甲状腺乳头状癌患者超声及临床特征与BRAF 基因检测结果的相关性分析

王 妍，王小颖

（石家庄市人民医院超声科 河北 石家庄 050000）

甲状腺乳头状癌（papillary thyroid carcinoma，PTC）是甲状腺癌中常见的一种类型，大部分患者预后良好，但是仍有一定比例患者存在复发转移的风险[1]。超声是一种无创、简便及检查成本低的方式，是甲状腺疾病诊断及评估预后的首选方法[2-3]。目前，越来越多的甲状腺癌相关基因被发现，常见的有鼠类肉瘤滤过毒菌致癌同源体B1（V-rafmurinesarcomaviraloncogenehomolo gB1，BRAF）、RAS 和TERT 等基因突变，由此引起人们对PTC 癌起源的新认识[4]。BRAF 基因受到上游RAS蛋白激酶的调控，在细胞增殖、分化及凋亡中发挥重要作用，且其在MAPK 信号通路中也有一定作用[5-6]。有研究显示，BRAF 基因突变在PTC 中发生率很高，且其与患者病理特性及患者临床特征有关[7]。在中国，PTC 患者中常出现BRAF V600E 基因突变，突变率随着年龄增加而增大，且还与淋巴结转移及临床分期具有相关性[8-9]。临床考虑该基因突变可以作为PTC 淋巴结转移的独立危险因素[10]。目前，关于PTC 患者超声及临床特征与BRAF基因检测结果的相关性的研究较少，本研究则基于此问题进行探究。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性选取2022 年1 月—2023 年5 月在石家庄市人民医院接受治疗的甲状腺乳头状癌患者60 例，对所有患者均进行BRAF 基因检测，根据其检测结果（有无BRAF 基因突变）将患者分为两组，27 例发生BRAF 基因突变的患者纳入突变组，33 例未发生BRAF 基因突变的患者纳入野生组。

纳入标准：①患者在本院接受超声检查及BRAF 基因检测；②经手术病理学检验结果证实为甲状腺乳头状癌；③临床资料完整；④首次确诊患者，无既往甲状腺恶性肿瘤史；⑤无既往头颈放化疗史。排除标准：①临床诊断结果不明确患者；②合并其他恶性肿瘤患者；③患有严重血液系统疾病及凝血功能障碍患者；④伴精神疾病患者。

1.2 方法

超声检查：使用荷兰飞利浦公司EPIQ7 型彩色多普勒超声诊断仪，探头频率（3～12）MHz。行甲状腺超声检查，记录病灶位置、病灶数目、肿瘤最大直径、是否侵犯包膜、纵横比、边界、肿瘤回声类别、钙化等特征。由两名超声医生独立进行判读，最后统一检查结果。

BRAF 基因突变检测：手术切取PTC 组织进行检查。使用武汉海吉力生物科技有限公司生产的CatNO.ADx-TI01DNA 分离试剂盒提取DNA，利用紫外分光光度计测定DNA 浓度。利用琼脂糖凝胶电泳检测DNA 的完整性，使用ADx-ARMS-BRAF 检测试剂盒反转录反应合成cDNA，然后使用荧光定量PCR 仪进行PCR 扩增，将上述扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳分析。BRAF 上游引物：5'-ACCACCCAATACCACAGGAA-3'，下游引物：5'-CATTGGGAGCTGATGAGGAT-3'。标本突变位点扩增且CT 值＜28，判定为基因检测结果阳性，记为突变型；突变位点无扩增或CT 值≥28，记为野生型。

1.3 观察指标

①对两组患者行超声检查，探究其超声征象的异同；②检测患者的实验室指标，如患者的游离甲状腺素（FT4）、游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）、甲状腺刺激素（TSH）、甲状腺球蛋白抗体（TgAb）、甲状腺过氧化物酶抗体（TPOAb）水平；③收集患者的一般资料，进行单因素分析，探究可能对患者BRAF 基因突变产生影响的因素；④根据上述结果，采用皮尔逊相关系数探究超声及患者临床特征与患者BRAF 基因突变的相关性。

1.4 统计学方法

采用SPSS 23.0 统计软件进行数据处理，符合正态分布的计量资料以均数±标准差（）表示，采用t检验；计数资料以频数（n）、百分率（%）表示，采用χ2检验；采用皮尔逊（Pearson）相关系数对患者超声征象、临床特征与患者BRAF 基因的相关性进行分析。本研究以α=0.05 为检验水准。以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组超声征象比较

两组间在峡部距离是否＞2 mm、边界是否清晰、内部回声、有无钙化、血流是否丰富方面差异存在统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 两组超声征象比较[n（%）]

2.2 两组间FT4、FT3、TSH、TgAb、TPOAb 水平比较

突变组患者的FT4、FT3、TSH、TgAb、TPOAb 水平均高于野生组（P＜0.05），见表2。

表2 两组间FT4、FT3、TSH、TgAb、TPOAb 水平比较（）

表2 两组间FT4、FT3、TSH、TgAb、TPOAb 水平比较（）

2.3 两组临床特征比较

两组间在结节数目、肿瘤原发灶情况方面差异有统计学意义（P＜0.05），见表3。

表3 BRAF 基因突变临床特征分析

2.4 甲状腺乳头状癌患者超声征象及临床特征与BRAF 基因突变的相关性分析

对患者的超声征象、临床特征与患者BRAF 基因突变的相关性采用皮尔逊相关系数进行分析，结果见表4，可知BRAF 基因突变与患者的内部回声、血流特征、FT3、TSH、TgAb、TPOAb 间存在强正相关（P＜0.001），其r值分别为0.596、0.607、0.746、0.648、0.969、0.872。

