高效液相色谱-串联质谱法测定食品中新利司他

何晓燕，郑紫蔚

(通标标准技术服务有限公司广州分公司，广东 广州 510663)

随着经济和生活水平的提高，当今社会肥胖的人群日渐增加，肥胖不仅影响人的外表，同时对人身体健康的危害很大。研究表明肥胖会引起一系列的并发症，是糖尿病、高血压、心脑血管疾病等的高危诱发因素[1]。因此近年来治疗肥胖的减肥药物的研发趋势迅猛，出现了许多有效的减肥药物，比如由日本武田公司和英国Alizyme公司联合研发的减肥药新利司他，是一种新型的胃肠道脂肪酶抑制剂[2]，通过抑制胃脂肪酶和胰脂肪酶的活性使其不能将脂肪水解为可吸收的单酰甘油和游离脂肪酸，抑制人体对摄入食物中脂质的吸收，从而达到减肥的作用[3-4]。新利司他最大的优点在于它不抑制神经系统而影响食欲，不会进入血液，不需要限制饮食，具有更高的安全性[5-6]。

相较于药品而言，人们对保健品和食品有更高的接受度，因此有一些不法商家在食品和保健品中添加新利司他等减肥药，以赋予食品和保健品原本不具有的减肥功效，并大肆宣传使消费者信服并购买，来谋取不义之财。此种行为违反了我国现行的《食品安全法》第三十八条明确规定：“生产经营的食品中不得添加药品”。目前专门用于检测食品中新利司他的文献研究较少，为了打击这种违法行为，急需建立一种简便快捷高效的检测食品中非法添加新利司他的检测方法。因此，本试验对食品中新利司他的含量检测进行研究。本文采用甲醇对食品中的新利司他进行提取，借助高效液相色谱-质谱联用仪建立食品中新利司他含量的检测方法，为快速高效地测定新利司他含量提供了新的思路。

1 实 验

1.1 试剂与仪器设备

1.1.1 试剂

甲醇(HPLC级)，乙酸铵(色谱纯)，新利司他(纯度99.9%)，Alta公司。

1.1.2 仪器及设备

高效液相色谱-质谱联用仪、配有电喷雾(ESI)离子源(AB Sciex 4000 Qtrap)、分析天平(METTLER TOLEDO)、移液器(BRAND)、超纯水仪(MILLIPORE)、水浴超声仪(CREST)、离心机(SIGMA)、PTFE滤膜(0.22 μm)，上海安谱实验科技股份有限公司。

1.2 标准储备液和标准工作溶液配制

一级标准储备液：准确称取新利司他标准物质10.0 mg至10 mL容量瓶，用甲醇溶解并定容至刻度，配制成1 000 mg/L的一级标准储备液。

二级标准储备液：移取100 μL 1 000 mg/L一级标准储备液于10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度线，配制成10 mg/L的二级标准储备液。

标准中间溶液：移取100 μL 10mg/L二级标准储备液于2 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度线，配制成500 μg/L的标准中间溶液。

1.3 试样制备

取所有试样充分搅碎，均质或粉碎混匀，蜜饯样品粉碎至2 mm以下，果冻样品充分搅碎至浆状，含CO2的液体饮料样品通过加热或者超声去除二氧化碳，含有乙醇的试样通过60 ℃水浴加热去除乙醇。制备好的试样于4 ℃冰箱保存。

准确称取1.0 g(精确至0.001 g)样品于50 mL具塞刻度离心管中，加入20 mL甲醇，超声提取20 min，超声过程中摇匀2～3次，冷却至室温，用甲醇稀释至25 mL并摇匀，取5 mL溶液经4 000 r/min离心5 min，用0.22 μm微孔PTFE滤膜过滤，待高效液相色谱-串联质谱仪测定。

1.4 高效液相色谱-串联质谱测试条件

高效液相色谱条件：色谱柱为Waters ACUITY UPLC BEH C8(2.1 mm×100 mm，1.7 μm)；流动相：5 mmol/L乙酸铵溶液-甲醇(5∶95)；流速：0.4 mL/min；柱温：50 ℃；样品盘温度：10 ℃；进样量：5 μL；运行时间：8 min。

质谱条件：电喷雾离子化源，正离子模式；离子源温度：550 ℃，离子源电压：5 500 V，气帘气(CUR)为20 psi，雾化气(GS1)为45 psi，辅助加热气(GS2)为50 psi，选择监测离子(m/z)为160、177.9。

