补体激活3a受体检测评估大剂量阿托伐他汀联合双联抗血小板治疗急性脑梗死的效果研究

康丽娟,李 盼,耿丽颖,孟 琦

(河北省保定市第一中心医院神经内二科,河北 保定 071000)

急性脑梗死(acute cerebral infarct,ACI)的发病率、致残率及病死率均较高,临床上依据病情严重程度及就诊时间等方面为患者实施溶栓、抗凝、脑灌注神经细胞保护等多种治疗方法,其中降脂治疗在脑卒中防治中的作用已逐渐受到临床重视。阿托伐他汀是临床常用的降脂药物之一,该药物的调脂作用显著[1]。双联抗血小板药物氯吡格雷+阿司匹林具有协同效果,能够预防血栓的形成和复发,现已常与他汀类药物联合应用于ACI的治疗中,效果显著[2]。但有相关研究[3]显示,阿托伐他汀存在量效依赖性,小剂量阿托伐他汀控制粥样硬化斑块较慢,而大剂量具有更好的调脂抗炎作用。因此,仍需寻找科学的分子指标以监测和评估大剂量阿托伐他汀联合双联抗血小板治疗ACI的效果,以指导后续ACI的治疗和预后改善。补体激活3a受体(complement component 3a receptor 1,C3AR1)是7次跨膜G蛋白偶联受体,也是补体C3a的受体1,是一种蛋白质编码基因,研究[4-5]证实,C3AR1在动脉粥样硬化、免疫和炎症疾病中均发挥关键性作用。因此,结合C3AR1在动脉粥样硬化、炎症反应中的作用特点,分析其可用于评估大剂量阿托伐他汀联合双联抗血小板治疗ACI的疗效和预后。基于此,本研究重点分析C3AR1评估大剂量阿托伐他汀联合双联抗血小板治疗ACI的疗效和预后的价值。现报告如下。

1 资料与方法

1.2治疗方法 将观察组依据随机方法分为常规剂量组和大剂量组,各30例。常规剂量组采用阿托伐他汀(20 mg/次,1次/d)、氯吡格雷(75 mg/次,1次/d)和阿司匹林(100 mg/次,1次/d)进行治疗,大剂量组采用阿托伐他汀(40 mg/次,1次/d),氯吡格雷(75 mg/次,1次/d)和阿司匹林(100 mg/次,1次/d)进行治疗,治疗周期1个月。

1.3样本采集和检测方法 采集对照组和观察组治疗前、治疗1周、2周及4周时的空腹肘静脉血4 mL至采血管中,不加抗凝剂,室温静置,经离心机进行离心处理(3 000 r/min,离心5 min,离心半径15 cm),离心完毕后取上层血清,并置于-20 ℃的条件下待检。治疗过程中采集血液样本按照相应时间点的早晨空腹采集,操作相同。使用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测C3AR1基因,采集患者的血清样本,根据总RNA提取试剂盒中的说明流程提取总RNA。根据反转录试剂盒中的说明合成cDNA。在RT-PCR试剂盒中合成C3AR1基因引物。反应条件如下:94 ℃升温 1 min;再次94 ℃维持30 s、再58 ℃维持40 s和72 ℃维持45 s,反应次数35个循环,72 ℃ 10 min。采用2-△△Ct计算出C3AR1表达水平。

