氟铃脲原药的高效液相色谱分析

于江，吴浩，贺友兰，尹凯

(浙江南郊化学有限公司，浙江 绍兴 312369)

氟铃脲属苯甲酰脲类杀虫剂，具有很好的杀虫、杀卵活性，主要用于棉花、马铃薯及果树防治金纹细蛾、潜夜蛾、卷叶蛾、刺蛾、桃蛀螟等害虫[1-2]。针对苯甲酰脲类杀虫剂原药分析方法已有较多报道[3-5]，但关于氟铃脲原药的检测分析方法则少有报道。江苏省农产品质量检验测试中心基于甲醇/水为流动相，二甲基甲酰胺和甲醇的混合溶剂为稀释剂HPLC外标法分析检测了氟铃脲原药[6]，该方法稀释操作繁琐且二甲基甲酰胺和甲醇基线噪音大，易出现基线不稳定现象，色谱柱柱压高使用寿命短。其他关于氟铃脲检测报道多是针对农药残留或制剂样品[7-9]。本文研究了基于乙腈/水为流动相，纯乙腈为稀释溶剂，通过C18反相高效液相色谱柱定量分析测定氟铃脲原药的方法。该方法稀释溶剂单一、检测时间短、操作简便、结果重现性好、检测灵敏度高，适用于氟铃脲原药的定量分析。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

U3000 高效液相色谱仪(DAD)、IS5 红外光谱仪(赛默飞世尔科技公司)；Chromeleon7.2 工作站；ME204 分析天平仪(梅特勒-托利多公司)。

乙腈(HPLC 级，美国Tedia 公司)，娃哈哈纯净水，氟铃脲标样(质量分数≥98%，自制)。

1.2 色谱操作条件

流动相：乙腈与水(体积比为66∶34)，经0.45 μm滤膜过滤，并在超声波中脱气20 min。检测波长：254 nm；色谱柱：伊力特Supersil ODS2 C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；色谱柱柱温：25 ℃；进样量：5 μL；流速：1.0 mL/min。氟铃脲原药的保留时间为8 min。采用外标法计算含量。

以上操作参数是典型的，可以根据不同仪器特点，对给定操作参数进行适当调整以便获得最佳效果。

1.3 测定步骤

1.3.1 标样溶液配制

准确称取氟铃脲标样0.02 g，置于50 mL 容量瓶中，加入乙腈稀释，超声溶解，取出冷至室温后，用乙腈稀释至刻度线，摇匀，备用。

1.3.2 试样溶液配制

准确称取氟铃脲样品0.02 g，置于50 mL 容量瓶中，加入乙腈稀释，超声溶解，取出冷至室温后，用乙腈稀释至刻度线，摇匀，备用。

1.3.3 测定

待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，直至相邻2 针氟铃脲峰面积相对变化小于1.0%后，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。图1 为HPLC 典型谱图。

1.3.4 计算

将测得的2 针试样溶液以及试样前后2 针标样溶液中氟铃脲峰面积分别进行平均。试样中氟铃脲的质量分数x1(%)按以下公式(1)计算。

式中：A1为标样溶液中氟铃脲峰面积的平均值；A2为试样溶液中氟铃脲峰面积的平均值；m1为氟铃脲标样的质量，g；m2为氟铃脲试样的质量，g；p为氟铃脲标样的质量分数，%。

2 结果与讨论

2.1 最佳操作条件的选择

对氟铃脲标准品进行红外光谱扫描鉴定，扫描结果见图2。

图2 氟铃脲红外扫描图

采用HPLC-DAD 峰纯度分析法鉴别氟铃脲标样中的有效成分。标样中的氟铃脲HPLC-DAD 峰纯度大于阈值970，根据波长扫描图，目标化合物在254 nm 波长下具有良好的吸收，扫描结果见图3。

图3 氟铃脲HPLC-DAD 扫描图

为确保样品与杂质的完全分离且提高分析效率降低分析成本，笔者经多次试验表明，当流动相为乙腈与水(体积比为66∶34)、流速1.0 mL/min、柱温25 ℃时基线平稳且峰型对称，与其他杂质峰没有重叠，得到了较好的分离效果。

2.2 线性关系的测定

分别准确称取氟铃脲标样11.03、16.58、20.08、24.40、22.43、29.74 mg 于50 mL 容量瓶中，用乙腈超声溶解，取出冷至室温后，用乙腈至刻度线，摇匀，备用。待仪器稳定后对标准溶液分别进行进样测定，以氟铃脲的质量x(mg)为横坐标，以其响应的峰面积y为纵坐标，绘制标准曲线，得到线性方程y=234.07x-28.073，相关系数R2=0.999 9。

2.3 准确度的测定

储备液的配制：准确称取氟铃脲标样101.05 mg于50 mL 容量瓶中，用乙腈超声溶解，取出冷至室温后，用乙腈至刻度线，摇匀，备用。

标样配制：分别准确称取氟铃脲标样20.01、20.35 mg 于50 mL 容量瓶中，用乙腈超声溶解，取出冷至室温后，用乙腈至刻度线，摇匀，备用。

样品配制：分别准确称取已知含量(97.75%)的氟铃脲样品14.30、12.74、11.24 mg 于50 mL 容量瓶中，分别加入5 mL 储备液，用乙腈超声溶解，取出冷至室温后，用乙腈至刻度线，摇匀，备用。

待仪器稳定后对标准溶液及待测样品溶液分别进行进样测定，计算回收率，平均回收率为100.84%，相对标准偏差0.9%，结果见表1。

表1 分析方法的准确度测定

2.4 精密度的测定

同一份样品准确称取6 份，并准确称取2 份氟铃脲标准品，在氟铃脲外标操作方法下测定氟铃脲质量分数，并计算氟铃脲质量分数的相对标准偏差为0.13，小于Horwits 公式2(1-0.5logC)×0.67(C为试样中氟铃脲含量，以小数计)计算值1.34(表2)。

表2 分析方法的精密度测定

3 结论

本文建立了一种基于反相高效液相色谱法的氟铃脲原药的分析方法，该方法的标准偏差为0.13%，线性相关系数0.999 9，平均回收率为100.84%。该方法准确度和精密度较高，样品结果重现性好，操作简便且检测时间短，是一种理想的定量分析氟铃脲原药的方法。