化学发光免疫试验与梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验筛查梅毒阳性病例的研究

何 姗

（十堰市郧阳区人民医院，湖北 十堰 442500）

梅毒是一种由梅毒螺旋体感染引起的侵犯多系统的慢性性传播疾病，该病主要通过性接触传播、母婴垂直传播等[1-2]。岳晓丽等[3]对我国2014-2019 年梅毒流行趋势与特征进行调查发现，2014-2019 年梅毒报告发病率由30.93/10 万增长至38.37/10 万，年均增长4.41%，以西北部分地区和东南沿海部分省份为高发地区。梅毒的流行对我国居民的身心健康有着极大的威胁，已成为现阶段的公共卫生问题之一。早期筛查梅毒阳性病例对减少梅毒的传播具有重要的意义。目前，梅毒筛查主要以血清学检测为主，检测方法有化学发光免疫试验（Chemiluminescence analysis，CLIA）、梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（Treponema pallidum particle agglutination，TPPA）等。上述检测方法在近年来的梅毒筛查工作中备受关注[4]。本次研究为了进一步探讨CLIA 与TPPA 在梅毒阳性病例筛查中的应用价值，对2020 年3 月至2022 年12 月在本院进行梅毒阳性筛查的132 例患者的临床资料进行了回顾性分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析2020 年3 月至2022 年12 月在我院进行梅毒阳性筛查的132 例患者的临床资料，其中男性61 例，女性71 例；年龄19 ～83 岁，平均年龄（49.39±13.75）岁。本次研究已获得我院伦理委员会审批。纳入标准：（1）年龄≥18 岁；（2）临床资料齐全；（3）具备正常理解沟通交流能力；（4）患者及其家属对本次研究知情。排除标准：（1）采集的血液标本不合格者；（2）既往有精神病史者；（3）研究依从性差者。

1.2 方法

1.2.1 样本采集 采集受检者晨起空腹静脉血3 mL，置于离心机中以3500 r/min 的转速对血液标本进行离心处理，离心时间为5 min，离心半径为25 cm。经过离心处理后留取上层清液，并置于-20℃环境中保存待检。

1.2.2 仪器和试剂 化学发光免疫分析仪及其配套的梅毒抗体检测试剂（西门子ADVIA Centaur XP），TPPA 检测试剂由日本富士瑞必欧株式会社提供。

1.2.3 检测方法 （1）CLIA：采用全自动化学发光分析仪及其配套的试剂盒进行检测，检测操作严格按照仪器和试剂盒的说明进行。通过S/CO 值来进行结果判读：当S/CO 值≥1.0 时则表示有反应性，为阳性。当S/CO值＜1.0 时则表示无反应性，为阴性。（2）TPPA：检验人员采用手工操作，严格按照试剂说明书进行操作，并严格把控质量。通过肉眼观察进行结果判读。阴性：反应孔4 中的孔中央有细胞沉积，且呈光滑纽扣状；阳性：反应孔4 中的孔中央细胞沉积呈不规则形状。

1.3 观察指标

（1）观察132 例患者的CLIA、TPPA 结果，并统计CLIA 在梅毒阳性病例筛查中的敏感性、特异性及准确性。敏感性=真阳性/（真阳性+假阴性）×100%；特异性=真阴性/（真阴性+假阳性）×100%；准确性=（真阳性+ 真阴性）/ 总例数×100%。（2）统计CLIA不同S/CO 值时的检测结果与TPPA 结果的符合率。（3）分析CLIA 诊断梅毒阳性的最佳临界值。

1.4 统计学方法

利用SPSS 22 软件对本次研究数据进行分析。计量资料采用±s表示，行t检验；计数资料采用百分比（%）表示，行χ² 检验，绘制受试者工作特征（ROC）曲线，计算曲线下面积（AUC），当AUC最大时则为诊断最佳临界值，检验水准为α=0.05，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 132 例患者的CLIA、TPPA 结果

经统计发现，132 例患者中，CLIA 发现阳性68 例，TPPA 发现阳性62 例，详见表1。以TPPA 结果为金标准，CLIA 筛查梅毒阳性的敏感性、特异性和准确性分别为93.55%、85.71%、89.39%。

表1 132 例患者的CLIA、TPPA 结果（例）

2.2 CLIA 不同S/CO 值时的检测结果与TPPA结果的符合率

当CLIA S/CO 值 为1.0 ～5.0 时，CLIA 阳 性11 例，TPPA 阳性7 例，二者的符合率为63.64%；当CLIA S/CO值为＞5.0 ～10.0 时，CLIA 阳性15 例，TPPA 阳性13 例，二 者 的 符 合 率 为86.67% ；当CLIA S/CO 值为＞10.0 ～20.0 时，CLIA 阳性34 例，TPPA 阳性34 例，二者的符合率为100.00% ；当CLIA S/CO 值＞20.0时，CLIA 阳性8 例，TPPA 阳性8 例，二者的符合率为100.00%。详见表2。

