PCR-荧光探针法在老年下呼吸道感染患者病原体检测中的应用价值探究

李 曼

（曲靖市第五人民医院检验科，云南 曲靖 655000）

呼吸道感染（Respiratory tract infection）是临床常见的感染性疾病。近年来随着我国老年人口的增多及空气质量的下降，呼吸道感染的发生率呈逐年上升的趋势。老年患者大多免疫力低下、抗感染能力不足，再加上多患有基础性疾病，因此是下呼吸道感染的易感人群[1]。有研究证明，由病毒引起的呼吸道感染占呼吸道感染总数的90%[2]。临床引起呼吸道感染的常见病毒包括流感病毒、呼吸道合胞病毒（RSV）、腺病毒（ADV）、副流感病毒、人冠状病毒、鼻病毒等。由不同病毒引起的下呼吸道感染其临床症状与流行特点相似，具有起病急、进展快、潜伏期短、传播迅速、感染性强等特点。临床如何快速准确地检测出引起呼吸道感染的病原体类型尤为重要[3]。但临床上常规的检测方法难以区分不同的病原体感染，这要求我们必须找到一种切实有效的呼吸道病原体快速检测技术。文献报道，PCR- 荧光探针法在老年患者下呼吸道感染的病原体检测中具有操作简便、灵敏度高、特异性高等优势，能辅助临床迅速判断感染的病原体种类[4]。基于此，本文就PCR- 荧光探针法在老年下呼吸道感染患者病原体检测中的应用价值进行探讨分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2022 年3 月至2023 年2 月在我院门诊及住院部治疗的300 例老年下呼吸道感染患者的口咽或鼻咽拭子标本。这些患者中，有男性128 例，年龄在61 ～90 岁之间；女性172 例，年龄在60 ～88 岁之间。纳入标准：（1）符合下呼吸道感染的诊断标准﹝呼吸道感染的相关诊断标准参照《内科学》（第9 版）中的相关描述[5]，其中下呼吸道感染的诊断标准包括有急性支气管炎、慢性支气管炎、气管- 支气管炎、肺炎、支气管扩张、支气管肺炎等相关病史，并有咳嗽、咳痰、胸闷等临床表现﹞ ；（2）经临床检查确诊为下呼吸道感染；（3）年龄在60 ～90 岁之间；（4）有完整的临床资料。排除标准：（1）上呼吸道感染者；（2）合并免疫系统疾病者；（3）伴有重症感染或发生休克者；（4）就诊前已使用抗生素、抗病毒药物治疗者；（5）无法适应检查者；（6）采样配合困难者；（7）中途无故退出研究者。

1.2 方法

1.2.1 主要试剂与仪器 北京卓诚惠生生物科技股份有限公司生产的呼吸道病毒核酸六重联检试剂盒（PCR-荧光探针法）；杭州博日科技有限公司生产的荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测系统，杭州奥盛仪器有限公司生产的Auto-Pure32A 全自动核酸提取仪。

1.2.2 检测方法 留取患者的口咽或鼻咽拭子标本并立即送检。采用Auto-Pure32A 全自动核酸提取仪与PCR- 荧光探针法对标本进行检测，同时检测6 种呼吸道病毒，包括甲型流感病毒（IFVA）、乙型流感病毒（IFVB）、RSV、ADV、副流感病毒1 型（HPIV1）、副流感病毒3 型（HPIV3），具体操作步骤与检测结果判定均严格按照试剂盒说明书进行。

1.3 观察指标

观察统计呼吸道病毒的阳性检出情况、6 种呼吸道病毒的阳性检出情况、不同年龄段人群呼吸道病毒的阳性检出情况以及呼吸道病毒阳性检出率与发病季节的关系。

1.4 统计学方法

采用SPSS 20.0软件处理各项数据，计数资料以%表示，采用χ²检验，计量资料以均数±标准差（±s）表示，采用t检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 呼吸道病毒的阳性检出情况

