妊娠期高血压疾病患者血清长链非编码RNA BCYRN1的表达及其临床价值

邱小翠 吴燕 韩燕媚 云笑

妊娠期高血压疾病（hypertensive disorders of pregnancy，HDP）是一种妊娠期间出现的并发症，可造成早产、胎儿发育迟缓等不良妊娠结局[1-3]。目前关于HDP的发病机制仍不清楚，有研究认为炎症反应、氧化应激、滋养细胞浸润、血管内皮损伤以及表观遗传等均与HDP 有关[4-6]。炎性细胞因子如IL-6、IL-8 及TNF-α参与调节母胎免疫反应，在HDP 发生、发展中发挥重要作用[7-9]。长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA）BCYRN1 是一种＞200 个核苷酸的核酸序列，通过多条信号通路调节胎盘滋养层细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力，进而影响胎盘功能，导致子痫前期发生[10]。lncRNA BCYRN1 在HDP 中的应用价值尚未清楚，本研究通过检测血清lncRNA BCYRN1 在HDP 患者中的表达情况，分析其在预测疾病严重程度及不良妊娠结局中的临床价值，以期为HDP的防治提供参考。

1 对象和方法

1.1 对象 选取2020 年1 月至2022 年12 月海口市妇幼保健院收治的170 例HDP 患者，年龄23～45（28.96±3.52）岁，孕周34～41（37.65±1.53）周。纳入标准：（1）HDP诊断参考《妊娠期高血压疾病诊治指南（2020）》[11]；（2）年龄＞18 岁，均为单胎妊娠。排除标准：（1）孕前存在高血压或糖尿病，非自然受孕，多胎妊娠或胎儿发育畸形；（2）合并心肺疾病、恶性肿瘤、血液病或免疫性疾病。另选取同期产检正常孕妇50 名作为对照组，年龄22～40（28.50±2.83）岁，孕周36～39（37.40±1.28）周。本研究经本院医学伦理委员会审查通过，所有受检者均知情同意。

1.2 方法

1.2.1 临床分组 根据HDP 患者病情严重程度分为妊娠期高血压（gestational hypertension，GH）组45 例，轻度子痫前期（mild preeclampsia，MPE）组70 例，重度子痫前期（severe preeclampsia，SPE）组55 例。记录HDP患者出现不良妊娠结局情况，其中不良妊娠结局62 例（早产17 例、胎儿生长受限8 例、胎儿宫内窘迫23 例、胎盘早剥6 例、新生儿窒息6 例、死胎/死产2 例），妊娠结局良好108 例。

1.2.2 检测指标 所有受检者均在妊娠22 周时采集空腹静脉血5 mL，以3 500 r/min 离心10 min，分离血清置于-80 ℃冰箱保存待检。采用TRIzol 法提取总RNA，采用荧光定量PCR 法检测lncRNA BCYRN1 表达水平，lncRNA BCYRN1 引物序列：F-5'-GACGAACGACGTCAGGTCGA-3'，R-5'-TCAGAACTGTCTAGGCGATC-3'；反应条件为：94 ℃变性15 s，55 ℃退火30 s，70 ℃延伸30 s，40 个循环。采用2-ΔΔCt法计算lncRNA BCYRN1 相对表达量。另使用ELISA 法检测血清IL-6、IL-8、TNF-α水平，试剂盒购自深圳晶美生物工程公司。

1.3 统计学处理 采用SPSS 22.0 统计软件。计量资料以表示，两组间比较采用两独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析，组内两两比较采用非参数检验。绘制ROC曲线分析血清lncRNA BCYRN1 表达水平在预测HDP 患者不良妊娠结局中的价值，AUC 比较采用Z检验。采用多因素logistic 回归分析影响HDP患者不良妊娠结局的危险因素。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HDP 组和对照组一般临床资料比较 HDP 组收缩压、舒张压、血肌酐及24 h 蛋白尿均明显高于对照组，差异均有统计学意义（均P＜0.01），见表1。

表1 HDP 组和对照组一般临床资料比较

2.2 HDP 组和对照组血清lncRNA BCYRN1 及IL-6、IL- 8、TNF- α 水平比较 HDP 组血清lncRNA BCYRN1 表达水平显著低于对照组，血清IL-6、IL-8、TNF-α 水平均显著高于对照组，差异均有统计学意义（均P＜0.01），见表2。

表2 HDP 组和对照组血清lncRNA BCYRN1 及IL-6、IL-8、TNF-α 水平比较

2.3 不同严重程度HDP 患者血清lncRNA BCYRN1 及IL-6、IL-8、TNF-α 水平比较 SPE 组和MPE 组血清lncRNA BCYRN1 表达水平明显低于GH 组，且SPE 组低于MPE 组，差异均有统计学意义（均P＜0.01）。SPE组和MPE 组血清IL-6、IL-8、TNF-α 水平均明显高于GH 组，且SPE 组高于MPE 组，差异均有统计学意义（均P＜0.01），见表3。

表3 不同严重程度HDP 患者血清lncRNA BCYRN1 及IL-6、IL-8、TNF-α 水平比较

2.4 不同妊娠结局HDP 患者血清lncRNA BCYRN1 及IL-6、IL-8、TNF-α 水平比较 不良妊娠结局组血清lncRNA BCYRN1 表达水平明显低于妊娠结局良好组，而血清IL-6、IL-8、TNF-α 水平均明显高于妊娠结局良好组，差异均有统计学意义（均P＜0.01），见表4。

