急性心肌梗死患者血清GRP78，HSP47，miR-126表达与心功能的相关性*

赵 丽，高彦霞，柏 玲，时 雨，杨 妮，李浴静

（西安交通大学第二附属医院，陕西西安 710004）

急性心肌梗死是一种冠状动脉急性阻塞导致心肌缺血坏死、心功能受损的病症［1］，致死率、致残率均较高。急性心肌梗死患者主要表现为超过30 min 的心前区压榨性疼痛、憋闷，发病前数日多数患者会有乏力、胸部不适等症状，严重威胁患者的生命健康［2］。故急性心肌梗死的早期诊断、评估与预测病前严重程度，以及实施风险分层对选择后续治疗方式十分重要。目前，临床评估急性心肌梗死病情与风险常用心肌肌钙蛋白I（cTnI），但结果多为假阳性。为保障临床诊断、治疗效果，需继续寻找与急性心肌梗死相关的生物标志物［3-4］。有研究证实，内质网应激可介导心肌细胞、心肌组织的凋亡，加速心室重构。葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、热休克蛋白47（HSP47）是急性心肌梗死导致的内质网应激相关蛋白，GRP78 和HSP47 可体现患者心肌梗死后内质网的应激情况［5］。微小RNA（miRNA）是22nt左右的非编码RNA，在血管新生、损伤修复中有重要作用。微小RNA-126（miR-126）能靶向调控血管再生，促进血管成熟，可在急性心肌梗死发生、发展中起到一定作用［6］。本研究中探讨了急性心肌梗死患者血清GRP78，HSP47，miR - 126 与心功能的相关性，以及对鉴别患者风险层级的诊断价值，以期为后续疾病的诊断与治疗提供参考。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

纳入标准：符合《急性心肌梗死诊断和治疗指南》中急性心肌梗死的诊断标准［7］；年龄大于18岁；入院后24 h内完成体征、心电图、实验室指标等检查，且检查结果清晰；含ST 段抬高型心肌梗死、非ST 段抬高型心肌梗死。本研究方案已获医院医学伦理委员会批准（伦审批件号为2021035），患者及家属均签署知情同意书。

排除标准：合并恶性肿瘤、肝肾功能异常；合并免疫功能疾病，多器官衰竭；存在脑血管疾病；合并全身感染性疾病；急性心肌梗死发病史；入组前1 个月内有开放性手术史或严重外伤史。

研究对象选择与分组：选取我院2021 年6 月至2022 年6 月收治的急性心肌梗死患者80 例为观察组，同时选取参加医院体检的健康者50 例为对照组。两组研究对象一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。详见表1。

1.2 方法

HSP47 和GRP78 水平检测：于患者入院24 h 内取静脉血4 mL，离心（转速为3 000 r / min）10 min，置-20 ℃环境中待测，采用酶联免疫吸附试验检测HSP47和GRP78水平。使用345-90328型酶标仪（北京平利洋医疗设备有限公司）进行检测，试剂盒购自上海酶联生物科技有限公司，操作步骤按说明书进行。

miR - 126 检测：采用实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT - PCR）检测miR - 126 水平，取患者血清标本提取RNA，浓缩、洗涤、干燥后测RNA纯度、完整度，逆转录得到互补脱氧核糖核酸（cDNA），实施qRT-PCR，正、反引物由上海恒斐生物科技有限公司设计合成，采用2-ΔΔCt法计算血清中miR-126的相对表达。

心功能指标检测：于患者入院后12 h 内完成超声心动图检查，获得左室射血分数（LVEF）；采用酶联免疫吸附试验检测血清cTnI、肌酸激酶MB型同工酶（CK-MB）水平。使用345-90328型酶标仪（北京平利洋医疗设备有限公司）进行检测，试剂盒购自上海酶联生物科技有限公司，操作步骤按说明书进行。

心肌梗死患者危险分层：于患者入院24 h 内，采用全球急性冠状动脉事件注册研究（GRACE）评分［8］对观察组患者进行危险分层，GRACE 评分＞140 分、109～140 分、≤108 分别对应高危组（12 例）、中危组（31 例）、低危组（37例）。

1.3 统计学处理

采用SPSS 22.0统计学软件分析。计数资料以率（%）表示，行χ2检验；计量资料以X±s表示，行t检验。采用Pearson 相关系数法进行相关性分析，建立受试者操作特征曲线（简称ROC 曲线），评估血清HSP47，GRP78，miR-126水平鉴别急性心肌梗死患者高危险分层的价值。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 血清GRP78，HSP47，miR-126

与对照组比较，观察组患者的GRP78 和HSP47 水平均显著升高（P＜0.05），miR - 126 相对表达显著降低（P＜0.05）。详见表2。

表2 两组研究对象血清GRP78，HSP47，miR-126比较（X±s）Tab.2 Comparison of serum GRP78，HSP47，and miR-126 between the two groups（X±s）

2.2 LVEF，cTnI，CK-MB 水平

与对照组比较，观察组患者的LVEF显著降低（P＜0.05），血清cTnI 和CK - MB 水平均显著升高（P＜0.05）。详见表3。

表3 两组研究对象LVEF，cTnI，CK-MB水平比较（X±s）Tab.3 Comparison of LVEF，cTnI，and CK - MB levels between the two groups（X±s）

