甘南州沙棘耐缺氧功能性评价

宋礼，罗丽，李顺成，董青云

1.甘南牦牛乳研究院（合作 747000）；2.合作市质量技术监督检测所（合作 747000）

我国是沙棘属植物分布区面积最大、种类最多的国家。在山西、陕西、内蒙古、河北、甘肃、宁夏、辽宁、青海、四川、云南、贵州、新疆、西藏等19个省和自治区都有分布，总面积达1 800万亩（1亩=666.67 m2）[1-2]。甘肃沙棘林总面积200.154 7万亩，分布于张掖、武威、兰州、临夏、定西、平凉、庆阳、天水、甘南等9个地（州、市）、50个县（市、区），在东经97°20′～108°35北纬33°10～39°45′。其中，天然林168.459 2万亩，占84.16%，人工林31.695 5万亩，占15.84%。甘南藏族自治州沙棘主要以天然林沙棘为主，约占甘肃省天然沙棘林总面积的44.14%，沙棘品种主要以中国沙棘和西藏沙棘为主[3]。

沙棘作为一种药食同源的植物，其种子、籽、叶、果实、果油等具有丰富的营养物质和生物活性成分。其中，黄酮具有降血脂、降血压、降血糖作用，类胡萝卜素具有增强免疫、抗癌、预防心血管疾病等作用，维生素C具有清除自由基、抗氧化、降血脂等作用[4]。沙棘中的多种生物活性物质具有良好的抗氧化能力，如黄酮类化合物、维生素C、类胡萝卜素、维生素E等，这些生物活性物质主要通过清除自由基、抑制脂肪过氧化反应和激活抗氧化系统等方面实现[5]。

甘南藏族自治州地处青藏高原东北边缘与黄土高原西部过度地段，海拔2 960 m，生态环境薄弱，沙棘资源开发利用度不高。试验利用沙棘为原料，开展耐缺氧试验研究，对开发耐缺氧配方食品提供科技支撑，同时耐缺氧产品对缓解高原缺氧条件下引起的高原反应症状，改善高原地区的居民身体健康状况，也具有积极的社会民生意义。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

沙棘冻干粉（甘肃华羚乳品股份有限公司），沙棘冻干粉粉样品性状为乳黄色粉末，人体推荐剂量为每日20 g/（60 kg·Bw）。用无菌水配制成不同剂量的沙棘冻干粉，供试验用。

小鼠（北京华阜康生物科技股份有限公司），许可证号SCXK（京）[2019-0008]，繁殖的16～20 g昆明种健康清洁级雌性小鼠，试验动物质量合格证No.110322210102340351。试验动物饲养于北京联合大学应用文理学院保健食品功能检测中心SPF级动物室。试验动物使用许可证号SYXK（京）2017-0038。维持饲料由北京华阜康生物科技股份有限公司{许可证号SCXK（京）[2019-0008]}生产。

250 mL磨口广口瓶；1 mL注射器；电子秒表；T1000电子天平，余姚市金诺天平仪器有限公司；BS2202S电子天平，赛多利斯；凡士林纯度98%、钠石灰纯度90%、亚硝酸钠纯度98.5%，天津大茂化学试剂厂。

1.2 试验方法

1.2.1 分组试验与设置剂量

小鼠经过动物适应饲养观察后，共分为3批进行试验，第1批60只，第2批60只，第3批60只，每批按体重随机分为4组。其中：试验1批进行常压耐缺氧试验；试验2批进行亚硝酸钠中毒存活试验；试验3批进行急性脑缺血性缺氧试验。

沙棘冻干粉的推荐剂量为每日20 g/（60 kg·Bw）。试验设人体推荐量的5，10和20倍，即每日1.67，3.33和6.67 g/（kg·Bw）为低、中、高剂量组。高剂量沙棘冻干粉：称取13.34 g样品，加无菌水至20.0 mL。中剂量沙棘冻干粉：称取6.66 g样品，加无菌水至20.0 mL。低剂量沙棘冻干粉：称取3.34 g样品，加无菌水至20.0 mL。沙棘冻干粉每日一次经口给予，连续灌胃30 d后，测各项指标。小鼠灌胃体积为10 g/（kg·Bw）。同时设一空白对照组[0 g/（kg·Bw）]，用无菌水代替沙棘冻干粉，每日灌胃体积与各沙棘冻干粉组相同。各剂量组均给予维持饲料。