表1 质谱参数

2 结果与讨论

2.1 提取溶剂的确定

新利司他采用标准BJS202209《食品中双醋酚丁等19种化合物的测定》的前处理方法中的提取溶液(50%甲醇溶液(含0.1%甲酸))来提取时，新利司他的响应值很低，原因可能是因为新利司他在酸性条件下不稳定。由于新利司他在甲醇中具有良好的溶解性且性质稳定[7]，且经实验验证，其响应值更高，结果精密度更好，因此本方法采用甲醇作为提取溶剂。该前处理过程简便快捷，提取效率高，适用于多种基质的样品，且对试样中的新利司他有良好的回收。

2.2 仪器条件的优化

2.2.1 色谱柱的确定

由于新利司他在C18柱上保留较强，难洗脱[8]，改用C8柱用高比例的有机相甲醇(95%)可以较容易地洗脱下来，因此改用C8柱(Waters ACUITY UPLC BEH C8，2.1 mm×100 mm，1.7 μm)作为色谱柱。

2.2.2 流动相的确定

由于新利司他在含有酸的体系(流动相的A相为0.1%甲酸水，B相为0.1%甲酸甲醇)中不稳定，精密度差，标准曲线的线性也不佳，因此将流动相A相由0.1%甲酸水改为5 mmol/L乙酸铵，流动相中的乙酸铵可以促进目标物的电离，提高其离子化效率。将流动相B相由0.1%甲酸甲醇改为甲醇。经过实验，在该条件下连续分析100 μg/L新利司他的标准溶液6次，新利司他的响应值稳定，RSD为6.7%，精密度好。

如图1所示，可获得最优的分离效果和质谱信号响应，色谱峰对称性好，峰宽较窄。

图1 250 μg/L新利司他标准溶液色谱图

2.3 标准工作曲线和检出限

准确移取适量的新利司他标准中间溶液，配制成10，50，100，250，500 μg/L的标准工作溶液，注入高效液相色谱-质谱仪中测定，以新利司他峰面积响应为纵坐标，以新利司他质量浓度为横坐标，绘制标准曲线。图2为新利司他标准工作曲线图，新利司他在10～500 μg/L质量浓度范围内的线性方程为y=1.456 1x+10.402，相关系数r=0.999，结果表明本方法对新利司他的检出具有良好的线性。对压片糖果，饮料，果冻，蜜饯，其他糖果，果蔬粉样品独立分别进行10个样品10 μg/L加标考察，结果见表2，由此得到本方法的检测限为0.018～0.066 mg/kg，定量限为0.06～0.22 mg/kg。

图2 新利司他标准曲线

表2 样品加标检出结果

2.4 精密度和回收试验

在1.0 g压片糖果样品、饮料样品、果冻样品、蜜饯样品、其他糖果样品、果蔬粉样品中分别加入3个浓度水平的新利司他标准溶液，添加水平相当于10，100，500 μg/L，每个加标水平平行测定6次，按照本试验的仪器方法进行测定，计算新利司他的加标回收率和相对标准偏差(RSD)，以考察该方法的准确度和精密度，其结果见表3。新利司他在10，100，500 μg/L三个加标水平下的平均回收率为81.1%～115.3%，RSD值在2.4%～7.0%间，由此可知，本方法对不同样品具有较好的重复性，获得的检测数据准确可靠。

表3 精密度与回收试验结果

2.5 实际样品分析

采用本方法对市面上压片糖果，蜜饯，果冻，除含乳饮料外的饮料，果蔬粉等不同基质类型的20份样品进行测定，每份样品做2个平行试验，结果取平均值。经检测，所有样品均未检出新利司他。

3 结 论

本文建立了一种检测新利司他含量的测定方法，以甲醇作提取溶剂，超声提取20 min，并确定了高效液相色谱-串联质谱仪的检测条件。新利司他在10、100、500 μg/L 3个加标水平下的回收率为81.1%～115.3%，相对标准偏差在2.4%～7.0%之间，不同基质样品的检测限范围为0.018～0.066 mg/kg，定量限范围为0.06～0.22 mg/kg，分析表明该方法对新利司他的检测灵敏度高，稳定性好，且前处理过程简单快捷，适用于不同基质样品。