溃疡性结肠炎患者血清LncRNA TUG1和miR-142-5p表达与疾病活动度及预后的关系

关李稳，刘真义，周真真，王力雅，阚 娜（海南省第三人民医院消化内科，海南三亚 572000）

溃疡性结肠炎（ulcerative colitis，UC）是一种炎症性肠病（inflammatory bowel disease，IBD），易反复发作，病程较长，可增加癌变风险[1-2]。因此，寻找与UC疾病活动度及预后相关指标，对及时干预、控制UC病情尤为关键。研究显示UC发病与炎症反应、长链非编码核糖核酸（long non-coding RNA，LncRNA）、机体免疫、微小核糖核酸（microRNA，miRNA）等相关[3-4]。LncRNA牛磺酸上调基因1（LncRNA taurine upregulated gene 1，LncRNA TUG1）属于LncRNA中一员，已证实其在UC中呈低表达，可能抑制UC发展[5]。miRNA-142-5p在UC中呈高表达，其可能通过影响白介素-6等炎性因子分泌，进而在UC发生发展中起促炎作用[6]。但LncRNA TUG1，miR-142-5p表达水平与UC疾病活动度、预后的关系尚不明确。本文通过测定LncRNA TUG1，miR-142-5p在UC患者血清中的表达水平，分析二者与UC疾病活动度、预后的关系，以期为临床治疗、评估UC患者病情及预后提供新方向，现作如下报道。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选取2017年1月～2020年5月海南省第三人民医院诊治的108例UC患者为UC组，男性55例，女性53例，年龄32～55（44.15±7.18）岁；另外，收集UC患者吸烟史、体质量指数（body mass index，BMI）、肠外表现、病变范围等临床资料。纳入标准：①患者符合UC诊断标准[7]；②患者无激素类药物治疗史；③临床及随访资料齐全。排除标准：①并发结肠穿孔/梗阻/狭窄、严重肝肾功能障碍者；②并发中毒性结肠扩张者；③并发肿瘤、精神障碍性疾病、贫血、感染性疾病者；④处于哺乳期、妊娠期女性；⑤并发肠道结核、胃肠道病毒性/细菌性感染者。根据改良Mayo评分[7]将UC患者分为缓解期组（Mayo评分在2分及以下而且无单个分项评分在1分以上，n=42）、轻度活动组（3分≤Mayo评分≤5分，n=21）、中度活动组（6分≤Mayo评分≤10分，n=24）、重度活动组（11分≤Mayo评分≤12分，n=21）。另纳入同期108例体检健康者为健康组，男性60例，女性48例，年龄32～55（44.58±7.31）岁；经查体肝肾功能正常，无消化系统、免疫系统或其他疾病。UC组、健康组性别、年龄比较，差异无统计学意义（χ2=0.465，t=0.436,均P>0.05）。所有受试者对本研究知情同意，且本研究获得医院伦理委员会批准。

1.2 仪器与试剂 实时荧光定量PCR（real-time fluorescence quantitative PCR，qRT-PCR）仪（美国ABI公司，型号StepOneTM）；TRIzol试剂（上海泽叶生物科技有限公司，批号ZYB1901）；逆转录试剂（美国Thermo公司，批号4489328C）；PCR试剂（SYBR Green Realtime PCR Master Mix）（上海沪震实业有限公司，批号QPK-201）。

1.3 方法

1.3.1 标本收集：收集受试者清晨空腹外周血4～5 ml，自然凝固28～30 min，4℃ 5 000 r/min离心6 min，分离上层血清，-70℃冰箱中冻存。

1.3.2 qRT-PCR法检测血清LncRNA TUG1，miR-142-5p表达水平：解冻血清，利用TRIzol试剂从血清中获取总RNA；利用逆转录试剂得到cDNA；利用SYBR Green Realtime PCR Master Mix和qRTPCR仪扩增cDNA，测得各指标循环阈值（Ct值）。qRT-PCR仪参数：96.7℃ 3min；94.2℃ 30s，59.5℃20s，60.5℃ 15s，40个循环。LncRNA TUG1以GAPDH为内参，miR-142-5p以U6为内参，引物序列见表1。LncRNA TUG1，miR-142-5p相对表达量以2-∆∆Ct法计算。

表1 LncRNA TUG1，GAPDH，miR-142-5p，U6引物序列

1.3.3 随访：对108例UC患者随访2年，以UC患者出院当天为随访起点，以患者复发或2年随访时间到为随访终点，以电话/门诊为随访方式，每3个月随访1次，记录2年内UC患者复发情况，复发即为预后不良，未复发即为预后良好。

