市售香砂养胃丸质量评价*

仝立卿，毛颐晴，曹 玉

（南京市食品药品监督检验院，江苏南京 211198）

香砂养胃丸为《国家基本药物目录》（2012 年版）收录的甲类药品，由木香、砂仁、陈皮、枳实（炒）、厚朴、香附等14味药材组方，具有温中和胃功效，临床用于治疗胃阳不足、湿阻气滞所致胃痛［1］。香砂养胃丸包括水丸、浓缩丸、大蜜丸3种剂型，现行质量标准仅考察了陈皮、枳实和厚朴指标成分的含量，未涉及君药木香，故无法防控木香伪品风险。指纹图谱技术可实现对中药内在化学成分的综合评价和对整体质量的全面控制［2-8］。目前，仅见香砂养胃丸浓缩丸的水提液和不同极性部位的高效液相色谱指纹图谱研究［9-10］，以及水丸的特征图谱研究［11］。本研究中建立了香砂养胃丸3种剂型的超高效液相色谱（UPLC）指纹图谱，并对55 批市售香砂养胃丸进行相似度评价，同时检测样品中是否混用川木香、土木香和藏木香，旨在为全面控制及评价香砂养胃丸的质量提供参考。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Waters Acquity H - Class 型超高效液相色谱仪（美国Waters 公司）；XPE26 型、XSE205 型电子天平（瑞士Mettler Toledo 公司，精度为0.01 mg）；KQ - 250 型超声仪（昆山市超声仪器有限公司）；DQ5 型超纯水仪（美国Millipore公司）。

1.2 试药

市售香砂养胃丸55 批，其中水丸样品35 批（生产企业代号S1 - S35），浓缩丸样品18 批（生产企业代号S17、S36 - S46，其中S38 - S40 企业、S44 - S46 企业各有2 批），大蜜丸样品2 批（生产企业代号S26、S33）。木香药材和饮片23 批（1 号- 23 号），川木香药材和饮片4 批（1 号- 4 号）；紫丁香苷对照品（批号为111574 -202106，含量94.3%）、柚皮苷对照品（批号为110722 -202116，含量93.5%）、新橙皮苷对照品（批号为111857-201804，含量99.4%）、甘草苷对照品（批号为111610 -201908，含量95.0%）、甘草酸铵对照品（批号为110731-202021，含量96.2%）、厚朴酚对照品（批号为110729 -202015，含量99.0%）、和厚朴酚对照品（批号为110730-201915，含量99.8%）、木香烃内酯对照品（批号为111524 - 201911，含量99.9%）、去氢木香内酯对照品（批号为111525-201912，含量99.5%）、橙皮苷对照品（批号为110721 - 202019，含量95.3%）、川陈皮素对照品（批号为112055- 202102，含量99.7%）、土木香内酯对照品（批号为110760-201811，含量99.4%）、异土木香内酯对照品（批号为110761-201806，含量97.4%），木香对照药材（批号为120921 - 202010）、砂仁对照药材（批号为120985 - 201406）、枳实对照药材（批号为120936 - 201606）、陈皮对照药材（批号为120969 -202011）、甘草对照药材（批号为120969 - 202011）、半夏对照药材（批号为121272 - 201806）、广藿香对照药材（批号为121135 - 202107）、白术对照药材（批号为120925 - 202013）、香附对照药材（批号为121059 -201808）、厚朴对照药材（批号为121285 - 201303）、川木香对照药材（批号为121091-201104）、藏木香对照药材（批号为121630-201001）、土木香对照药材（批号为121090 - 201803），均购自中国食品药品检定研究院。维采宁Ⅱ对照品（天津阿尔塔科技有限公司，批号为FS1601540，含量99.4%）；芸香柚皮苷对照品（上海诗丹德标准技术服务有限公司，批号为10285，含量98.7%）。甲醇、乙腈、磷酸均为色谱纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 指纹图谱建立