经检测，纳入的300 例老年下呼吸道感染患者的呼吸道病毒阳性检出率为17.00%（51/300）。其中男性患者128 例，检出阳性20 例，阳性检出率为15.63% ；女性患者172 例，检出阳性31 例，阳性检出率为18.02%。不同性别患者呼吸道病毒的阳性检出率相比无统计学差异（χ²=0.299，P＞0.05）。不同性别患者呼吸道病毒的阳性检出率见表1。

表1 不同性别患者呼吸道病毒的阳性检出率

2.2 6 种呼吸道病毒的阳性检出情况及构成比

在检出的51 份阳性样本中，流感病毒检出率最高（IFVA+IFVB 为52.94%），其中IFVA 占29.41%，IFVB 占23.53%；HPIV3 的检出率最低，仅为7.84%。6 种呼吸道病毒的阳性检出情况及构成比见表2。

表2 6 种呼吸道病毒的阳性检出情况及构成比[例（%）]

2.3 不同年龄段人群呼吸道病毒的阳性检出情况

将老年下呼吸道感染患者按年龄分成三组：60 ～69 岁 组、70 ～79 岁 组、 ≥80 岁 组。 ≥80岁组呼吸道病毒的阳性检出率最高，达21.74%，60 ～69 岁组呼吸道病毒的阳性检出率最低为15.43%。三组不同年龄人群呼吸道病毒的阳性检出率相比无统计学差异（χ²=0.996，P=0.609）。详见表3。

表3 不同年龄段人群呼吸道病毒的阳性检出情况

2.4 呼吸道病毒阳性检出率与发病季节的关系

根据季节统计2022 年3 月至2023 年2 月一年时间内呼吸道病毒的阳性检出率，发现春季呼吸道病毒的阳性检出率（25.61%）显著高于其他三个季节（夏季7.94%、秋季12.00%、冬季20.00%），差异有统计学意义（χ²=9.815，P＜0.05）。详见表4。

表4 呼吸道病毒阳性检出率与发病季节的关系

3 讨论

据国家统计局发布的《中国统计年鉴2020》显示，肿瘤、心脏病、心脑血管疾病、呼吸系统疾病死亡率位居国民疾病死亡率前四位[6]。呼吸道感染发病率高、易于流行、传播迅速，严重危害人类的健康[7]。呼吸道病原体种类众多，因季节气候、所处环境、易感人群的不同而有所差异。研究指出，引起下呼吸道感染的病原体较多，但绝大多数为病毒[8]。应注意不同地域、不同气候季节所造成的病毒流行趋势的不同，以做到预防流行、准确诊断、及时治疗[9]。目前，病毒和非典型呼吸道病原体所导致的呼吸道感染临床症状相似，对疾病的诊治造成了一定困惑。明确病原体种类，快速准确地作出诊断，避免误诊，对症下药对控制疾病进展至关重要[10]。抗生素作为下呼吸道感染的常规治疗药物，种类繁多，可供临床治疗的选择不断增加，导致抗生素滥用，而抗生素使用不规范又将导致新的感染。抗生素的长期使用在一定程度上破坏了患者的下呼吸道功能，容易造成下呼吸道感染反复出现。研究表明，下呼吸道是长期使用抗生素导致感染的主要部位[11]。因此，及时检测引起下呼吸道感染的病原体种类，对指导临床治疗意义重大[12]。下呼吸道感染病原体检测的金标准是痰细菌培养，但培养过程复杂，耗时长，阳性率低，易延误患者的病情，不利于临床早期诊断和治疗[13]。近年来，PCR- 荧光探针法因具有高特异度和灵敏度已逐渐成为呼吸道感染的早期诊断和应急处理诊断方式[14]。本研究结果显示，51 份阳性标本中，阳性检出率最高的是流感病毒，其次为ADV，HPIV3 检出率最低。这与其他学者[15]对急性呼吸道感染病原学及流行病学特征分析的一致性较高。采用PCR- 荧光探针法进行下呼吸道感染病原体检测具有操作简单、结果准确、特异性高等优点，适用于临床快速筛查下呼吸道感染，对指导临床治疗、合理用药具有重要意义。

综上所述，临床采用PCR- 荧光探针法对老年下呼吸道感染患者进行病原体检测便捷快速，具有较高的临床应用价值。