甘草和芦丁配伍对产蛋后期蛋鸡生产性能、蛋品质以及抗氧化水平的影响

李妍，片慧芳，杜旭彬，虞德兵*

(1. 南京农业大学动物科技学院，江苏 南京 210095；2. 南京农业大学动物医学院，江苏 南京 210095)

近些年来，随着人们消费水平的日益提高，国人普遍追求绿色无污染的畜禽产品。抗生素在提高畜禽生产性能、改善蛋品质的同时，也造成了动物食品抗生素残留等问题。因此迫切地需要寻找一种绿色无污染的饲料添加剂替代抗生素的使用。中草药作为一种唯一允许使用的促生长类药物饲料添加剂，同时又具有抗氧化、促生长的功能。因此，开发使用中草药添加剂作为新型饲料添加剂替代抗生素具有重要意义。

甘草为豆科植物乌拉尔甘草Glycyrrhizauralensis，光果甘草G.glabra，胀果甘草G.inflata的干燥根及根茎。最早记载于《神农本草经》，具有补脾益气、止咳祛痰、调和药性的功效[1]。现代药理研究表明，甘草具有抗病毒[2]、抗炎[3]等广泛的药理活性。李松桥等[4]研究表明，在黄羽肉鸡的基础日粮中添加4%的枸杞渣和甘草混合物能够在生产性能方面达到和添加抗生素同等的效果。

芦丁(rutin)又称芸香苷、维生素P等，是广泛存在于槐米、荞麦、芸香等植物中的一种多酚生物类黄酮[5]，芦丁作为黄酮类化合物的典型代表，在心脑血管疾病的治疗方面应用广泛。芦丁化合物具有广泛的生物效应，包括抗炎[6]、抗氧化[7]等。通过体内试验研究发现，芦丁可以通过上调过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)等内源抗氧化酶的表达来增强细胞氧化的防御系统[8]。

目前，尚未有关于甘草和芦丁配伍使用的相关研究，因此本试验通过在产蛋后期的蛋鸡中添加不同剂量的甘草与芦丁，从蛋鸡的生产性能，蛋品质，血清中激素水平以及肠道抗氧化等方面系统评估甘草和芦丁配伍使用的效果，以期为甘草和芦丁在海兰褐壳蛋鸡上的应用，以及开发甘草和芦丁开发相关产品提供理论和实践基础。

1 材料与方法

1.1 试验材料

甘草粗提物粉剂(来自什邡恒瑞康生物科技有限公司)和芦丁粉剂(来自什邡恒瑞康生物科技有限公司)；试验在南京市浦口区高老庄养殖基地进行；试验鸡品种为海兰褐壳蛋鸡。

1.2 试验设计与饲养管理

选取300只380日龄的海兰褐壳蛋鸡，随机分为5组，每组3个重复，每个重复20只鸡。Ⅰ 组为对照组，仅饲喂基础日粮；Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组为试验处理组，分别在饲喂基础日粮的基础上添加甘草+芦丁(300 mg/kg+100 mg/kg、300 mg/kg+200 mg/kg、600 mg/kg+100 mg/kg、600 mg/kg+200 mg/kg)。在进行正式试验之前，对5组鸡只进行为期7 d的预试验；确保5组鸡只产蛋均匀后，进行正式试验；正式试验周期为42 d。采用立体三层笼养，每层饲养20只鸡；15 h光照，乳头式饮水器供水。试验季节为夏季，鸡舍内温度维持在(30±2)℃，早、晚湿度为(90±2)%，中午湿度较低，昼夜温差较大。试验期间蛋鸡每天定点饲喂日粮，每天2次；自由饮水。

表1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础)

1.3 样本采集

于试验进行42 d时，每个重复随机选取2只体重相近、健康状况良好的蛋鸡禁饲12 h(不禁水)用于屠宰试验。从颈动脉处放血，采集血液于离心管中，3 000 r/min离心15 min，取上清液(血清)并于-80 ℃保存备用。待鸡只死亡后剖开腹腔采集空肠组织3～5 cm，将5 cm的肠段纵向打开，用冷生理盐水冲洗内容物。使用无菌玻璃显微镜载玻片通过刮擦收集黏膜，在液氮中快速冷冻，然后-80 ℃储存。

1.4 测定指标及方法

1.4.1 生产性能指标测定

每天记录各重复鸡只的产蛋数及蛋重，每7 d统计1次采食量，计算饲养日产蛋率、平均蛋重、平均日采食量以及料蛋比。

1.4.2 蛋品质指标测定

试验结束后，以重复为单位随机抽取3枚鸡蛋，每组9枚，用以检测蛋形指数、蛋白高度、蛋黄颜色、蛋黄重、哈氏单位、蛋壳厚度及蛋壳强度等指标。蛋形指数和蛋壳厚度采用游标卡尺测定；蛋壳强度采用蛋壳强度测定仪(KQ-1A型)检测(北京天翔飞域科技有限公司)；蛋白高度、哈氏单位和蛋黄颜色采用EMT-7300型多功能蛋品质自动分析仪检测(日本Touhoku Rhythm Co. Ltd.公司)；蛋黄在分离蛋清后采用电子天平进行称重。