2.1.1 色谱条件

色谱柱：Acquity UPLC®HSS T3 柱（150 mm ×2.1 mm，1.8 μm）；流动相：乙腈（A）- 0.1%磷酸水溶液（B），梯度洗脱（0～8.5 min 时5%A →20%A，8.5～12 min 时20%A，12～22 min 时20%A →30%A，22～30 min时30%A →47%A，30～40 min时47%A →50%A，40～50 min 时50%A →70%A，50～53 min 时70%A，53～60 min 时70%A →90%A）；流速：0.3 mL/ min；检测波长：275 nm（0～13 min），284 nm（13～25 min），254 nm（25～35 min），225 nm（35～60 min）；柱温：30 ℃；进样量：2 μL。

2.1.2 溶液制备

取紫丁香苷、维采宁Ⅱ、柚皮苷、新橙皮苷、芸香柚皮苷、橙皮苷、甘草苷、甘草酸铵、厚朴酚、和厚朴酚、木香烃内酯、去氢木香内酯、川陈皮素对照品各适量，加甲醇制成质量浓度分别为20.78，27.79，28.50，37.91，26.90，97.45，28.09，31.15，100.40，69.75，42.14，62.88，41.29 μg/mL 的混合对照品溶液。取浓缩丸、水丸样品（研细）、大蜜丸样品（剪碎）各2.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，称定质量，超声（功率250 W，频率40 kHz）处理30 min，放冷，再次称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，经0.22 μm滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。取木香、砂仁、枳实、陈皮、甘草、半夏、广藿香、白术、香附、厚朴对照药材各0.5 g，精密称定，按供试品溶液制备方法制备单一对照药材溶液。

2.1.3 方法学考察

精密度试验：取水丸样品（批号为20220101）适量，按2.1.2 项下方法制备供试品溶液，按2.1.1 项下色谱条件连续进样测定6 次，记录峰面积。以9 号色谱峰（橙皮苷）为参照峰，结果各色谱峰相对峰面积的RSD均小于3.50%（n=6），表明方法精密度良好。

稳定性试验：取供试品（批号为20220101）溶液适量，室温下分别于0，2，4，8，16，24 h 时按2.1.1 项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以9 号色谱峰（橙皮苷）为参照峰，结果各色谱峰相对峰面积的RSD均小于3.50%（n=6），表明供试品溶液在室温下放置24 h内基本稳定。

重复性试验：取水丸样品（批号为20220101）和浓缩丸样品（批号为210616）各适量，各6 份，按2.1.2 项下方法制备供试品溶液，按2.1.1项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以9号色谱峰（橙皮苷）为参照峰，结果各色谱峰相对峰面积的RSD均小于3.50%（n= 6），表明方法重复性良好。

2.1.4 指纹图谱建立

取水丸、大蜜丸、浓缩丸样品各适量，按2.1.2项下方法制备供试品溶液，按2.1.1 项下色谱条件进样测定。将色谱图导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012 版）软件，时间窗宽度设为0.10 min，按平均数法，经多点校正后自动匹配，分别生成UPLC 叠加指纹图谱及对照指纹图谱。详见图1和图2（其中浓缩丸由于工艺不同，18 号、20 号峰缺失；X、Y 色谱峰分别为柚皮苷峰和新橙皮苷峰）。结果水丸和大蜜丸各确定23个共有峰，浓缩丸确定21个共有峰。

a. 水丸 b. 浓缩丸 c. 大蜜丸图1 各企业香砂养胃丸超高效液相色谱叠加指纹图谱a.Water pills b.Concentrated pills c.Big honeyed pillsFig.1 UPLC superimposed fingerprint of Xiangsha Yangwei Pills from various enterprises

a. 水丸 b. 浓缩丸 c. 大蜜丸图2 香砂养胃丸超高效液相色谱对照指纹图谱a.Water pills b.Concentrated pills c.Big honeyed pillsFig.2 UPLC reference fingerprint of Xiangsha Yangwei Pills