1.4其他影像学指标、实验室指标检测方法 观察组均于治疗前、治疗1周、2周及4周时接受先关检查和检测[共采集患者清晨空腹静脉血6 mL,分为2支试管(需要血浆检测的指标使用抗凝管进行置备,常规进行混合、处理等)]。①颈动脉斑块(或软斑)数量、颈动脉内膜中层厚度(intima-media thickness,IMT):使用颈动脉超声探查颈总动脉、颈动脉分叉、颈内动脉和颈外动脉的横断面和纵断面,测量血管壁内腔与内外膜界面之间的距离即为IMT。将IMT≥1.5 mm,或比邻近IMT增厚>0.5 mm,或>50%,凸向管腔即为颈动脉斑块(或软斑),记录颈动脉斑块(或软斑)数量。②美国国立卫生研究院卒中量表(National Institute of Health stroke scale,NIHSS)[7]评分:该评分共包括意识、语言、运动、感觉、共济运动、眼球运动、视野等7个方面,总分0～42分,分值越高神经功能缺损越严重。③生活自理量表评分(activity of daily living scale,ADL)[8]:该评分共包括上厕所、进食、穿衣及自理经济等14项条目,采用0～4分计分制,总分0～56分,分值越高自理能力越差。④改良Rankin量表评分(Modified Rankin Score,mRS)[9]:该评分共分为0～6分(6个等级),0分(完全无症状)～6(死亡)。⑤超敏C反应蛋白(hypersensitive C-reactive protein,hs-CRP):取1支血样试管,经离心机进行离心处理(3 000 r/min,离心10 min,15 cm),离心后取血清待检。使用美国雅培C16000全自动生化分析仪测定hs-CRP水平。⑥血脂:取1支抗凝试管,经离心机进行离心处理(3 000 r/min,10 min,15 cm),离心后取血浆待检。采用美国雅培的C16000型全自动生化分析仪测定总胆固醇(total cholesterol,TC)、三酰甘油(triglyceride,TG)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)水平。

1.5统计学方法 应用SPSS 25.0统计软件分析数据。计量资料比较采用独立样本t检验;计数资料比较采用χ2检验;相关性分析采用Pearson相关性分析检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1观察组和对照组的C3AR1表达比较 观察组(2.31±0.45)的C3AR1 mRNA相对表达量高于对照组(1.03±0.21),差异有统计学意义(t=19.966,P<0.001)。

2.2常规剂量组和大剂量组的影像学指标、实验室指标比较 2组的颈动脉斑块(或软斑)数量、IMT、NIHSS评分、ADL评分、mRS评分、hs-CRP水平、TC、TG、HDL-C和LDL-C水平及C3AR1 mRNA相对表达量随着治疗时间的延长而下降,且大剂量组下降趋势均低于常规剂量组,IMT、TC、TG、LDL-C的组间·时点间交互作用差异无统计学意义(P>0.05),其余组间、时点间、组间·时点间交互作用差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 常规剂量组和大剂量组的影像学指标、实验室指标比较

2.3各时点C3AR1与大剂量阿托伐他汀联合双联抗血小板治疗ACI的影像学指标、实验室指标的相关性

经双变量Pearson相关性分析结果显示,治疗前C3AR1 mRNA相对表达量与ACI患者的颈动脉斑块(或软斑)数量、IMT、NIHSS评分、ADL评分、mRS评分、hs-CRP水平、TC、TG、HDL-C和LDL-C水平无相关性(P>0.05)。见表2。治疗1周、2周、4周时,C3AR1 mRNA相对表达量与ACI患者的颈动脉斑块(或软斑)数量、IMT、NIHSS评分、ADL评分、mRS评分、hs-CRP水平、TC、TG、HDL-C和LDL-C水平呈正相关性(P<0.05)。

表2 各时点C3AR1与大剂量阿托伐他汀联合双联抗血小板治疗ACI的影像学指标、实验室指标的相关性

3 讨 论

ACI的病理机制较为复杂,免疫因子、炎症因子可参与至疾病发生、发展的过程中,大动脉粥样硬化和血栓形成是其发病的重要原因[10]。ACI的致残、病死风险均较高,相关研究[11]指出,脑卒中患者发病后1个月内的病死率为2.3%～3.2%,3个月时的病死率约为9%,1年内病死率约为15%,致残率约为33%。