1.4 统计学分析 采用SPSS22.0软件分析数据，计量数据以均数±标准差（±s）表示，两组间比较行t检验，多组间比较行单因素方差分析，进一步两两比较行SNK-q检验；UC患者血清LncRNA TUG1表达水平与miR-142-5p的相关性以Pearson法分析；UC患者预后的影响因素行Logistic回归分析；P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 UC组、健康组血清LncRNA TUG1，miR 142-5p表达水平比较 见图1。与健康组相比，UC组患者血清LncRNA TUG1表达水平降低（0.45± 0.15 vs 1.04±0.35），miR-142-5p表达水平升高（1.76±0.32 vs 1.01±0.18），差异具有统计学意义（t=16.102，21.229，均P＜0.001）。

图1 UC组、健康组血清LncRNA TUG1，miR-142-5p表达水平

2.2 UC患者血清LncRNA TUG1表达水平与miR-142-5p的相关性分析 Pearson法分析显示，UC患者血清LncRNA TUG1表达水平与miR-142-5p呈负相关（r=-0.558，P＜0.001）。

2.3 不同疾病活动度UC患者血清LncRNA TUG1，miR-142-5p表达水平比较 见表2及图2。缓解期组、轻度活动组、中度活动组、重度活动组血清LncRNA TUG1表达水平依次降低，miR-142-5p表达水平依次升高，差异具有统计学意义（均P<0.05）。

图2 不同疾病活动度UC患者血清LncRNA TUG1，miR-142-5p表达水平

表2 不同疾病活动度UC患者血清LncRNA TUG1，miR-142-5p表达水平比较（±s）

表2 不同疾病活动度UC患者血清LncRNA TUG1，miR-142-5p表达水平比较（±s）

注：a与缓解期组相比，q=6.319,12.870,17.377,1.136,8.302,13.302,均P<0.05；b与轻度组相比，q=5.199,9.891,5.900,10.882,均P<0.05；c与中度组相比，q=5.369,6.094,均P<0.05。

指标缓解期组（n=42）轻度活动组（n=21）中度活动组（n=24）重度活动组（n=21）FP LncRNA TUG10.68±0.230.48±0.16a0.29±0.09ab0.13±0.05abc59.475＜0.001 miR-142-5p1.48±0.271.55±0.28a1.97±0.36ab2.30±0.42abc35.716＜0.001

2.4 不同预后UC患者临床资料及血清LncRNA TUG1，miR-142-5p表达水平比较 见表3。108例UC患者随访2年，复发51例（复发组），未复发57例（未复发组）。与未复发组相比，复发组UC患者血清LncRNA TUG1表达水平降低（P<0.05），miR-142-5p表达水平、有肠外表现患者占比升高，差异有统计学意义（均P<0.05）。年龄、男/女比、吸烟史、BMI、病变范围差异无统计学意义（均P>0.05）。

表3 不同预后UC患者临床资料及血清LncRNA TUG1，miR-142-5p表达水平比较 （±s,n）

表3 不同预后UC患者临床资料及血清LncRNA TUG1，miR-142-5p表达水平比较 （±s,n）

类 别未复发组（n=57）复发组（n=51）t/χ2P年龄（岁）44.75±7.2343.28±7.121.0620.290男/女28/2927/240.1570.692吸烟史（有/无）26/3129/221.3630.243 BMI（kg/m2）21.17±2.3421.52±2.470.7560.451肠外表现（有/无）9/4821/308.6470.003全结肠1210左半结肠19200.4070.816直肠、乙状结肠2621 LncRNA TUG10.51±0.170.38±0.134.424＜0.001 miR-142-5p1.61±0.291.93±0.355.193＜0.001病变范围

2.5 影响UC患者预后的Logistic回归分析 见表4。以UC患者预后是否复发为因变量（复发=1，未复发=0），以肠外表现、miR-142-5p，LncRNA TUG1为自变量，行Logistic回归分析，结果显示，肠外表现、miR-142-5p是影响UC患者预后的危险因素（P＜0.05），LncRNA TUG1是影响UC患者预后的保护因素（P＜0.05）。

表4 Logistic回归分析UC患者预后的影响因素

3 讨论

溃疡性结肠炎（UC）是一种损伤肠道黏膜的疾病，其复发率较高，以腹痛、血便为临床表现，且肠道长期处于慢性炎症环境中，可使患者发生肿瘤风险增高，严重威胁患者健康[8-10]。因此，寻找与UC复发有关，且可评估UC患者病情严重程度的指标，对提高UC患者生活质量有积极意义。