2.1.5 共有峰指认、归属及参照峰选择

取2.1.2 项下混合对照品溶液和单一对照药材溶液各适量，按2.1.1 项下色谱条件进样测定，记录色谱图（见图3和图4）。根据对照品溶液色谱峰的保留时间，共指认11个成分，分别为紫丁香苷（峰3）、维采宁Ⅱ（峰5）、甘草苷（峰7）、芸香柚皮苷（峰8）、橙皮苷（峰9）、甘草酸铵（峰11）、川陈皮素（峰12）、和厚朴酚（峰15）、木香烃内酯（峰16）、去氢木香内酯（峰19）、厚朴酚（峰22）。将样品对照指纹图谱与对照药材色谱图对比，水丸、大蜜丸均归属12 个共有峰，浓缩丸归属10 个共有峰。1 号、2 号峰同时归属陈皮和枳实，10 号峰归属陈皮；4 号峰归属砂仁；21 号峰归属厚朴；17 号峰归属白术；23 号峰归属半夏，6 号、13 号、14 号、18 号峰归属广藿香，20号峰归属香附。其中9 号峰橙皮苷为陈皮、枳实的指标性成分，该峰保留时间适中、吸收强、分离度好，故作为参照峰。

3. 紫丁香苷 5. 维采宁Ⅱ 7. 甘草苷 8. 芸香柚皮苷 9. 橙皮苷11. 甘草酸铵 12. 川陈皮素 15. 和厚朴酚 16. 木香烃内酯19. 去氢木香内酯 22. 厚朴酚图3 混合对照品溶液超高效液相色谱图3.Syringin 5.Vicenin Ⅱ 7.Liquiritin 8.Narirutin 9.Hesperidin 11.Glycyrrhizic acid ammonium salt 12.Nobiletin 15.Honokiol 16.Costunolide 19.Dehydrocostus lactone 22.MagnololFig.3 UPLC chromatograms of mixed reference solution

C1. 香附 C2. 砂仁 C3. 广藿香 C4. 半夏 C5. 白术C6. 枳实（炒） C7. 木香 C8. 厚朴 C9. 甘草 C10. 陈皮图4 对照药材溶液超高效液相色谱图C1.Cyperi Rhizoma C2.Amomi Fructus C3.Pogostemonis Herba C4.Pinelliae Rhizoma C5.Atractylodis Macrocephalae Rhizoma C6.Stir-fried Aurantii Fructus Immaturus C7.Aucklandiae Radix C8.Magnoliae Officinalis Cortex C9.Glycyrrhizae Radix et Rhizoma C10.Citri Reticulatae PericarpiumFig.4 UPLC chromatograms of reference medicinal solution

2.1.6 相似度评价

取35 批水丸样品、18 批浓缩丸样品、2 批大蜜丸样品各适量，精密称定，按2.1.2 项下方法制备供试品溶液，按2.1.1 项下色谱条件进样测定，得UPLC 色谱，将数据导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012 版）软件，结果见表1，提示不同生产企业和不同批间样品的质量可能存在差异。浓缩丸的相似度与水丸和大蜜丸相比更低，相似度低于0.90 的水丸样品占8.57%，浓缩丸样品占55.56%，大蜜丸样品占50.00%。

2.2 木香掺伪检查

2.2.1 溶液制备

分别取木香烃内酯、去氢木香内酯、土木香内酯和异土木香内酯对照品各适量，加甲醇制成各成分质量浓度均为50 μg/mL 的混合对照品溶液。取木香、川木香、土木香和藏木香对照药材各0.5 g，精密称定，按2.1.2 项下方法制备单一对照药材溶液。取55 批样品，按2.1.2 项下方法制备供试品溶液。取23 批木香药材和饮片及4 批川木香药材和饮片各1 g，精密称定，按2.1.2项下方法制备单一药材溶液。