表2 CLIA 不同S/CO 值时的检测结果与TPPA 结果的符合率

2.3 CLIA 诊断梅毒阳性的最佳临界值

通过绘制ROC 曲线进行分析发现，当CLIA S/CO值为2.50 时，AUC 最大（0.991），敏感性和特异性分别为96.13%、93.22%。详见表3。

表3 CLIA 诊断梅毒阳性的最佳临界值

3 讨论

梅毒作为临床常见的性传播疾病，近年来其发病率呈上升趋势。一般情况下，当机体初次感染梅毒螺旋体后会进入潜伏期，此时患者可表现为硬下疳、低热或无任何症状，随着病情的进一步发展，患者会出现多种复杂的临床症状，严重时会累及全身器官，危及生命[5-6]。根据梅毒螺旋体感染的病程和临床症状的不同，可将此病分为一期梅毒、二期梅毒、隐性梅毒、神经梅毒、胎传梅毒等。对于大部分梅毒患者而言，早期接受规范化的驱梅治疗能够获得血清学治愈。因此，早发现、早筛查、早治疗是改善梅毒患者预告的关键所在。血清学检测是现阶段梅毒阳性病例筛查最有效、最快捷的手段，CLIA、TPPA 则是常用的血清学检测方法，二者均为梅毒螺旋体抗原血清学试验。TPPA 在梅毒阳性病例筛查中具有很高的敏感性和特异性，通过其他血清学检测方法筛查为阳性的患者往往需要再次接受TPPA，以保证诊断的准确性[7]。然而，TPPA 操作步骤需检验人员纯手工操作，且操作流程复杂，不仅会花费较多时间，还对检验人员的技术有着较高的要求。由此可见，TPPA 不适用于梅毒阳性病例的早期筛查，易造成一定的资源浪费。CLIA是基于梅毒螺旋体抗原及基因工程而研发出来的检测方法，主要以化学发光底物取代传统显色底物，增强发光信号，延长发光信号持续时间，从而提高检测敏感性[8]。采用梅毒试剂盒进行CLIA，通过加入化学发光底物液后测定发光强度，根据强度反映的临界值能判定梅毒螺旋体抗体的情况。

本次研究在132 例患者中开展了CLIA、TPPA，并以TPPA 结果为金标准进行分析，结果显示，在132 例 患 者 中，CLIA 发 现 阳 性68 例，TPPA 发 现阳性62 例；以TPPA 结果为金标准，CLIA 筛查梅毒阳性的敏感性、特异性和准确性分别为93.55%、85.71%、89.39%。该结果提示，CLIA 在梅毒阳性病例筛查中具有较高的敏感性、特异性和准确性。同时，对CLIA 不同S/CO 值时的检测结果与TPPA 结果的符合率进行分析，发现当CLIA S/CO 值为1.0 ～5.0时，CLIA 阳性11 例，TPPA 阳性7 例，二者的符合率 为63.64% ；当CLIA S/CO 值 为＞5.0 ～10.0 时，CLIA 阳性15 例，TPPA 阳性13 例，二者的符合率为86.67% ；当CLIA S/CO 值 为＞10.0 ～20.0 时，CLIA 阳性34 例，TPPA 阳性34 例，二者的符合率为100.00%；当CLIA S/CO 值＞20.0 时，CLIA 阳性8 例，TPPA 阳性8 例，二者的符合率为100.00%。宋燕等[9]学者研究发现，随着CLIA S/C0 值的增加，检测真阳性率亦随之增加，当CLIA S/C0 值＞10 时，真阳性率达到100%。这与本研究结果相一致。究其原因主要是，机体感染梅毒螺旋体后会产生抗脂质抗体、抗密螺旋体抗体两种抗体，前者属于非特异性抗体，后者属于特异性抗体。CLIA 作为检测梅毒特异性抗体的常用方法，所采用的梅毒试剂盒能与样品中梅毒螺旋体抗体结合形成双抗体夹心抗体，通过洗涤后加入化学发光底物，能通过发光强度来准确分析梅毒螺旋体特异性抗体的具体情况。同时，CLIA 为自动化检测，操作简便且检测试剂较多，加之具有高通量的优点，因此在梅毒阳性病例筛查工作中更加适用。本次研究还对CLIA 诊断梅毒阳性的最佳临界值进行了分析，通过绘制ROC 曲线发现，当CLIA S/CO 值为2.50 时，AUC 最大（0.991），敏感性和特异性分别为96.13%、93.22%。该结果提示，CLIA S/CO 值为2.50 时为筛查梅毒阳性的最佳临界值。虽然通过本次研究发现CLIA 筛查梅毒阳性病例具有较高的应用价值，但在低S/CO 值、检测灰区时CLIA 可能出现假阳性情况。因此，建议当CLIA 筛查为阳性时进一步行TPPA，以提高梅毒阳性病例筛查的准确性。石正琪等[10]学者同样建议，在采用CLIA 进行梅毒阳性病例筛查时可同时开展TPPA。另外，在梅毒阳性病例筛查中，除了分析最佳的检测方法外，还需积极开展主动检测及扩大筛查工作，以尽可能地减少梅毒的传播。在梅毒防治工作中，以往筛查和宣教工作多侧重于性活跃的青壮年群体，忽视了妊娠期女性和老年人，导致梅毒阳性病例筛查不彻底，故笔者建议梅毒防治工作也需要重视妊娠期女性和老年人。

综上所述，CLIA 在梅毒阳性病例筛查中具有较高的敏感性、特异性和准确性，且当CLIA S/CO值＞10.0 时，与TPPA 结果的符合率为100.00%。若CLIA 筛查为阳性，建议同时行TPPA，以进一步提高梅毒阳性病例筛查的准确性。本次研究的不足之处在于纳入的样本量仅为132 例，样本量过少难以保证其多样性，加之样本的选取是否合理还有待商榷，后续还需加大样本量，充分保证样本的多样性，开展更高质量的研究，以进一步验证本次研究结论。