盟（FIGO，2009年）［13］分期、病理类型（内膜样腺癌、非内膜样腺癌）、淋巴结分级［14］（N0，N1）、肌层浸润深度（＜1∕2、≥1∕2）、组织学分级（高分化、中低分化）、TIPE2（阳性、阴性）、Ki67（阳性、阴性）。

1.3 观察指标

1.3.1 TIPE2、Ki67表达 采用免疫组织化学方法分析观察组、对照组子宫内膜组织中TIPE2、Ki67的表达情况。

1.3.2 子宫内膜癌患者预后分析 所有患者在规范治疗结束后开始随访，每3～6个月随访1次，随访方式为电话随访和门诊随访。随访内容包括是否定期复查，复查项目及结果；是否出现复发，复发症状及复发时间；是否死亡及死亡原因和时间等。随访终点为患者死亡或达到随访截止时间（2022年6月）。比较性别、年龄、BMI、FIGO分期、高血压病、糖尿病、病理类型、淋巴结分级、肌层浸润深度、组织学分级、手术方式、术后并发症、TIPE2及Ki67组间生存率的差异及对预后的影响。

1.4 统计学方法 使用SPSS 21.0统计软件进行分析。计数资料以［例（%）］表示，予以χ2检验或校正χ2检验进行比较。计量资料用表示，两组间差异比较采用t检验。TIPE2、Ki67与淋巴结转移的相关性用χ2检验和Phi （Φ）系数比较，Phi （Φ）系数表示两分类变量之间的关联程度：Φ＜0.3时，表示相关较弱；Φ＞0.6时，表示相关较强［15］。Kaplan-Meier法绘制生存曲线，组间生存分析用log-rankχ2检验，子宫内膜癌患者预后分析采用Cox比例风险回归模型。以P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 子宫内膜组织中TIPE2、Ki67表达水平比较 观察组TIPE2阳性率低于对照组，而Ki67阳性率高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 两组患者TIPE2、Ki67表达比较[例(%)]

2.2 TIPE2表达与子宫内膜癌患者预后的关系 对120例子宫内膜癌患者随访2年，生存93例，死亡27例，生存率77.50%。对子宫内膜癌患者2年生存率进行分析，结果显示：TIPE2阴性患者2年生存率为72.1%，TIPE2阳性患者为91.2%，Ki67阳性患者2年生存率为57.5%，Ki67阳性患者为87.5%，以上两组生存率比较，经log-rankχ2检验，差异有统计学意义（P＜0.05）。

Cox模型分析（病理类型、淋巴结分级、肌层浸润深度、组织分级、TIPE2、Ki67）显示，TIPE2阴性（HR=3.736，95%CI=1.016～13.157）是影响患者预后的独立危险因素（P＜0.05）。见表2、图2。

表2 子宫内膜癌患者预后的Cox回归模型分析

2.3 TIPE2表达与子宫内膜癌患者临床病理特征的关系 本研究按照TIPE2表达差异进行分组，结果显示TIPE2阴性与组织分化呈正相关，差异有统计学意义（χ2=18.397，Φ=0.392，P＜0.001）。见表3。

表3 子宫内膜癌组织TIPE2与组织分级的相关性分析

3 讨论

子宫内膜癌是常见的妇科恶性肿瘤，近年来，我国子宫内膜癌的发病率也呈现逐年升高的趋势［16］。手术是治疗子宫内膜癌的主要手段，但患者预后仍不乐观［17-18］。既往研究表明，TIPE2可通过抑制细胞外信号调节蛋白激酶1∕2及核转录因子NF-κB的表达，从而发挥抑制肿瘤微炎症环境的作用［19］。TIPE2还可抑制肿瘤细胞增殖、迁移及侵袭［20-21］。Ki67是一种广泛用于评估肿瘤增殖情况的标志物，肿瘤细胞增殖活跃时，Ki67表达增高［22］。

本研究中，120例子宫内膜癌患者2年生存率77.50%，与既往研究［23］结果类似。与正常子宫内膜组织相比，TIPE2阳性率在子宫内膜癌组织中低，Ki67阳性率高，且TIPE2阴性与子宫内膜癌不良预后相关。与此同时，TIPE2阴性与组织分化相关，与既往研究［11-12］结果一致。因此，TIPE2、Ki67表达情况对预后具有一定的评估价值，TIPE2可作为子宫内膜癌治疗的预后指标，为进一步研究TIPE2对子宫内膜癌细胞恶性生物学行为提供了一定临床依据。

本研究存在的不足之处包括：子宫内膜癌病理类型主要为内膜样腺癌，而非内膜样腺癌病例较少，尚不能反映TIPE2和Ki67水平对非内膜样腺癌患者预后的影响，需要进一步扩大样本量，增加非内膜样腺癌病例进行验证。此外，本课研究未针对TIPE2对子宫内膜癌恶性生物学行为的影响及相关的分子通路进行研究，将是本课题组以后的重点研究方向，以期为针对TIPE2的靶向治疗提供理论基础。