1.4.3 血清及空肠黏膜抗氧化水平相关指标测定

测定蛋鸡血清、空肠黏膜中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和丙二醛(MDA)含量，(试剂盒购自南京建成生物工程研究所)，按照生产商的说明操作。

1.4.4 血清中相关激素指标测定

用酶联免疫检测试剂盒测定蛋鸡血清中雌二酮(E2)、促卵泡素(FSH)、孕酮(P4)、促黄体素(LH)含量，试剂盒购自南京建成生物工程研究所，按照生产商的说明书方法进行操作。

1.5 统计分析

所有数据由Excel 2019初步整理后，通过使用SPSS 20.0软件的单向变异分析(ANOVA)分析所有数据，使用Duncan进行多重比较评估组间的差异，结果用“平均值士标准误”表示，P<0.05作为差异显著性判断标准，P<0.01为差异极显著判断标准。

2 结果分析

2.1 不同添加水平的甘草和芦丁对蛋鸡生产性能的影响

添加不同水平的甘草和芦丁后，对蛋鸡生产性能的测定结果见表2。试验前3周，与对照组相比，饲粮中添加不同水平的甘草和芦丁对产蛋率、平均蛋重、平均日采食量、料蛋比均无显著影响(P>0.05)。在试验4～6周，与对照组相比，Ⅲ组和Ⅴ组产蛋率均有显著提高(P<0.05)，分别提高了9.56%和10.56%；Ⅴ组比对照组平均蛋重有极显著提高(P<0.01)，较对照组提高了7.63%；各试验组料蛋比均有极显著下降(P<0.01)，分别降低了10.53%、11.74%、10.53%、14.17%；而平均日采食量与对照组相比无显著差异(P>0.05)。在整个试验期间，与对照组相比，Ⅲ组和Ⅴ组产蛋率均有极显著提高(P<0.01)，分别提高了7.90%和9.46%。Ⅴ组平均蛋重有显著提高(P<0.05)，较对照组提高了5.58%。各试验组料蛋比均有极显著下降(P<0.01),分别降低了6.58%、9.88%、7.82%、11.93%。而平均日采食量与对照组相比无显著差异(P>0.05)。

表2 不同添加水平的甘草和芦丁对蛋鸡生产性能的影响

2.2 不同添加水平的甘草和芦丁对蛋品质的影响

由表3可知，在试验第3周，饲粮中添加不同水平的甘草和芦丁对蛋品质均无显著影响(P>0.05)；在试验第6周，与对照组相比，Ⅲ 组和Ⅴ组蛋壳厚度和蛋形指数均有极显著提高(P<0.01)，其中蛋壳厚度分别提高了和11.76%和14.71%，蛋形指数分别提高了4.65%和5.43%。而蛋壳强度、蛋黄颜色、蛋白高度、蛋黄重和哈氏单位与对照组相比均无显著差异(P>0.05)。

表3 不同添加水平的甘草和芦丁对蛋鸡蛋品质的影响

2.3 不同添加水平的甘草和芦丁对血清抗氧化水平的影响

由表4可知，与对照组相比，Ⅲ 组和Ⅴ 组血清中SOD的活性均显著增加(P<0.05)，分别增加了49.25%和138.81%；Ⅲ 组和Ⅴ 组血清中MDA的含量均有极显著降低(P<0.01)，且分别降低了18.40%和27.99%。而血清中GSH-Px和CAT的活性与对照组相比均无显著变化(P>0.05)。

表4 不同添加水平的甘草和芦丁对蛋鸡血清和空肠黏膜抗氧化水平的影响

与对照组相比，Ⅱ 组、Ⅲ 组和Ⅴ 组空肠黏膜中CAT活性均有极显著的提高(P<0.01)；分别提高了24.94%、28.98%和47.39%；Ⅲ 组和 Ⅴ组空肠黏膜中MDA的含量极显著降低(P<0.01)，较对照组降低了7.90%和9.46%。而空肠黏膜中SOD和GSH-Px的活性与对照组相比均无显著变化(P>0.05)。

2.4 不同添加水平的甘草和芦丁对血清激素水平的影响

由表5可知，与对照组相比，Ⅴ 组E2和P4的含量均有显著增加(P<0.05)，分别提高了21.28%和27.99%。Ⅱ 组、Ⅲ 组和Ⅴ 组FSH的含量均有极显著增加(P<0.01)，分别提高了7.29%、9.04%和14.87%。