1.2.2 常压耐缺氧试验

末次给予试验用沙棘冻干粉后1 h，将小鼠分别放入盛有5.0 g钠石灰的250 mL磨口广口瓶中（每瓶一只小鼠）。用凡士林涂抹瓶口，盖严，使之不漏气。立即记录时间，以呼吸停止为标准，记录小鼠因缺氧而死亡的时间。受试样品组小鼠的常压耐缺氧存活时间显著长于对照组，并具有统计学意义，即可判定沙棘冻干粉的该项指标试验结果阳性。

1.2.3 亚硝酸钠中毒存活试验

末次给予试验用沙棘冻干粉后1 h，各组小鼠均腹腔注射亚硝酸钠溶液240 mg（kg·Bw）[注射量为0.1 mL/（10 g·Bw）]，立即计时，记录小鼠存活时间。受试样品组小鼠的亚硝酸钠中毒缺氧存活时间显著长于对照组，并具有统计学意义，即可判定该项指标结果阳性。

1.2.4 急性脑缺血缺氧试验

末次给予试验用沙棘冻干粉后1 h，将小鼠自颈部逐只断头，立即记录小鼠断头后至张口喘气停止时间。受试样品组小鼠的张口喘气时间显著长于对照组，并具有统计学意义，即可判定该项指标结果阳性。

1.3 数据处理

用SPSS软件进行数据处理。采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值＜F0.05，各组均数间差异无显著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多个试验组和1个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

参照《允许保健食品声称的保健功能目录 非营养补充》（2020版）（征求意见稿）中耐缺氧试验方法：常压耐缺氧试验、亚硝酸钠中毒试验、急性脑缺血性缺氧试验3项试验中任二项试验结果阳性，可判定该受试样品具有耐缺氧的作用。

2 结果与分析

2.1 沙棘冻干粉对小鼠体重的影响

由表1可见，小鼠的初始体重在3批试验动物各剂量组与0 g/（kg·Bw）组间比较，差异均无显著性。

表1 各组小鼠的初始体重（±SD）

由表2可见，经口给予小鼠不同剂量的沙棘冻干粉30 d后，小鼠的体重在3批各剂量组与0 g/（kg·Bw）组间比较，差异均无显著性。

表2 给予不同剂量沙棘冻干粉对小鼠体重的影响（±SD）

2.2 沙棘冻干粉对小鼠常压耐缺氧存活时间的影响

由表3可见，经口给予小鼠不同剂量的沙棘冻干粉30 d后，与0 g/（kg·Bw）组比较，6.67 g/（kg·Bw）组小鼠常压耐缺氧存活时间延长，有显著差异。

表3 给予不同剂量沙棘冻干粉对小鼠常压耐缺氧存活时间的影响（±SD）

2.3 沙棘冻干粉对小鼠亚硝酸钠中毒存活时间的影响

由表4可见，经口给予小鼠不同剂量的沙棘冻干粉30 d后，与0 g/（kg·Bw）组比较，6.67 g/（kg·Bw）组小鼠亚硝酸钠中毒存活时间延长，有显著差异。

表4 给予不同剂量沙棘冻干粉对小鼠亚硝酸钠中毒存活时间的影响（±SD）

2.4 沙棘冻干粉对小鼠急性脑缺血性缺氧试验的影响

由表5可见，经口给予小鼠不同剂量的沙棘冻干粉30 d后，各剂量组小鼠急性脑缺血性缺氧试验张口喘气时间与0 g/（kg·Bw）组比较，差异均无显著性。

表5 给予不同剂量沙棘冻干粉对小鼠急性脑缺血性缺氧试验的影响（±SD）

3 结论

与空白对照相比，经口给予小鼠不同剂量的沙棘冻干粉30 d后，沙棘冻干粉对小鼠体重增长无不良影响。与0 g/（kg·Bw）组比较，6.67 g/（kg·Bw）组能延长小鼠常压耐缺氧存活时间（P＜0.05），能延长小鼠亚硝酸钠中毒存活时间（P＜0.05），沙棘冻干粉能提高小鼠的耐缺氧能力。试验数据可为沙棘的应用开发研究提供理论参考。