2.2.2 方法与结果

取上述溶液各适量，按2.1.1项下色谱条件进样测定，记录色谱图。详见图5。计算木香烃内酯与去氢木香内酯的峰面积比值，结果见表1和表2。

表2 川木香与木香峰面积比值Tab.2 Peak - area ratio of costunolide to dehydrocostus lactone in Vladimiriae Radix and Aucklandiae Radix

1.木香烃内酯 2.去氢木香内酯 3.异土木香内酯 4.土木香内酯A. 供试品溶液（样品批号210616） B. 混合对照品溶液C-F. 对照药材溶液（分别为藏木香、土木香、木香、川木香）图5 木香掺伪检查超高效液相色谱图1.Costunolide 2.Dehydrocostus lactone 3. Isoalantolactone 4.AlantolactoneA.Test solution（sample batch number：210616） B.Mixed reference solution C-F.Reference medicinal solution（Inula racemosa，Inulae Radix，Aucklandiae Radix，Vladimiriae Radix，respectively）Fig.5 UPLC chromatograms of adulteration inspection of Aucklandiae Radix

不同木香药材样品比较：木香与川木香药材均检出木香烃内酯、去氢木香内酯，土木香与藏木香药材均检出土木香内酯、异土木香内酯。55批样品中均未检出土木香内酯与异土木香内酯，提示未混用藏木香或土木香。

木香与川木香药材区分：木香药材、饮片（1号-23号）的平均峰面积比值为1.12；川木香药材、饮片（1 号-4 号）的平均值为0.49，均与对照药材接近。水丸、大蜜丸和浓缩丸的平均峰面积比值分别为0.96，1.04，0.71。初步确定峰面积比值＜0.6的为川木香，≥0.6的木香。结果4 批水丸和2 批浓缩丸（涉及6 个厂家）木香烃内酯与去氢木香内酯的峰面积比值＜0.6，可能混有川木香。

3 讨论

预试验中流动相考察了乙腈-0.1%磷酸水溶液、乙腈-水和乙腈-0.1%甲酸水溶液，根据分离效果和色谱峰峰形，最终采用乙腈- 0.1%磷酸水溶液（梯度洗脱）；根据二极管阵列检测器在190～400 nm 波长内的扫描结果，在不同时间段进行275，284，254，225 nm波长的切换，检测到的色谱峰最多，且基线稳定；考察了样品前处理的提取溶剂50%甲醇、70%甲醇、甲醇，并比较超声提取和加热回流提取的提取效果，结果以甲醇超声提取30 min时各组分的提取效率较高。

2020 年版《中国药典》中枳实为芸香科植物酸橙及其栽培变种或甜橙的干燥幼果，以酸橙投料的制剂样品中能检出橙皮苷、柚皮苷和新橙皮苷，以甜橙投料的制剂样品仅检出橙皮苷，故柚皮苷和新橙皮苷未列入对照指纹图谱共有峰。

香砂养胃丸中水丸、大蜜丸均为全原粉入药，制剂工艺简单；浓缩丸工艺复杂，木香等7 种药材提取挥发油成分后再混合入药，提取与混匀过程中可能造成挥发性成分含量降低，影响其与对照指纹图谱的一致性。本研究中建立的UPLC 指纹图谱，可同时检测制剂中是否混用土木香和藏木香，且在木香与川木香鉴别中，初步拟定峰面积比值低于0.6的为川木香；但由于药材和饮片的新鲜程度、存储时间、制备工艺等会影响木香烃内酯和去氢木香内酯的含量［12-13］，故不能完全排除样品中川木香和木香混用的可能。本研究结果显示，生产厂家S17的1批次水丸和1批次浓缩丸样品的相似度均低于0.850，峰面积比值与该厂家提供的木香16号药材测得峰面积的比值相差较大。故该厂家的香砂养胃丸实际投料用的原料木香可能存在质量问题或投料量不足，其制备工艺也可能存在缺陷。

综上所述，本研究中建立的方法能同时鉴定香砂养胃丸中木香及其易混品，从而可对制剂质量进行快速评价。