2.3 LVEF，cTnI，CK - MB 与血清GRP78，HSP47，miR-126 的相关性分析

相关性分析结果显示，GRP78 与cTnI 和CK - MB均呈正相关（P＜0.05），与LVEF 呈负相关（P＜0.05）；HSP47 与cTnI 和CK - MB 均呈正相关（P＜0.05），与LVEF呈负相关（P＜0.05）；miR-126与cTnI和CK-MB均呈负相关（P＜0.05），与LVEF 呈正相关（P＜0.05）。详见表4。

表4 LVEF，cTnI，CK-MB与血清GRP78，HSP47，miR-126相关性分析Tab.4 Correlation analysis of LVEF，cTnI and CK-MB with serum GRP78，HSP47 and miR-126

2.4 不同危险分层患者GRP78，HSP47，miR-126

GRP78 和HSP47 水平由低到高依次为低危组＜中危组＜高危组，miR-126 相对表达由高到低依次为低危组＞中危组＞高危组，差异有统计学意义（P＜0.05）。详见表5。

表5 3组患者血清GRP78，HSP47，miR-126比较（X±s）Tab.5 Comparison of serum GRP78，HSP47，and miR-126 among the three groups（X±s）

2.5 ROC 曲线分析GRP78，HSP47，miR - 126 在急性心肌梗死高危患者中的诊断价值

GRP78，HSP47，miR - 126 鉴别急性心肌梗死高危患者曲线下面积（AUC）分别为0.743，0.808，0.897（P＜0.05）。详见表6 和图1。采用Logistic 回归分析，通过回归系数拟合上述3 项指标联合数据的计算模型，ROC曲线显示，3项联合预测的AUC为0.928，高于各指标单项检测结果，预测价值较高。

图1 GRP78，HSP47，miR-126诊断急性心肌梗死高危患者的ROC曲线Fig.1 ROC curves of GRP78，HSP47，and miR-126 in the diagnosis of high-risk patients with acute myocardial infarction

表6 GRP78，HSP47，miR-126诊断急性心肌梗死高危患者的预测价值Tab.6 Predictive value of GRP78，HSP47，and miR-126 in the diagnosis of high-risk patients with acute myocardial infarction

3 讨论

我国每10 万城市人口急性心肌梗死病死人数为58.69人，略低于农村的74.72人［9］。急性心肌梗死患者发病较急、预后较差，目前临床常用心肌肌钙蛋白等标志物进行疾病的诊断与评估，但慢性冠状动脉疾病患者常出现假阳性结果。因此，进一步探索与急性心肌梗死病情发生、发展相关指标对后续治疗方式、靶点的选择具有临床意义。

据报道，内质网应激与缺血再灌注损伤有紧密联系，内质网应激介导的细胞凋亡通路可加重心肌再灌注损伤，从而影响急性心肌梗死患者预后［10］。由于急性心肌梗死患者早期可造成心肌组织缺氧、缺血，产生大量氧自由基，破坏Ca2+稳态，均能引发内质网功能障碍，由此导致内质网应激。当机体持续处于内质网应激状态时，细胞会在其影响下出现凋亡、死亡。GRP78 是内质网应激过程中较关键的因子。饶兰兰等［11］在研究前列腺素E1通过抑制内质网应激保护心肌梗死模型大鼠的心脏时发现，心肌梗死模型大鼠GRP78 水平显著升高，给予前列腺素E1干预可抑制内质网应激且伴随GRP78 下降，实现对胶原的增生与心肌功能的改善。本研究中观察组患者GRP78 水平显著高于对照组，与LVEF，cTnI，CK - MB 均有一定联系，且不同危险分层患者GRP78 水平存在显著差异，表明GRP78 可能参与了急性心肌梗死的发生与发展。

HSP47是一个与胶原特异性合成有关的伴侣分子。田倪妮等［12］研究发现，健康者与急性心肌梗死患者的HSP47表达水平差异显著，且与病变血管数目有一定联系。本研究中观察组患者HSP47 表达水平显著高于对照组，且与LVEF，cTnI，CK - MB 均有一定联系，表明HSP47 也可参与急性心肌梗死的发生与发展。推测原因，HSP47 特异性底物为胶原，在胶原蛋白分泌细胞内质网中，HSP47能与胶原结合，参与胶原的装配、折叠等功能，病情越严重，HSP47表达水平越高。

miRNA 在多种疾病诊断、评估中发挥了重要作用，尤其是对心血管疾病。miR-126主要在血管内皮细胞中表达，能调节机体内皮细胞的增殖、迁移，维持功能稳定，抑制急性心肌梗死患者内皮细胞分泌的miR-126［13-15］。本研究中观察组患者的miR - 126 相对表达显著低于对照组，且低危组、中危组、高危组患者的miR-126呈持续降低趋势，表明miR-126 可通过调控血管稳态参与急性心肌梗死的发生与发展。

本研究结果显示，GRP78，HSP47，miR - 126 均与心肌梗死相关标志物LVEF，cTnI，CK - MB 具有相关性，提示GRP78，HSP47，miR - 126 与心肌梗死的发生存在联系。ROC 曲线分析结果显示，GRP78，HSP47，miR - 126 鉴别急性心肌梗死高危患者AUC分别为0.743，0.808，0.897，表明三者对临床鉴别疾病危险分层有一定参考价值。将上述3 项指标纳入Logistic 回归分析，通过回归系数拟合3 项指标联合数据的计算模型，ROC 曲线显示，3 项联合预测的AUC为0.928，高于各指标单项检测结果，预测价值较高。

综上所述，急性心肌梗死患者血清GRP78 和HSP47存在异常高表达，miR-126存在异常低表达，且3 项指标与心功能均有一定相关性，单独或联合分析时对临床鉴别的患者风险层级有参考价值。