表5 不同添加水平的甘草和芦丁对蛋鸡血清激素水平的影响

3 讨论

3.1 甘草和芦丁配伍对蛋鸡生产性能的影响

中草药类添加剂能够提高蛋鸡生产性能，一般认为是其通过提高机体免疫力，减少输卵管炎症，维持子宫内环境来实现的。本试验在基础日粮中添加一定剂量的甘草和芦丁能够提高蛋鸡的产蛋率，究其原因，可能与甘草及其提取物能够通过调节体液和细胞介导的免疫反应来增强家禽机体的免疫力有关[9]，除此之外，研究显示芦丁作为一种多酚生物类黄酮，能够促进大鼠免疫器官胸腺和脾的发育，从而提高大鼠机体的免疫力[10]。

个体差异、年龄、饲料的能量水平等都会影响蛋鸡的采食量，本试验中各试验组较之对照组的采食量均无显著差异，但各试验组的料蛋比与对照组相比均有极显著下降，且以甘草+芦丁的添加剂量为300 mg/kg+200 mg/kg、600 mg/kg+200 mg/kg的试验组下降最为明显。说明一定剂量的甘草和芦丁配伍可以提高蛋鸡生产性能，其机理有待进一步研究。

3.2 甘草和芦丁配伍对蛋品质以及相关激素的影响

蛋形指数、蛋壳厚度等是衡量蛋品质的重要指标之一，蛋形指数是一个形状变量，它的遗传力较高，会影响种蛋的孵化率。蛋壳厚度是影响蛋壳耐压强度的主要因素据报道，在产蛋后期蛋鸡的基础日粮中添加甘草提取物可以有效提高蛋壳强度、蛋壳厚度等[11]。在基础日粮中添加芦丁能够通过增强机体对氨基酸的利用率从而改善蛋形指数[12]。本试验中甘草+芦丁的添加剂量为300 mg/kg+200 mg/kg、600 mg/kg+200 mg/kg的试验组，蛋形指数和蛋壳厚度都较对照组有极显著提高，这可能是与一定剂量的甘草和芦丁配伍使用能够提高机体雌激素水平以及增强机体抗炎抗菌的能力有关。

长期持续性的产蛋行为会对子宫造成不可逆的损伤[13]，而雌激素和孕酮能够通过募集调动免疫活性细胞，发挥局部免疫调控功能从而减少蛋壳的异常矿化[14]。随着蛋鸡日龄的增长，雌激素和孕酮的合成及分泌受阻，进而影响输卵管及子宫部的免疫调控[15]，加剧异常矿化，最终导致蛋品质的下降。

孕酮(P4)在蛋鸡的排卵过程中起着至关重要的作用[16]，孕酮的合成主要与促性腺激素(如FSH和LH)的调节有关[17]。本试验中甘草+芦丁的添加剂量为300 mg/kg+200 mg/kg、600 mg/kg+200 mg/kg的试验组，增加了蛋鸡血清P4、E2和FSH等激素水平，这可能与一定剂量的甘草和芦丁配伍能够调节卵巢性腺激素分泌，增加卵巢颗粒细胞有关[18]。

3.3 甘草和芦丁配伍对蛋鸡抗氧化功能的影响

鸡只随着年龄的增长，机能衰退，体内自由基增多，致使内源抗氧化酶与自由基动态失衡，鸡体长期处于氧化应激状态，从而影响蛋鸡的生产性能和健康状况[19]。MDA被认为是氧化应激的标志[20]，SOD、GSH-Px和CAT都是可以清除体内过多自由基的内源性抗氧化酶[21]。有资料显示，甘草中的18β-甘草次酸能够防止自由基的产生和脂质过氧化，从而起到保护肝脏的作用[22]。此外，有研究结果表明芦丁可以通过提高SOD、GSH-Px和CAT的活性来防止氧化应激[23]。试验组蛋鸡添加甘草+芦丁(添加剂量为300 mg/kg+200 mg/kg、600 mg/kg+200 mg/kg)后，血清和空肠黏膜中MDA含量显著降低，血清中SOD和空肠黏膜中CAT活性显著提高。表明一定剂量的甘草和芦丁配伍使用具有增强机体内源抗氧化酶的活性和降低脂质过氧化的功能。

4 结论

本试验甘草+芦丁的添加剂量为300 mg/kg+200 mg/kg、600 mg/kg+200 mg/kg能够增强动物机体的免疫力，提高血清和肠黏膜抗氧化水平，增加血清中相关激素含量，改善蛋品质量。虽然，在本试验中甘草和芦丁配伍效果最好的添加剂量为600 mg/kg+200 mg/kg，但从经济成本方面考虑，添加剂量为300 mg/kg+200 mg/kg的甘草和芦丁配伍组合更为适宜。