目前,临床对于ACI的治疗手段较多,包括溶栓、抗凝及降脂等,均可发挥出一定的治疗效果,促进患者病情转归,降低病死风险[12]。双联抗血小板治疗是ACI患者的常用治疗方案,主要包含阿司匹林和氯吡格雷等两种药物,可更加有效抑制血栓素A2的形成,抑制血小板凝聚,降低血栓形成风险,改善病情[13]。他汀类药物是降脂治疗中极具代表性的药物之一,现也已成为ACI治疗中不可缺少的手段之一,其中阿托伐他汀作为代表性的他汀类药物,可有效阻断细胞内羟甲戊酸的代谢途径,减少细胞内胆固醇的合成,刺激细胞膜表面LDL受体数量,提高活性,从而加强机体对血清胆固醇的清除能力,降低血脂[14]。何志芳等[15]研究结果指出,阿托伐他汀联合双抗血小板治疗有助于促进ACI患者的神经功能恢复,且复发风险低。在为ACI患者实施阿托伐他汀治疗时, 该药物用药剂量的差异,可对患者的病情改善效果产生不同的影响。刘悦等[16]研究显示,大剂量阿托伐他汀联合双联抗血小板治疗可更加有效改善ACI患者的脑功能,且不会增加不良反应发生率。乔秋博等[17]研究结果表明,高剂量阿托伐他汀联合依达拉奉更有利改善ACI患者的血液流变学和神经功能,且安全性好。但目前临床仍较为缺乏评估大剂量阿托伐他汀联合双联抗血小板治疗ACI疗效和预后的明确标准和靶点指标,该治疗方案的临床应用难度仍较大,还需寻求精准的基因靶标给予准确评估,以为后续ACI的治疗提供指导。

C3AR1是G蛋白偶联受体家族成员之一,特征是7个跨膜结构域和第2个细胞外环,与免疫反应调节、脂类分解代谢等病理生理过程密切相关[18]。研究[19]指出,C3AR1在编码受体C3a的结合激活趋化性,释放颗粒酶,进而促进超氧阴离子生成和发挥细菌调理作用,目前该基因已经被验证在动脉粥样硬化和各种免疫和炎症疾病中均发挥重要的作用。本研究结果也显示,ACI患者的C3AR1 mRNA相对表达量明显升高,在疾病发生、发展过程中发挥一定的作用。NIHSS评分、ADL评分及mRS评分是既往临床常用于判断ACI治疗效果和预后的量表[20]。hs-CRP是一种全身性炎症反应急性期的非特异性标志物,研究[21]指出,测定hs-CRP水平是了解ACI病情严重程度及预后的重要指标,在患者治疗和预后判断等中均有一定的参考价值。脂代谢紊乱是动脉粥样硬化的重要影响因素,已被临床证实与ACI患者的疗效和预后存在关联[22]。颈动脉粥样硬化是ACI发生、发展的重要原因之一,也可用于评估ACI患者的预后[23]。本研究结果显示,治疗1周、2周及4周时,C3AR1 mRNA相对表达量与ACI患者的颈动脉斑块(或软斑)数量、IMT、NIHSS评分、ADL评分、mRS评分、hs-CRP水平、TC、TG、HDL-C和LDL-C水平呈正相关性,说明C3AR1与大剂量阿托伐他汀联合双联抗血小板治疗ACI的疗效和预后存在一定的关系,未来可用于评估大剂量阿托伐他汀联合双联抗血小板治疗ACI的疗效和预后。分析原因可能是由于当C3AR1升高时,可与C3a补体结合激活炎症反应,进一步加重脑组织的炎症程度,刺激白细胞的浸润和活化,以直接或间接的方式介导组织损伤,加重脑水肿形成和再灌注损伤,加重ACI患者的病情严重程度,从而影响大剂量阿托伐他汀联合双联抗血小板治疗ACI的疗效,增加预后风险[24]。研究[25]证实,ACI患者的C3AR1水平与脑梗死体积、神经功能缺损程度之间有密切关系,可反映脑梗死组织的损害程度,监测其水平可以较好评价治疗效果和预后康复情况。

但本研究仍存在一定的局限性,如本研究内仅分开观察和分析了不同时点C3AR1与大剂量阿托伐他汀联合双联抗血小板治疗ACI的疗效和预后的关系,但并未具体分析各个时间之间的动态变化关系,未来还需进一步开展更多的研究进行探索与分析,以更好地指导改善ACI患者后续治疗方案的拟定与优化,提高疗效,改善患者预后。

综上所述,C3AR1与大剂量阿托伐他汀联合双联抗血小板治疗ACI的疗效和预后具有相关性,未来可通过检测C3AR1评估大剂量阿托伐他汀联合双联抗血小板治疗ACI的疗效和预后。