LncRNA是一类长链非编码RNA分子，其可调节信号转导，参与免疫反应，调控炎症反应，LncRNA可作为诊疗肠道疾病的分子靶标[11-13]。既往报道显示，LncRNA肺癌相关转录本1在克罗恩病（Crohn’s Disease，CD）中表达上调，其可作为评估CD严重程度的潜在指标[11]；另外，LncRNA肺腺癌转移相关转录因子1在UC中呈高表达，其具有诊断UC的潜在价值[13]。以上研究表明，LncRNA与肠道疾病病理变化相关。研究发现，LncRNA TUG1在结直肠癌中表达失调，其可能是治疗结直肠癌的潜在靶点[14]；另外，TIAN等[5]研究发现LncRNA TUG1通过调节细胞凋亡，进而抑制UC发病进程。本研究中UC患者血清LncRNA TUG1表达水平低于健康人，与TIAN等[5]研究趋势一致，提示LncRNA TUG1可能与UC病理变化密切相关，参与了UC的发病过程。另外，本研究显示，缓解期组、轻度活动组、中度活动组、重度活动组血清LncRNA TUG1表达水平依次降低，提示LncRNA TUG1与UC活动性关系密切，参与了UC的疾病进展，其可作为评估活动期UC患者病情程度的辅助指标。进一步研究显示，复发的UC患者血清LncRNA TUG1表达水平低于未复发患者，提示LncRNA TUG1与UC患者预后相关，其可能是判断UC患者预后的潜在指标。

miRNA是一类短链非编码RNA分子，参与氧化应激，影响信号转导，介导炎症反应，与结肠癌等肠道疾病关系密切[15-17]。有关报道显示，miR-130a-3p在CD中呈过表达，其可能是CD的治疗靶标[16]；miR-15在UC中呈高表达，与炎性反应状态密切相关，miR-15可辅助评估UC患者预后[17]。以上报道表明，miRNA可能参与肠道疾病发展过程。既往研究显示，miR-142-5p作为miRNA的一员，其在实验性结肠炎中表达上调，抑制miR-142-5p表达可缓解实验性结肠炎发展进程[18]；另外，miR-142-5p在CD中表达水平升高，其有望成为诊断CD的标志物[19]。本文中UC患者血清miR-142-5p表达水平高于健康人，与HAN等[6]研究趋势相符，提示miR-142-5p表达水平升高可能与UC发生发展相关，推测miR-142-5p可能通过与靶基因结合，促进炎性因子释放，加强炎症反应，从而促进UC病理发展，但具体机制有待进一步研究。本研究发现，缓解期组、轻度活动组、中度活动组和重度活动组血清miR-142-5p表达水平依次升高，提示miR-142-5p与UC疾病活动性有关，且测定血清miR-142-5p表达水平有助于临床评估UC疾病活动度。进一步研究发现，复发的UC患者血清miR-142-5p表达水平高于未复发患者，提示miR-142-5p可作为预测UC患者预后的潜在指标，测定血清miR-142-5p表达水平有利于临床预测UC患者是否复发。

另外，HAN等[20]研究发现LncRNA TUG1可通过调节miR-142-5p影响炎症反应，进而影响UC发病过程。本研究结果显示，血清LncRNA TUG1表达水平与miR-142-5p呈负相关，提示LncRNA TUG1可能与miR-142-5p共同影响UC发生发展，其机制有待深入研究。UC以肠道病变为主，但也可伴有口腔溃疡等肠外表现。本研究中伴有肠外表现的UC患者复发率较高，可能原因是UC患者的肠道炎症程度与UC肠外表现相关，肠道炎症越严重，肠外表现发生率越高，升高UC复发风险，对患者预后产生不利影响[21]。此外，本研究表明血清miR-142-5p表达水平升高，LncRNA TUG1表达水平降低均可能增加UC患者发生不良预后的风险，及时监测血清LncRNA TUG1，miR-142-5p表达水平有助于临床诊治UC，评估UC患者病情、预测UC患者预后情况。

综上，UC患者血清LncRNA TUG1呈低表达，miR-142-5p呈高表达，二者均与UC疾病活动度、预后密切相关，测定血清LncRNA TUG1，miR-142-5p水平有利于临床评估UC患者病情、预测UC患者预后状况。但本研究对LncRNA TUG1，miR-142-5p在UC中的作用机制研究不够深入，且二者在浅表性胃炎、胃癌中的表达水平尚不明确，另外，样本较少，后期将扩大样本就此展开深入研究。