表4 不同妊娠结局HDP 患者血清lncRNA BCYRN1 及IL-6、IL-8、TNF-α 水平比较

2.5 影响HDP患者不良妊娠结局的危险因素分析 以HDP 患者是否发生不良妊娠结局为因变量，以所有影响因素为自变量进行多因素logistic 回归分析，结果显示血肌酐（OR=1.725，95%CI：1.207～3.316）、24 h蛋白尿（OR=1.951，95%CI：1.360～4.205）、lncRNA BCYRN1 表达水平（OR=3.117，95%CI：2.524～9.328）、IL-6 水平（OR=2.483，95%CI：1.695～5.940）、IL-8水平（OR=2.713，95%CI：1.902～6.827）及TNF-α水平（OR=1.992，95%CI：1.458～4.792）是影响HDP 患者不良妊娠结局的危险因素（均P＜0.01），见表5。

表5 影响HDP 患者不良妊娠结局的多因素logistic 分析

2.6 lncRNA BCYRN1 预测HDP 患者不良妊娠结局的价值 以HDP 患者最终发生不良妊娠结局为金标准，未发生不良结局的孕妇为参照组，结果显示，血清lncRNA BCYRN1 表达水平预测HDP 患者不良妊娠结局的最佳截断值为0.35，其AUC 大于IL-6（Z=6.217，P＜0.01）、IL-8（Z=7.105，P＜0.01）及TNF-α（Z=8.316，P＜0.01），灵敏度为0.857，特异度为0.842，见表6。

表6 lncRNA BCYRN1 预测HDP 患者不良妊娠结局的价值

3 讨论

HDP 是妊娠期妇女特有疾病，也是造成孕妇和围生儿发病和死亡的主要原因之一，严重威胁母婴健康[12-14]。因此，如何早期预防HDP 发生不良妊娠结局显得尤为重要。近年来研究发现，细胞炎性因子作为重要的炎症介质和免疫调节因子，在HDP 的发生、发展中扮演了重要的角色[15-16]。IL-6、IL-8 及TNF-α 是常见的炎性因子，参与炎性反应和诱导血管内皮细胞产生其他炎症介质，具有损伤内皮细胞及激活氧化应激的能力[17]。曹明等[18]发现相比对照组，IL-6、IL-8 及TNF-α 在HDP 患者中明显升高，这些炎性因子通过损伤血管内皮细胞和诱导滋养层细胞凋亡，导致胎盘功能受损，从而诱发HDP。lncRNA BCYRN1 是由人类染色体2p16 编码的非编码RNA 分子，调节多种生物学功能，可在转录水平、转录后水平及蛋白水平调控相关基因的表达，与呼吸系统、消化系统、神经系统及生殖系统疾病有着密切的关联[19]。Wu 等[20]研究发现，与正常组织相比，lncRNA BCYRN1 在卵巢癌组织中下调并且抑制卵巢癌细胞的增殖，具有抗癌药物敏感性，可能是卵巢癌新的治疗靶点。近期有研究报道，lncRNA BCYRN1 在SPE 患者胎盘组织中显著下调，通过激活相关信号通路来延迟子痫前期的发作，从而增加滋养层细胞的活力并阻止细胞凋亡，并最终参与HDP的发生、发展[10]。

本研究显示，HDP 组血清lncRNA BCYRN1 表达水平明显低于对照组，而血清IL-6、IL-8、TNF-α 水平均明显高于对照组，提示lncRNA BCYRN1 低表达可通过促进炎性因子释放，参与HDP 发病机制。随着HDP 患者病情程度加重，血清lncRNA BCYRN1 表达水平逐渐降低，而血清IL-6、IL-8、TNF-α 水平逐渐升高；不良妊娠结局组血清lncRNA BCYRN1 表达水平明显低于妊娠结局良好组，而血清IL-6、IL-8、TNF-α 水平均明显高于妊娠结局良好组。lncRNA BCYRN1 水平越低，HDP 患者病情越重，说明lncRNA BCYRN1 低表达和炎性因子高表达共同促进胎盘组织血管内皮细胞损伤，并最终加剧了HDP 进展。孙莎等[21]研究发现，炎症介质IL-6、TNF-α 参与HDP 发生、发展，血清IL-6、TNFα 水平升高对判断HDP 患者病情严重程度具有重要意义，可作为HDP 临床诊断及病情预测的指标。另有研究表明，lncRNA 在先兆子痫患者胎盘组织中下调，其低表达抑制滋养层细胞的迁移和侵袭，并促进其凋亡，在调节滋养层细胞功能中起着重要作用，为先兆子痫治疗提供了新的思路[22]。

本研究显示，lncRNA BCYRN1 低表达以及IL-6、IL-8、TNF-α 水平升高是影响HDP 患者不良妊娠结局的危险因素，提示lncRNA BCYRN1 水平下降可能是发生不良妊娠结局的预测因子。lncRNA BCYRN1≤0.35预测HDP 患者不良妊娠结局的AUC 大于IL-6、IL-8 和TNF-α，其灵敏度和特异度均最高。说明孕中期检测lncRNA BCYRN1 表达水平能很好地预测HDP 患者不良妊娠结局，对不良预后的筛查具有很大的帮助。Dai等[23]研究也证实，lncRNA 在HDP 中存在异常表达，与HDP 病情进展有关，对诊断HDP 及不良妊娠结局具有较高的价值，有望作为该病的分子标志物。

综上所述，HDP 患者lncRNA BCYRN1 呈低表达，是影响HDP 患者不良妊娠结局的危险因素，可作为预测HDP 患者不良妊娠结局的参考指标，具有较好的临床前景。但由于lncRNA BCYRN1 的表达及功能研究尚处于初步阶段，lncRNA BCYRN1 参与HDP 发生、发展的具体机制还待进一步深入研究。