480 g/L 虫螨腈·虱螨脲悬浮剂的高效液相色谱分析

徐一平，王如霞，周倩，周瑶，汤浩蕾

(江苏省中江海外进出口有限公司，南京 210000)

1 材料与方法

1.1 试剂和仪器

虫螨腈标准样品(质量分数≥98%，宜兴宜州化学制品有限公司)；虱螨脲标准样品(质量分数≥97%，宜兴宜州化学制品有限公司)；480 g/L 虫螨腈·虱螨脲悬浮剂(虫螨腈400 g/L+虱螨脲80 g/L；定远众邦生物工程有限公司)；乙腈(色谱级，安徽天地高纯溶剂有限公司)；超纯水(自制)。

1260 型高效液相色谱仪(美国安捷伦科技有限公司)，具自动进样器(进样体积100 μL)和DAD 检测器；不锈钢色谱柱[150 mm×4.6 mm(i.d.)，内装4 μm C18填充物]；过滤器(滤膜孔径4.5 μm)；UV-1800型紫外可见分光光度计(日本岛津株式会社)；KH-25013 型超声波清洗器(昆山禾创超声仪器有限公司)；XS205 型电子分析天平(瑞士梅特勒-托利多集团)。

1.2 色谱操作条件

流动相为乙腈∶水=80∶20 (体积比)，流速1.0 mL/min，检测波长254 nm[5]，进样体积5 μL，柱温(30±2.0)℃。在上述色谱条件下，虫螨腈和虱螨脲的保留时间分别为4.5、4.1 min。

1.3 测定步骤

1.3.1 标准溶液的制备

分别称取0.02 g 虫螨腈标准样品和0.02 g 虱螨脲标准样品(均精确至0.002 g)，置于同一50 mL 容量瓶中，加入适量乙腈超声溶解，取出静置至室温，随后用乙腈定容至刻度线处，摇匀后过滤备用。

1.3.2 样品溶液的制备

准确称取0.1 g 480 g/L 虫螨腈·虱螨脲悬浮剂(精确至0.002 g)，置于50 mL 容量瓶中，加入适量乙腈超声溶解，取出静置，随后用乙腈定容至刻度线处，摇匀后过滤备用。

1.3.3 有效成分的测定

参照1.2 节中色谱操作条件，待仪器进入基线平稳状态后，多次注入数针标准样品溶液，计算相邻2 针标样溶液峰面积相对变化值K，直至K＜1.0%[6]。

1.3.4 有效成分的计算

分别取2 针标样溶液和试样溶液的峰面积进行平均，通过式(1)进行计算有效成分的质量分数[7]。

式中：X为有效成分的质量分数，%；A1为标准样品溶液中虫螨腈或虱螨脲对应的峰面积平均值；A2为样品溶液中虫螨腈或虱螨脲对应的峰面积平均值；m1为标准样品的质量，g；m2为样品的质量，g；w为标样中虫螨腈或虱螨脲的质量百分数，%。

2 结果与分析

2.1 波长的选择

通过对虫螨腈和虱螨脲进行全波段扫描，分别得到不同波长下虫螨腈和虱螨脲的紫外吸收光谱图(图1)。由图1 可知：虫螨腈和虱螨脲在254 nm 处吸光度较高，且检测灵敏度和稳定性较高。由于乙腈在截止波长处具有很强的末端吸收，考虑到谱图范围以及检测器的适宜波长，因此选择254 nm 作为检测波长，在此波长下，2 者吸收峰面积均较大，同时可以避免溶剂干扰吸收。

图1 虫螨腈和虱螨脲紫外吸收光谱图

2.2 流动相的选择

不同流动相及其比例对样品物质分离过程有着重要影响。根据虫螨腈的物化性质，480 g/L 虫螨腈·虱螨脲悬浮剂采用乙腈和水作为流动相。经测定，当水相比例小于20%时，分离效果较差，且虱螨脲出峰时间过早，导致与杂峰混合，无法精确检测；当水相大于20%时，虽然杂峰与有效成分分离效果有所改善，但虫螨腈出峰时间延迟，工作效率降低。因此，选定乙腈∶水=80∶20(体积比)作为流动相，流速为1.0 mL/min，此条件下样品出峰时间适宜，杂质与有效成分分离清楚，基线平稳，峰形尖锐对称，工作效率高(图2、图3)。

图2 虫螨腈和虱螨脲标样液相色谱图

图3 虫螨腈和虱螨脲试样液相色谱图

2.3 线性相关性

分别称取虫螨腈和虱螨脲标准样品各0.02 g(均精确至0.002 g)，置于50 mL 容量瓶中，用适量乙腈超声溶解后定容，分别移取此溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL 置于25 mL 容量瓶中，乙腈稀释后定容，摇匀过滤并按照上述色谱操作条件进行测试分析。以质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标分别绘制标准曲线，如图4 所示。可见，虫螨腈(虱螨脲)的质量浓度与其相应响应值之间表现出良好的线性相关性，虫螨腈线性回归方程为：y=11.988 1+7.186 1x，相关系数r为0.999 3；虱螨脲线性回归方程为：y=16.787 49+9.178 54x，相关系数r为0.999 8。

图4 虫螨腈和虱螨脲线性关系图

2.4 方法的精密度

准确称取5 份同一试样，在上述条件下进行平行测定，并分别计算有效成分的标准偏差与变异系数，结果如表1 所示。

表1 分析方法的精密度测试结果

可见，虫螨腈与虱螨脲的标准偏差分别为0.140 5 和0.031 6，变异系数分别为3.47%和3.76%，说明此方法精密度良好。

2.5 方法的准确度

准确称取5 份同一试样，按上述方法配制试样溶液，分别加入一定量虫螨腈和虱螨脲标准品，在1.2 节色谱条件下进行测定分析，结果如表2 所示。可见，虱螨脲平均回收率为99.45%，虫螨腈平均回收率为98.72%，该方法回收率均超过95%，准确度较高，符合产品质量检测标准。

3 结论

本文建立了同时检测480 g/L 虫螨腈·虱螨脲悬浮剂中2 种有效成分的高效液相色谱分析方法，并对此进行了验证。结果表明虫螨腈和虱螨脲相关系数分别为0.999 3 和0.999 8，标准偏差分别为0.140 5和0.031 6，回收率分别为98.72%和99.45%。此方法可以避免杂质干扰，简单快捷，具有良好的分离效果，同时准确度和精确度均能达到分析要求，可为工业生产中该产品的质量控制提供方法支撑。