表4 甲状腺乳头状癌患者超声征象及临床特征与BRAF 基因突变的相关性分析

3 讨论

PTC 在临床具有较高的发病率，且女性患者较男性多，该病经历多步骤、多节段、多因素的生物演变过程，但目前其确切的发病机制尚无定论[11]。BRAF 是RAF基因家族的成员，存在40 多种突变类型，该基因突变会影响细胞分裂、增殖过程，进而参与肿瘤的生成[12]。基因突变与PTC 的发生、淋巴结或远处转移具有密切关系，因此探讨该基因与PTC 的关系具有重要意义。

本研究利用超声来揭示PTC 进展情况在BRAF 基因突变组及未突变组间中的差异。结果显示：BRAF 基因突变组及未突变组间超声征象比较，在峡部距离是否＞2 mm、边界是否清晰、内部回声、有无钙化、血流特征是否丰富方面差异存在统计学意义，说明BRAF 基因突变与PTC 的侵袭性特征有关。现有的研究表明，多种原癌基因的激活及抑癌基因突变会促进PTC 的发生发展，而BRAF 是与PTC 关系最为密切的基因[13]。BRAF 基因第600 位氨基酸从缬氨酸（V）转变为谷氨酸（E），会使MAPK 通路激活，促进癌细胞增殖。已有研究证实，PTC BRAF 突变会增加淋巴结受累、远处转移概率，认为BRAF 基因突变和PTC 的高侵袭有相关性[14]。超声检查能够无创、实时获取甲状腺肿瘤形态、内部回声、血流信号、钙化特征等信息，这些特征同样可反映肿瘤的侵袭性。钙化是超声鉴别甲状腺良恶性肿瘤的特异性指标之一[15]。恶性肿瘤中，由于肿瘤细胞生长过快，其内血管及纤维过度增殖，易形成钙盐沉积，进而导致钙化的出现。PTC 细胞分裂较快，细胞侵袭力增强，使得细胞易向外侵袭，形成边界模糊、血流丰富的特征，使得其内部具有高回声[16]。本研究证明BRAF 基因突变与PTC 高侵袭性的超声特征有关，两者联合可成为PTC 的有效评估手段。

本研究结果显示，突变组患者的FT4、FT3、TSH、TgAb、TPOAb 水平高于野生组，在结节数目、肿瘤原发灶情况方面差异存在统计学意义。PTC 临床表现具有多样性，PTC 患者常出现多发结节及弥漫性肿大甲状腺，甲状腺素的生成受到影响，使患者处于甲状腺功能异常，FT4、FT3、TSH 水平往往异常，同时患者血清中抗体水平（TgAb、TPOAb）亦有明显升高。有研究显示，TSH升高是PTC 发生的危险因素，其水平与发病率及疾病进展呈正相关，PTC 中，BRAF 突变率达30%～80%，高于其他相关通路蛋白编码基因[17]。PTC 中BRAF-V600E突变后，会促进细胞衰老，使病变细胞停止分化，阻止肿瘤的恶化，进而使FT4、FT3、TSH、TgAb、TPOAb升高；同时BRAF-V600E 突变会增加导致TSH 受体表达增多，肿瘤在上述因子的刺激下会进一步增殖。本研究的PTC 患者中，肿瘤侵袭能力增加与BRAF-V600E突变状态有关，上述指标水平的增加也是肿瘤侵袭性改变的代偿反应。近年来国内外学者对PTC 患者肿瘤细胞的基因突变情况做了大量的研究[18-19]。本研究结果的出现可能与不同基因型的出现对PTC 的发生发展过程的影响不同有关。

本研究对PTC 患者的超声征象、临床特征与患者BRAF基因突变的相关性采用皮尔逊相关系数进行分析，结果可知BRAF 基因突变与患者的内部回声、血流特征、FT3、TSH、TgAb、TPOAb 间存在强正相关。提示PTC 患者BRAF 基因突变可能与患者超声征象、临床特征存在一定关联。以往有研究称，BRAF 基因突变与甲状腺肿瘤的分期、腺体外浸润及淋巴结转移具有重要关系[20-22]。结合本研究结果，分析是BRAF-V600E 突变能通过甲基化使抑癌基因沉默，降低PTC 的摄碘能力，增加其恶性程度及肿瘤侵袭转移能力。本研究结果中突变组及野生组之间的超声特征及临床特征存在差异。血清FT3、TSH、TgAb、TPOAb 检测结合颈部超声检查对PTC 的诊断帮助较大，结合BRAF 基因突变情况与上述特征的相关性，为临床诊疗提供更加全面的信息。

综上所述，PTC 患者BRAF 基因突变可能与患者超声征象及临床特征存在一定关联，患者BRAF 基因发生突变后，多表现为边界不清晰、内部回声非低回声、血流丰富，且TgAb、TPOAb 水平升高。